菠菜叶片乙醇酸氧化酶的氧化甘油酸活性

首先从菠菜叶片中纯化了乙醇酸氧化酶（GO）。通过鉴定反应中氧的消耗以及反应产物H2O2的生成,证实菠菜GO具有氧化光呼吸途径中间代谢物甘油酸的活性。该氧化活性依赖于辅因子FMN和FAD,而不依赖核黄素和光黄素;其最适反应pH值为8．0,Km（甘油酸）值为7．14mmol／L,kcat值为1．04s^-1,活化能为17．29kJ／mol;草酸和丙酮酸对该氧化活性有明显的抑制作用,其中前者为典型的竞争性抑制。进一步通过两底物竞争作图表明：菠菜叶片GO氧化甘油酸反应和氧化乙醇酸反应为同一活性中心所催化。     

菜心叶片中乙醇酸氧化酶的多种组分

乙醇酸氧化酶（EC．1．1．3．1,GO）是光呼吸中的关键酶,过去对其电泳行为和等电点的报告互不一致。Grodzinski和Col－man（1972）将菠菜、烟草等植物部分纯化的GO酶液在pH8．3的聚丙烯酰胺凝胶中电泳,活性染色后出现两条活性带,两者对FMN的依赖性有一定差异。Kerr和Groves（1975）对豌豆叶片部分纯化的GO酶液进行等电聚焦电泳,表明其pI值大于9．6.Behrends等（1982）将绿色黄瓜子叶的酶液经聚焦层析,发现GO活性分布在pH8．7附近。但Nishimura等（1983）发现在pH8．9的凝胶中南瓜子叶GO不迁移,而在pH4．5的凝胶中则出现一…     

枯草芽孢杆菌SA-22 β-甘露聚糖酶的纯化及其特性

利用硫酸铵沉淀、羟基磷灰石柱层析、Sephadex G-75凝胶过滤和DEAE-52离子交换柱层析的方法,将枯草芽孢杆菌SA-22 β-甘露聚糖酶纯化了30.75倍,同时,该酶比活达到3478056 u/mg,收率达到23.43%。利用SDS-PAGE凝胶电泳和Sephadex G-75凝胶过滤的方法测得枯草芽孢杆菌SA-22 β-甘露聚糖酶的分子量分别为38 kD和34 kD。实验发现该酶的最适pH为6.5,在pH 5～10的范围内稳定;该酶最适温度为70℃,在50℃保温4h后其活力不变,在60℃保温4 h后剩余酶活为74.2%,70℃的酶活半衰期为3h。实验还发现Hg²⁺对酶活力有明显抑制作用。该酶对槐豆胶和魔芋胶的K_m和V_max值分别为11.30mg/mL, 4.76mg/mL和188.68(μmol·mL^-1·min^-1), 114.94(μmol·mL^-1·min^-1)。     

水稻叶片酸性磷酸酯酶活性及其部分特性

从水稻叶片部分纯化了水解磷酸烯醇式丙酮酸的磷酸酯酶,其Ｋｍ（ＰＥＰ）为０．１ｍｍｏｌ／Ｌ,最适ＰＨ５．３．在偏酸性ＰＨ条件下（ＰＨ４．０～７．２）稳定,对热亦较稳定．酶活性受Ｐｉ强烈抑制．它对其底物要求不专一,能水解多种含磷酯键的化合物．表明它是一种非专一性的酸性磷酸酯酶。各种含磷酯键的代谢物对酶活性起竞争性抑制作用,且表现出叠加性．Ｃｕ（２＋）、Ｚｎ（２＋）和Ｆｅ（２＋）抑制酶活性,Ｍｇ（２＋）、Ｍｎ（２＋）、Ｃａ（２＋）、Ｃｏ（２＋）和ＥＤＴＡ无影响．     

枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶活性中心氨基酸的化学修饰

运用化学修饰方法对枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶活性中心的结构进行了研究。结果表明,除了色氨酸和巯基(Cys)外,羧基(Asp/Glu)和丝氨酸残基亦是该酶活性必需氨基酸残基;尽管组氨酸残基对酶活性的维持有重要作用,但不位于酶的活性中心。     

枯草芽孢杆菌SA-22β-甘露聚糖酶的纯化及其特性

利用硫酸铵沉淀、羟基磷灰石柱层析、SephadexG 75凝胶过滤和DEAE 5 2离子交换柱层析的方法 ,将枯草芽孢杆菌SA 2 2 β 甘露聚糖酶纯化了 30 75倍 ,同时 ,该酶比活达到 34780 5 6u mg ,收率达到 2 3 4 3%。利用SDS PAGE凝胶电泳和SephadexG 75凝胶过滤的方法测得枯草芽孢杆菌SA 2 2 β 甘露聚糖酶的分子量分别为 38kD和34kD。实验发现该酶的最适pH为 6 5 ,在pH 5～ 10的范围内稳定 ;该酶最适温度为 70℃ ,在 5 0℃保温 4h后其活力不变 ,在 6 0℃保温 4h后剩余酶活为 74 2 % ,70℃的酶活半衰期为 3h。实验还发现Hg2 对酶活力有明显抑制作用。该酶对槐豆胶和魔芋胶的Km 和Vmax值分别为 11 30mg mL ,4 76mg mL和 188 6 8(μmol·mL- 1 ·min- 1 ) ,114 94(μmol·mL- 1 ·min- 1 )     

高等植物乙醇酸氧化酶与黄素单核苷酸的松弛结合

普查了 7个科 11种植物的乙醇酸氧化酶 (GO) ,发现其酶蛋白与黄素单核苷酸 (FMN)的结合均是松弛的 ;并据此特征找到了一种温和的制备完全脱FMNGO的新方法 ,酶液总活性回收可达 87.5 % ;外加FMN可使脱辅因子GO不同程度地恢复活性 ,恢复 5 0 %活性所需FMN的浓度为 8× 10 -7mol/L ,而当浓度大于 5× 10 -6mol/L时其复活作用达到 10 0 % ,表明两者间存在一个可逆的解离平衡。推测植物体内的FMN浓度可能是乙醇酸氧化酶活性的一个调节因子。     

萝卜块根中两个具溶菌酶活性的几丁质结合蛋白的纯化及其特性

通过亲和层析和羧甲基一纤维素离子交换层析从萝卜的块根中分离到两个具溶菌酶活性的酶组份：CBP1和CBP2。两者经SDS-PAGE均显示单一蛋白染色条带,其对应的分子量分别为26．9kD和24．8kD。两种蛋白除有溶菌酶活性外,还有几丁质酶活性,但无壳聚糖酶活性。各种类型的几丁质对CBP1和CBP2都有较强的吸附作用,而在还原／非还原的单向SDS-PAGE中却观察不到两者分子中存在二硫键。     

高等植物乙醇酸氧化酶与黄素单核苷酸的松弛结合

The binding condition between flavin mononucleotide (FMN) and protein moiety of glycollate oxidase (GO) was investigated in 11 species of higher plants from 7 families. A loose binding of FMN with GO was universally observed in all the plants. According to this character, a new efficient but mild method was established for preparation of FMN-free GO, which could produce 87.5% recovery of activity . FMN-free GO could be reactivated by adding FMN. For half reactivation 8×10 mol/L FMN was needed, and more than 5×10 mol/L for 100%. The result indicates that there exists a reversible dissociation balance between FMN and protein moiety of GO. Therefore, the concentration of FMN may act as a factor to regulate GO activity in higher plants.