rhIGF-1等电点的测定

目的：通过测定rhIGF-1等电点为例,建立一种快速测定蛋白质等电点的方法。方法：采用等电聚焦电泳（isoelectric focusing,IEF）和高效液相色谱（HPLC）连用的方法,主要以7．5％的凝胶浓度、3％的交联度及6％的两性电解质浓度配置凝胶,电泳后的凝胶经凝胶成像系统和HPLE分析确定目的条带及其pI值。结果：rhIGF-1的等电点为pI=8．20,pH梯度曲线线形回归方程为Y=0．0664X＋3．8217,相关系数r达0．9956,说明等电聚焦电泳测定结果准确。     

一组新的沙蚕蛋白酶同工酶的分离纯化与鉴定

分离纯化一组新的沙蚕蛋白酶同工酶,并对其性质进行鉴定.用硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和疏水层析技术从沙蚕中分离得到了沙蚕蛋白酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、高效液相色谱（HPLC）、等电聚焦电泳（IEF）和质谱分析（MS）鉴定,发现沙蚕蛋白酶由3个组分组成,均有纤溶活性,其等电点为3.5～4.5,分子量分别为29 248.75、29 007.66、28 954.17,肽指纹图谱分析发现,它们均为未知的新蛋白质,其中2个组分结构相似,具有较高的同源性,与另1个有不同.用抗原抗体反应鉴定其免疫原性,发现3个组分中有2个组分具有相同的免疫原性,另1个组分与2者不同.但3者具有相同的抗原决定簇,证明沙蚕蛋白酶由2个同工酶组成.以4种专一性的抑制剂对其进行抑制,检测酶的活性确定其酶学性质,发现其反应的适宜温度为40℃～50℃、适宜pH值为8～9.沙蚕蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶.     

烟管菌漆酶的分离纯化及部分酶学性质研究

烟管菌Bjerkandera adusta WZFF．W-Y11漆酶粗酶液经过丙酮分级沉淀、DEAE-Cellulose离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤,得到了三种电泳纯的漆酶同工酶,总酶活回收率达到65．5％,其中LacA平均纯化了29．2倍,LacB纯化了5．1倍,LacC纯化了18．5倍;三种同工酶的分子量分别为LacA：68．7kDa、LacB：80．2kDa、LacC：77．2kDa。LacA、LacC氧化愈创木酚的Km,大于氧化ABTS的Km,最适作用温度在45．70℃,最适反应pH3．0-5．5,65℃时LacC比LacA稳定,LacC在pH3．5—6．0稳定,LacA在pH5．0-9．0稳定,A1^3对LacA、LacC的酶活有促进作用,C1、Fe^3＋、Hg^2＋抑制LacA、LacC的酶活,Cu^2＋抑制LacC的酶活,而对LacA的活性没有明显影响。     

螺旋藻氢酶的纯化与生化特性

本研究用DE－52、SephadexG－75、SephadexG－100柱层析从螺旋藻分离纯化得到比活性提高200倍的氢酶,回收率为14％。凝胶柱层析和SDS－PAGE显示一条带,其分子量为56kd。氨基酸分析结果表明酸性氨基酸比例较大,等电聚焦测定结果证明其等电点为pH4．2。吸收光谱结果显示氢酶是铁硫蛋白。甲基紫晶（MV）是氢酶催化放氢的最佳电子供体,其Km（MV）为0．31mmol／L,最适pH值为7．5－8．0。     

人前列腺生长因子的分离纯化及生物活性鉴定

从人良性增生前列腺组织中经硫酸铵沉淀和肝素－琼脂糖凝胶层析纯化出人前列腺生长因子（ｈＰＧＦ）,纯化倍数约１０００倍,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳示分子量约为１７ｋＤ、等电点同标准ｂＦＧＦ,利用分离培养的人前列腺间质成纤维细胞进行活性鉴定,发现以１．３～１．７ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ洗脱部分为ｈＰＧＦ,活性最高,对间质成纤维细胞有显著刺激增殖作用。     

人前列腺生长因子的分离纯化及生物活性鉴定

从人良性增生前列腺组织中经硫酸铵沉淀和肝素－琼脂糖凝胶层析纯化出人前列腺生长因子（ｈＰＧＦ）,纯化倍数约１０００倍,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳示分子量约为１７ｋＤ、等电点同标准ｈＦＧＦ。利用分离培养的人前列腺间质或纤维细胞进行活性鉴定,发现以１．３￣１．７ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ洗脱部分为ｈＰＧＦ,活性最高,对间质成纤维细胞有显著刺激增殖作用。     

人参果胶中蛋白质与多糖关系的研究

从人参（Panax ginseng)热水根取物中,分离出两个蛋白多糖级份（PA,PB）,琼脂糖4B凝胶柱层析结果表明,二者均为单一分布峰,通过氨基酸分析,气相色谱分析,β-消去反应,部分酸水解,果胶酶水解,聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳及等电聚焦电泳等生化分析,确定PA,PB均含有苏氨酸与多糖中糖残基以－O－糖甙键相连的共价结合蛋白质;另外PB中尚存在另一种形式蛋白质,其中精氨酸等碱性氨基酸丰富（占PB中蛋白质59．9％）,圆盘电泳结果表明：这部分蛋白质与多糖中的半乳糖醛酸残基靠静电力结合,等电点为9．1。     

人参果胶中蛋白质与多糖关系的研究

从人参（Panax ginseng)热水根取物中,分离出两个蛋白多糖级份（PA,PB）,琼脂糖4B凝胶柱层析结果表明,二者均为单一分布峰,通过氨基酸分析,气相色谱分析,β-消去反应,部分酸水解,果胶酶水解,聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳及等电聚焦电泳等生化分析,确定PA,PB均含有苏氨酸与多糖中糖残基以－O－糖甙键相连的共价结合蛋白质;另外PB中尚存在另一种形式蛋白质,其中精氨酸等碱性氨基酸丰富（占PB中蛋白质59．9％）,圆盘电泳结果表明：这部分蛋白质与多糖中的半乳糖醛酸残基靠静电力结合,等电点为9．1。     

冬虫夏草菌丝体γ-谷氨酰转肽酶的探测和部分性质研究

本研究首次发现冬虫夏草发酵菌丝体含有较高活力的γ-谷氨酰转肽酶（简称CSGT）,并且通过硫酸铵分级沉淀、疏水层析、凝胶过滤层析、阴离子交换层析和制备电泳的提取纯化程序,将CSGT纯化了2300倍,然后对CSGT的基本酶学性质进行了研究。CSGT的稳定pH范围和温度范围分别为pH8-11和0-20℃, 当pH 9-10 、30℃并且以L-谷氨酸-对-硝基苯胺（简称GpNA）和双甘肽为底物时CSGT的活力达到最大值。几种还原剂均能激活CSGT,说明其活性中心含有巯基。Zn2+, Cu2+, Hg2+ , Mn2+ 等金属离子均强烈抑制CSGT活性,而K+, Ca2+, Mg2+ 和Na+等对CSGT活性没有影响。     

乳酸菌Enterococcuse faecalis TN-9低温蛋白酶的提纯及性质

对产自乳酸菌Enterococcuze fecalis TN-9的蛋白酶,进行了硫酸铵沉淀,DEAE—Sephadex A-25以及DEAE Cellulofine A-500离子交换层析的3步纯化和特性研究。纯化酶Native PAGE显示1条蛋白带。SDSPAGE和凝胶层析分子量分别为30ku及69ku。纯化酶最适作用温度为30℃,最适作用PH为7．5～8．0,在pH6．0～9．5和45℃以下条件下稳定,在0℃下显示了6．1％的相对活性,60℃以上热处理完全失去酶活。该酶被EDTA-2Na,Hg^2＋、Cu^2＋、Ni^2＋、Ag^2＋、Co^2＋及Pepstatin A不完全抑制。Zn^2＋对蛋白酶具有明显的激活作用。纯化酶作用于偶氮酪蛋白的Km和Vmax分别为0．098％和72mg／（h·mg）。该酶为N末端VGSEVTLKNS的明胶酶（Gelatinase）的一种,性质属于低温蛋白酶。