HER2在人肺腺癌A549细胞培美曲塞继发性耐药中的作用研究

目的:通过体外诱导耐药建立肺腺癌A549细胞系的培美曲塞耐药细胞株,并进一步研究其耐药性发生与HER2/neu之间的关系.方法:通过高浓度反复间歇诱导法建立A549的培美曲塞耐药细胞系.CCK8法检测耐药性、绘制生长曲线,计算倍增时间;流式细胞术法检测细胞周期分布及细胞凋亡水平;RT-PCR法检测耐药株及亲本株HER2/neu的mRNA表达.结果:历经6个月建立了耐药指数为6.7倍的A549/PEM细胞系,其较亲本株的倍增时间延长(33.5± 1.71hvs27.1± 1.15h);流式细胞术检测结果显示:与亲本株比较,A549/PEM处于G1期的细胞比例增加(66.03± 1.61％vs57.92± 1.73％),S期细胞比例降低(30.05± 1.25％vs 37.51±1.31％),差别均有统计学意义(P＜0.05);在PEM作用24h后,A549与A549/PEM细胞凋亡率分别为23.52％和10.99％,差别有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测结果示:A549/PEM较亲本株HER2/neu基因的mRNA表达水平增高(P＜0.05).结论:A549/PEM与亲本株的生物学特性有差别;肺腺癌培美曲塞继发性耐药的产生可能与HER2/neu表达上调有关.     

乳腺肿瘤组织标本库与数据库的建立及信息化管理

目的:随着基础和临床研究的深入开展,拥有完整基因信息的组织标本成为了肿瘤研究工作的基础.建立电子信息化管理的乳腺肿瘤组织标本库和数据库,为临床和科研收集、保存和管理标本资源.方法:标准化收集手术切除的乳腺肿瘤组织、正常腺体组织,以及患者血液标本,预处理后保存于-80℃冰箱中.每3个月从标本库中随机抽取5例标本,提取标本的总RNA,琼脂糖凝胶电泳验证总RNA质量;运用免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)检测标本中人表皮生长因子-2(Human epidermal growth factor receptor,HER-2 or c-erbB-2)和Ki67的表达,并与术后免疫组化结果进行比较.同时利用Epidata软件管理乳腺肿瘤组织标本库.结果:收集恶性肿瘤507例,良性肿瘤212例,血液标本9347份,并建立了一套高效的信息化管理系统.总RNA电泳结果显示28 S和18S亚基条带清晰明亮,5S条带很弱,表明标本中的RNA质量较高,无降解.免疫组化结果显示标本中的HER-2和Ki67的表达与术后免疫组化结果情况吻合,存储的标本质量良好.结论:建立的实验标本收集、储存流程是有效可行的,收集的标本质量是可靠的,管理方法是高效实用的,为乳腺肿瘤基础和临床研究提供质量可靠的标本来源,可为乳腺肿瘤研究提供良好的服务平台.     

抑制c-FLIP基因促进TRAIL诱导的乳腺癌细胞凋亡(英文)

目的:探讨抑制c-FLIP的表达对TRAIL诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法:重组腺病毒Ad-c-FLIP-siRNA和Ad-sTRAIL单独及联合感染对TRAIL耐药的乳腺癌细胞MCF-7,应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测病毒感染后各组细胞内c-FLIP和TRAIL的mRNA表达变化;MTT法和结晶紫染色法检测MCF-7细胞活性,Hoechst 33258荧光染色检测各组细胞的凋亡情况。结果:与阴性对照组比较,c-FLIP-siRNA组和c-FLIP-siRNA+TRAIL组c-FLIP的mRNA相对表达量分别是(0.32±0.16)和(0.39±0.48)倍;TRAIL组和c-FLIP-siRNA+TRAIL组TRAIL的mRNA相对表达量分别是(96.21±1.54)和(87.33±1.66)倍;TRAIL组、c-FLIP-siRNA组及c-FLIP-siRNA+TRAIL组的抑制率(%)分别为(60.27±1.25)、(11.34±1.74)及(74.91±2.12)。对比阴性对照组的凋亡率(3.12±1.54),TRAIL组(12.79±2.46)和c-FLIP-siRNA+TRAIL组(25.50±3.17)组的凋亡率明显增高(P0.05),c-FLIP-siRNA组(6.85±2.82)的凋亡率变化不明显,差异无统计学意义(P0.05)。结论:siRNA抑制c-FLIP基因的表达能显著促进TRAIL对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的诱导作用。     

一类捕食-食饵系统的定性分析

本文用定性分析的方法研究了一类捕食-食饵系统的全局性质,给出了该系统不存在极限环以及存在唯一稳定极限环的条件．     

ICAM-1K469E 位点A 等位基因可降低EV71 手足口病发生率

目的:研究ICAM-1基因K469E位点、MCP-1A2518G位点基因多态性及sICAM-1、MCP-1在血清中表达水平与EV71手足口病的关系,探讨EV71型手足口病的遗传易感因素。方法:运用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测急性期EV71感染阳性的手足口病患儿和正常儿童中ICAM-1K469E位点及MCP-1A2518G位点碱基变异情况,同时采用双夹心抗体法(ELISA)检测血清sICAM-l和MCP-1水平。结果:EV71手足口病组患儿血清中sICAM-l和MCP-1水平均显著高于正常对照组(P均<0.01)。EV71手足口病组ICAM-1K469E位点中,A等位基因的频率显著低于对照组(x2=6.897,P<0.01)。EV71手足口病组患儿MCP-1基因型分布、等位基因频率与对照组比较均无统计学意义(P>0.05)。结论:sICAM-1表达水平和其基因K469E位点多态性与EV71手足口病有关,A等位基因可降低EV71手足口病发生率。MCP-1表达水平与EV71手足口病感染有关,但MCP-1A-2518G位点基因多态性与EV71手足口病感染无关。     

肠道病毒71型感染小鼠IL-6,TNF-α和脑细胞凋亡的影响

目的:观察肠道病毒71型(EV71)感染小鼠外周血IL-6,TNF-α平的变化及脑细胞凋亡情况,以探讨EV71中枢损害可能的发病机制.方法:建立小鼠EV71感染模型,小鼠根据不同处理因素分为对照组和实验组,用RT-PCR检测感染1天、3天、5天、7天的小鼠脑组织的EV71RNA;分别收集外周血,用ELISA法检测血清细胞因子IL-6,TNF-α含量;制备单细胞悬液,采用Annexin V/PI双染结合流式细胞术(FcM)测定小鼠脑细胞的凋亡情况.应用方差分析进行统计学处理.结果(1)实验组于感染第5天和第7天在脑组织中可检测到病毒RNA,对照组脑组织未检测到病毒RNA.(2)实验组血清IL-6,TNF-α平明显高于对照组(P<0.05),并于24-72h达高峰,此后逐渐下降,于第7天时基本降至正常.(3)实验组小鼠于感染第3天开始出现脑细胞凋亡,于第5天达高峰,第7天时脑细胞凋亡反而降低.结论:EV71具有嗜神经性,EV71感染能促进单核-巨噬细胞分泌IL-6.TNF-α介早全身炎症反应,EV71感染过程中存在脑细胞凋亡现象,可能是其中枢损害的机制之一.     

RalA RhoC 在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的:观察RalA和RhoC基因在非小细胞肺癌组织细胞中的表达变化,探讨它们的表达在非小细胞肺癌发展和侵袭转移中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测RalA、RhoC在60例非小细胞肺癌患者的肿瘤组织和癌旁组织细胞中的表达,了解其与非小细胞肺癌临床病理学指标的关系。结果:RhoC在非小细胞肺癌组织细胞中的表达较癌旁组织显著增高(P<0.05),且与淋巴结的转移、TNM分期和分化程度密切相关(P<0.05)。而RalA在非小细胞肺癌组织细胞中的表达量低于癌旁组织(P<0.05),与淋巴结转移无明显相关(P>0.05)。二者在鳞、腺癌中表达均无差异(P<0.05)。结论:肺癌组织细胞中RhoC表达升高及RalA表达异常下调与非小细胞肺癌的发生、发展及侵袭机制关系密切。     

菏泽地区2009年肠道病毒71型与其他肠道病毒所致手足口病临床差异研究

目的:探讨EV71引起小儿手足口病与其他肠道病毒所致手足口病的临床特点的差异.方法:回顾性分析2009年3月-9月菏泽地区各定点医院收治的病原学检测为阳性的320例小儿手足口病的临床资料,筛出EV71感染的手足口病患儿进行分析,其他肠道病毒所致手足口痛患儿作为对照组.结果:菏泽地区2009年抽取的病原学检测为阳性的320例患儿,肠道病毒71型引起手足口病占106例,其余为其他肠道病毒所致手足口病.(1)男女发病基本相同,发病年龄1～3岁居多,农村患儿占绝大多数.(2)EV71感染的患儿临床主要表现高热、神经系统症状、无皮疹,大多数外周血象高、血糖高,可合并心肌损害,心电图异常、部分发现胸片、脑电图及核磁异常,部分符合重症手足口病标准.(3)其他肠道病毒感染的惠儿临床症状以皮疹、低热、上感症状为主,少数患儿有精神差,基本不出现神经系统症状,少数发现外周血象高、血糖高、合并心肌损害,一般胸片不会发现异常.(4)56例出现神经系统症状的患儿收集脑脊液进行两次RT-PCR扩增,发现50例EV71阳性.结论:EV71导致的手足口病,病情凶险,易致神经损害及肺水肿,早期识别重症病例,及时救治,普及病原体的检测对提高诊治能力,加强疾病的认识,对减少致残率及死亡率很有帮助.     

应用实时荧光定量RT-PCR检测宫颈癌及其外周血中VEGF表达的研究

目的:研究血管内皮生长因子在宫颈癌患者癌和癌旁组织及外周血循环细胞中的表达情况,分析其在肿瘤生长与转移中的作用。方法:采用基于TaqMan探针技术的实时荧光定量RT-PCR法检测了50例宫颈癌患者癌及癌旁组织和40例正常宫颈组织标本中VEGF mRNA的表达情况及其对应的外周血中的VEGF mRNA表达,分析其与临床病理参数之间的关系。结果:宫颈癌组织及癌旁组织中VEGF mRNA的表达水平无明显差异,但均与正常宫颈组织的表达水平差异有显著性;宫颈癌组织中VEGF mRNA的表达与肿瘤的组织学类型无明显的相关性;而与肿瘤的临床病理分期、病理分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径、深肌层浸润间均呈显著的正相关。宫颈癌患者外周血中VEGF的表达明显高于对照组水平,与淋巴结是否转移密切相关,但与其他临床病理参数无关。结论:实时荧光定量RT-PCR可以敏感且特异性的检测出宫颈癌组织及外周血中VEGF mRNA的表达,且方法准确可靠,操作方便,在肿瘤的微转移的诊断监测方面有一定的应用价值。VEGF有可能成为治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点。     

MMP-9-1562位点T等位基因与儿童EV71重症脑炎易感性关系的研究

目的:研究基因MMP-9-1562位点基因多态性与肠道病毒71型(EV71)脑炎的关系,探讨不同基因型对EV71脑炎患病风险及病情程度的影响.方法:运用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测EV71感染阳性病毒性脑炎患儿及正常对照组儿童基因组MMP-9-1562位点碱基变异情况.结果:EV71脑炎重症组MMP-9-1562位点T等位基因频率分布明显高于EV71脑炎轻症组(16％VS7.5％,OR 2.362,95％CI 1.170-4.768,P＜0.05).MMP-9-1562位点T等位基因携带者感染EV71后可明显增加神经系统并发症的发生率.EV71脑炎患儿MMP-9-1562位点T等位基因频率分布与正常对照儿童比较无明显差异.结论:MMP-9-1562位点T等位基因携带者在感染EV71后易发展为重症中枢神经系统感染;MMP-9-1562位点T等位基因可增加EV71感染后神经系统并发症的发生率;MMP-9-1562位点单核苷酸多态性与EV71脑炎的发病率无关.