大鼠尿激酶SYBR Green I real time RT-PCR引物的设计

设计用于SYBR Green I法实时定量逆转录多聚酶链反应(QRT-PCR)检测大鼠尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)mRNA的引物。从基因库获取靶基因及相关序列,充分收集争分析相关生物信息学数据,应用Oligo 6.22设计出一对长度为21bp的引物,其GG含量为52.4%;上下游引物3’最稳定二聚体和及发夹结构的能量分别为-1.5、-0.40 kcal/mol和-3.5、-O.90 kcal/mol,引物间最稳定二聚体为-3.1 kcal/mol。5’端和中间△G值较高,高于3’端△G;引发效率分别455和403。实验证明,该引物能够高效、特异地实现对靶序列的检测,适用于SYBR Green I法实时定量检测(uPA)mRNA。     

人精子中尿激酶型纤溶酶元激活因子的免疫组织化学定位观察

本文采用免疫组织化学和免疫电镜对正常人精子中尿激酶型纤溶酶元激活因子（ＵＰＡ）的分布进行了定位观察。结果发现尿激酶型纤溶酶元激活因子分布在精子顶部体内外膜和精子头部浆膜上,且精子尾部浆膜上也有阳性着色,提示尾部浆膜上也有尿激酶型纤溶酶元激活因子的存在。推测精子中尿激酶型纤溶酶元激活因子可能与精子的运行、获能、顶体反应及受精有关联。     

大鼠尿激酶SYBR Green Ⅰ real time RT—PCR引物的设计

设计用于SYBR Green Ⅰ法实时定量逆转录多聚酶链反应（QRT—PCR）检测大鼠尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）mRNA的引物。从基因库获取靶基因及相关序列,充分收集和分析相关生物信息学数据,应用Oligo 6．22设计出一对长度为21bp的引物,其GC含量为52．4％;上下游引物3’最稳定二聚体和及发夹结构的能量分别为-1．5、-0．40kcal／mol和-3．5、-0．90kcal／mol,引物间最稳定二聚体为-3．1kcal／mol。5’端和中间AG值较高,高于3’端AG;引发效率分别455和403。实验证明,该引物能够高效、特异地实现对靶序列的检测,适用于SYBR GreenⅠ法实时定量检测（uPA）mRNA。     

t(14;21)平衡易位携带者体细胞和生殖细胞的细胞遗传学研究

15%-20%的妊娠因为自发流产而中止,其中约50%是因为染色体异常所致.夫妇中的一方为平衡的染色体异常携带者时,即可能产生不平衡的配子和胚胎,临床症状可以有不同程度的变化：如不育、反复流产、甚至产出染色体综合症的患儿.以临床接诊的一对具有反复自然流产史夫妇为研究对象,常规进行精液、激素水平检测.取患者外周血淋巴细胞用RPMI 1640培养基进行短期培养,经低渗、固定处理制备染色体标本片,对染色体数目和结构进行核型分析.选用特异的21qter和14qter DNA标记作为探针,对患者外周血淋巴细胞中期染色体进行FISH分析.运用FISH技术对患者精子细胞进行研究,配合流式细胞分析技术对精细胞DNA组份进行检测,分析配子中遗传物质的组成及各种类型配子的比例.结果发现女方核型正常为46,XX,男方核型为罗伯逊易位的携带者45,XY-14,-21,＋t（14;21）.患者外周血体细胞的分裂相染色体FISH显示一个细胞中分别存在1个红色的21qter和1个绿色的14qter杂交信号,另外有1个红色和1个绿色信号共同存在于一条由易位形成的亚中着丝粒染色体上.在患者精液样本的精细胞FISH研究中,可以观察到5种不同类型的杂交信号,异常的配子的种类与理论推断相同,但各型所占的比例有其特点,结合精液中精细胞流式细胞术的分析表明,平衡的单倍体配子占71%,不平衡的配子占29%.通过国内外文献资料统计,对罗伯逊易位染色体的常见和罕见类型进行综述,为其生育的临床治疗方案提供建议.     

siRNA干扰小鼠睾丸支持细胞μPA表达的初步研究

该研究在验证小鼠睾丸支持细胞TM4有内源性uPA基因表达的基础上,针对uPAmRNA靶序列设计三段不同的siRNA序列（si-uPA）,通过瞬时转染TM4细胞,筛选确定uPA基因的有效干扰序列。将该有效干扰序列进行时效、量效实验,观察siRNA对TM4fi细胞uPAmRNA和蛋白表达的影响。结果显示,siRNA的最佳转染浓度为50nmol／L。三种si—uPA转染TM4细胞后,μPAmRNA和蛋白表达量均较空白对照组明显下降（P〈0．05）,以si—μPAl作用最为明显。si—μPAl转染24h后,转染组细胞μPAmRNA的表达均较对照组显著降低,其中100nmol／L组抑制效果最为明显,抑制率达到70％;随转染时间的延长,μPAmRNA表达持续降低,转染72h后,三组转染细胞μPAmRNA表达量分别为对照组的153．9％、35．3％和27．7％（P〈0．05）。该研究成功筛选出针对μPAmRNA靶序列的有效干扰序列,抑制效应持续至72h;同一时间点内,抑制效应随转染浓度的增加而增强,表现出良好的量效关系。     

中药鹿藿的抑菌实验研究

研究发现中药鹿藿在体外可瞬间抑制人类精子的运动。为了研究中药鹿藿的抑菌作用,本实验对几种女性生殖道常见致病菌和条件致病菌进行了体外抑菌实验,发现鹿藿对金黄色葡萄球菌、淋病奈瑟氏菌和大肠杆菌有抑制作用,并可抑制常见耐药菌株的生长。金黄色葡萄球菌的MIC折合生药为31.25mg/mL,大肠杆菌的MIC250mg/mL,淋球菌的MIC为31.25mg/mL。结果表明中药鹿藿在能有效抑制精子运动的浓度可以抑制某些男、女性生殖道常见细菌的生长。