大肠杆菌来源的人乳头瘤病毒11型病毒样颗粒的制备及其免疫原性

摘要：【目的】 利用大肠杆菌表达系统制备人乳头瘤病毒11型病毒样颗粒（HPV11 VLPs）,并对其免疫原性和所诱导中和抗体的型交叉反应性进行研究。 【方法】 在大肠杆菌ER2566中非融合表达HPV11-L1蛋白,并通过离子交换层析,疏水相互作用层析其进行纯化。纯化后的HPV11-L1经体外组装形成病毒样颗粒,通过动态光散射,透射电镜检测其形态,并通过多种HPV型别假病毒中和实验评价HPV11 VLPs的免疫原性及型交叉反应性。 【结果】 HPV11-L1蛋白在大肠杆菌中可以以可溶形式表达。经过硫酸铵沉     

HPV16/18假病毒中和抗体检测方法的验证

目的应用假病毒中和法建立检测血清HPV16/18中和抗体滴度检测方法并进行验证。方法分别采用不同批次假病毒以及不同代次细胞对不同滴度的HPV16/18阳性血清进行多次平行检测,考察这些因素对检验结果的影响;同时通过对抗HPV16/18双价阳性血清、抗HPV16单价阳性血清和抗HPV18单价阳性血清的检测进一步评估中和抗体检测法的准确性、特异性及重复性。结果不同批次假病毒和不同代次细胞对检验结果的影响均在4倍范围内,此外该检测法的准确性、特异性、重复性均在可接受标准范围之内。结论建立的假病毒法可满足中和抗体效价检测的要求,可用于评价疫苗的免疫效果。     

SARS冠状病毒S蛋白片段2的表达纯化与多克隆抗体的制备

采用RTPCR技术从SARS冠状病毒基因组扩增编码S蛋白的S2基因片段(第2170到2814位碱基),克隆到pMD18T载体并测序。用限制性内切酶消化后,S2基因亚克隆至表达载体pGEX4T2,转化大肠杆菌JM109,筛选鉴定阳性菌落。扩增培养含pGEXS2质粒的JM109大肠杆菌,经IPTG诱导,超声破菌,GSHSepharose亲和层析纯化目的蛋白,Westernblot检测SARS患者血清可以识别纯化的蛋白。用此蛋白免疫NIH小鼠,获得了高滴度抗GSTS2抗体的血清,为进一步研究SARS冠状病毒的亚单位疫苗奠定基础。     

人乳头瘤病毒16型假病毒中和实验的建立和初步应用

探讨了应用多质粒磷酸钙共转染方法在293FT细胞中生产HPV16(human papillomavirus type 16)假病毒。蛋白印迹检测显示在转染后细胞的裂解上清中具有很好的L1蛋白活性,通过透射电镜可观察到形态与天然病毒粒子相似的假病毒颗粒。对293FT细胞的感染实验显示,该假病毒可有效将EGFP报告质粒导入靶细胞中进行表达,经测定其滴度约为2×107TU/mL。通过与4株HPV16对照单抗的中和实验证明该假病毒可有效应用于中和实验。应用该方法从18株抗HPV16L1的单克隆抗体中鉴定获得了2株中和单抗3D10、PD1。所建立的HPV16假病毒生产和中和实验方法具有快速高效、低成本和易于检测的优点,适于进行较大规模应用,为快速准确鉴定HPV16中和单抗和候选疫苗的免疫保护效果提供了有效手段。     

SARS冠状病毒S蛋白片段2的表达纯化与多克隆抗体的制备

采用RT-PCR技术从SARS冠状病毒基因组扩增编码S蛋白的S2基因片段(第2170到2814位碱基),克隆到pMD18-T载体并测序.用限制性内切酶消化后,S2基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌JM109,筛选鉴定阳性菌落.扩增培养含pGEX-S2质粒的JM109大肠杆菌,经IPTG诱导,超声破菌,GSH-Sepharose亲和层析纯化目的蛋白,Western-blot检测SARS患者血清可以识别纯化的蛋白.用此蛋白免疫NIH小鼠,获得了高滴度抗GST-S2抗体的血清,为进一步研究SARS冠状病毒的亚单位疫苗奠定基础.