酶联免疫破伤风抗体定量试剂的研制及应用

制备一种精确的破伤风抗体定量试剂,用于人源破伤风抗体的定量及人群破伤风抗体水平的测定。以人源破伤风免疫球蛋白国家标准品建立定量反应曲线,经系统优化后建立双抗原夹心法定量检测系统。定量反应曲线显示,抗体浓度在10~120m IU/m l之间,相关系数r=0.9993。精密度(CV)≤7%。实际应用验证,未经(TTC)免疫的献血员中,具有保护性抗体水平(0.01 IU/m l)的比例只占12.2%。经3针(TTC)免疫后,抗体水平均大于0.01 IU/m l,经动物体内中和试验法(NT)定量的3批破伤风免疫球蛋白,用制备的酶联免疫破伤风抗体定量试剂测定,其回收率分别为109%、98%和93%。结论,该试剂可用于破伤风抗体的精确定量。     

恒磁场增强心肌梗死大鼠骨髓间充质干细胞移植后心脏功能改善

目的：研究恒磁场对心肌梗死大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）移植后心脏功能的影响。方法：取180g,9-12周龄雄性SD大鼠骨髓,以密度梯度离心分离出单个核细胞（MNCs）,于体外培养并传代培养出骨髓间充质干细胞（MSCs）。制作大鼠心肌梗死模型,将1.5×106BMSCs注射入梗死梗死区周围,分为磁场照射＋BMSCs植入组、BMSCs植入组及空白对照组。4周后处死动物,每组5只大鼠。磁场照射组用0.4 T恒磁场置于心前区30 min,每日1次,共7天。用颈动脉插管法测定心脏功能,Masson三色染色测定梗死面积,VWF VIII染色计算血管密度。结果：与对照组相比BMSCs组以及磁场组均可以显著提高左心室收缩压（LVSP）,dp/dtmax以及-dp/dtmax,减少LVEDP（P〈0.05）。但是,磁场组与BMSCs组相比LVSP,左心室内压最大上升速率（dp/dtmax）以及左心室内压最大下降速率（-dp/dtmax）增高,左心室舒张末压（LVEDP）减少（P〈0.05）。与对照组相比BMSCs组以及磁场组均可以显著提高减少心梗面积（P〈0.05）。磁场组与BMSCs组相比心梗面积减少（P〈0.05）。与对照组相比BMSCs组以及磁场组均可以显著提高增加血管密度（P〈0.05）。磁场组与BMSCs组相比血管密度增加（P〈0.05）。结论：恒磁场具有加强移植BMSCs改善心脏功能的作用。     

异氟烷预处理对电磁脉冲辐射所致脑损伤的保护作用研究

目的:探讨异氟烷预处理对电磁脉冲辐射所致脑损伤的保护作用。方法:选取成年雄性SD大鼠48只,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12),分别为:假辐照组(CON组)、电磁辐照组(EMP组)、异氟烷预处理组(IP组)和异氟烷预处理+电磁辐照组(IP+EMP组)。EMP组场强为400 KV/m,脉冲为200次,连续辐照3天;IP组吸入2.0%异氟醚2h;IP+EMP组吸入2.0%异氟醚2 h,24 h后制备EMP损伤模型。于辐照后24 h处死大鼠,每组随机抽取3只大鼠,取脑组织,采用ELISA法检测大鼠海马IL-6和TNF-α的表达变化;尼氏染色法观察大鼠海马区神经元的凋亡;采用Western blot法检测大鼠海马区BDNF蛋白的表达情况;采用免疫荧光法检测大鼠海马区BDNF细胞水平的表达。结果:与CON组比较,EMP组、IP组、IP+EMP组的IL-6和TNF-α的表达增高,尼氏小体减少,BDNF蛋白及细胞水平的表达均下调(P0.05);与EMP组比较,IP组和IP+EMP组IL-6和TNF-α的表达降低,尼氏小体增多,BDNF蛋白及细胞水平的表达上调(P0.05)。结论:异氟烷预处理可减轻电磁脉冲辐射所致脑损伤,其机制可能与减轻大鼠炎症反应有关。     

牛血清蛋白酶联免疫试剂盒性能的验证

为了全面验证研制的牛血清蛋白(BSP)酶联免疫试剂盒的性能,由3个部门6人协作进行了验证。结果表明,,6人进行的18次试验全部满足BSP-ELISA试剂盒的质控标准,达标率100%;6名实验人员对3、4、5、10、20ng/ml浓度的BSP标准品进行测定,结果变异系数在1.96%~6.24%之间,精密度较好;回收率在94.8%~98.7%之间,准确度理想,测量限量为3ng/ml。该试剂盒与人血白蛋白、卵清蛋白等均无交叉反应,对BSA、B-IgG特异性蛋白的检测回收率为101.2%和94.7%;与牛血清白蛋白试剂盒对比测定11种疫苗总计108批,符合率为96.3%,针对不同疫苗,BSP残余量约为BSA的1.12~3.13倍,验证结果表明,该试剂盒可检测疫苗中BSP而不仅是BSA,能更全面客观地反映疫苗中牛血清的真实情况,有利于疫苗生产的严格质量监控。     

亲和层析法用于噬菌体抗体库的筛选

本研究报道一种基于固定化金属亲和层析(IMAC)的噬菌体抗体库液相筛选方法。将纯化的带有His标签的抗原与噬菌体抗体库混合,噬菌体抗体与抗原充分结合后再加入亲和介质,使噬菌体抗体抗原复合物通过His标签与介质结合,然后通过充分洗涤去除非特异性噬菌体抗体,最后将特异性噬菌体抗体洗脱下来,感染TG1,进行下一轮筛选。整个筛选过程中抗原与抗体的结合在液相中完成,不仅消除了固相介质对抗原表位的影响,也更有利于噬菌体抗体与抗原的充分作用。将此方法应用于HEV NE2蛋白特异性人源噬菌体抗体的筛选,抗原竞争ELISA,阳性血清阻断,可溶性单链抗体表达检测及测序结果表明,最终获得2个特异性人源抗体。     

污泥厌氧消化中同型产乙酸菌富集研究

在市政污泥厌氧消化过程中,采用三阶段选择性富集同型产乙酸菌,通过监测培养过程中pH值、挥发性脂肪酸、关键酶的活性以及不同碳源利用率等,研究同型产乙酸菌在系统中的累积情况.实验数据表明:经过40 d的富集培养,pH值稳定在8.0,乙酸含量逐渐趋于稳定,占COD的比例为46.4％,同型产乙酸菌对底物的利用率达到了87％,乙酸激酶和乙酰磷酸转移酶呈现明显上升的趋势.结果显示,通过本方法可在市政污泥中有效地富集同型产乙酸菌.     

大肠杆菌来源的人乳头瘤病毒11型病毒样颗粒的制备及其免疫原性

摘要：【目的】 利用大肠杆菌表达系统制备人乳头瘤病毒11型病毒样颗粒（HPV11 VLPs）,并对其免疫原性和所诱导中和抗体的型交叉反应性进行研究。 【方法】 在大肠杆菌ER2566中非融合表达HPV11-L1蛋白,并通过离子交换层析,疏水相互作用层析其进行纯化。纯化后的HPV11-L1经体外组装形成病毒样颗粒,通过动态光散射,透射电镜检测其形态,并通过多种HPV型别假病毒中和实验评价HPV11 VLPs的免疫原性及型交叉反应性。 【结果】 HPV11-L1蛋白在大肠杆菌中可以以可溶形式表达。经过硫酸铵沉     

纤维素糖化技术的瓶颈与酶活表征

纤维素作为自然界广泛存在的一种可再生资源,是重要的可替代工业原料,因此,纤维素糖化技术研究始终是人类关注的热点问题。针对天然纤维素生物降解研究中所面临的关键性问题,借鉴淀粉糖化技术的研究思路,比较和探讨了影响纤维素生物降解的技术瓶颈和真纤维素酶活性的表征,提出了纤维素生物转化和纤维素酶筛选的新途径。     

电磁脉冲诱导大鼠心肌闰盘Cx43连接蛋白的上调

目的:探讨电磁脉冲(EMP)对SD大鼠心肌闰盘及主要连接蛋白Cx43的影响.方法:将雄性SD大鼠35只,随机分为对照组和EMP辐照组,EMP辐照组又分为照后即刻、1h、3h、6h、12h、24h组,每组5只大鼠.应用EMP模拟发生器对EMP辐照组大鼠进行辐照,场强为200 kV/m、前沿15 ns、脉宽7-8 ns、脉冲次数200次,脉冲间隔为7s,麻醉后取大鼠左心室,采用硝酸镧示踪法和透射电子显微镜观察大鼠心肌闰盘(ID)结构的变化,用Real-Time PCR方法和Western blot方法检测EMP辐照后,大鼠连接蛋白Cx43在转录水平和蛋白水平表达量的变化情况.结果:电镜下正常对照组大鼠心肌ID处未见硝酸镧颗粒沉积;EMP组大鼠ID处可见硝酸镧颗粒,且随时间的延长,硝酸镧颗粒沉积量逐渐增多,以照后6h组硝酸镧颗粒沉积量达最大,然后硝酸镧颗粒沉积量随时间延长逐渐减少,24h组恢复正常.心肌细胞Cx43的mRNA表达水平在EMP照后lh和6h明显增高,分别是对照组的1.95、3.10倍(P＜0.05);照后即刻、3h、12h、24h表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot结果为照后即刻、1h、3h和6h组大鼠心肌细胞Cx43蛋白表达量与对照组比较显著增加,12h、24h与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:EMP可使心肌闰盘结构发生改变,上调Cx43蛋白的mRNA水平和蛋白表达量.     

硝态和铵态氮配比对水培油麦菜苗期生长及生理特性的影响

采用水培技术,以油麦菜幼苗为材料,研究不同硝铵态氮配比（NO₃^-∶NH₄⁺）对油麦菜苗期地上部和根系生长及生理特性的影响。结果表明：（1）油麦菜地上部和根系硝酸盐含量皆与营养液中NO₃^--N比例呈正相关关系,且各处理均达到无公害蔬菜的标准。（2）随着营养液中NH₄⁺-N比例的增加,油麦菜地上部有机酸含量先降低后升高,且在硝铵态氮配比为5∶5时最低,可溶性糖含量呈上升趋势,而可溶性蛋白质含量先升高后降低,在硝铵态氮配比为5∶5时最高;油麦菜根系有机酸和可溶性糖含量先升高后降低,两者分别在硝铵态氮配比为5∶5和7.5∶2.5时最高,而可溶性蛋白质含量呈下降趋势,在全NO₃^--N时最高。（3）随着营养液中NH₄⁺-N比例的增加,油麦菜地上部和根系中SOD活性先升后降,并分别在硝铵态氮配比为5∶5和7.5∶2.5时最高,而地上部和根系中MDA、脯氨酸含量和POD、CAT活性的变化趋势则与其相反。（4）随着营养液中NH₄⁺-N比例的增加,油麦菜地上部和根系干重皆先升后降,根冠比则逐渐减小;在硝铵态氮配比为7.5∶2.5时干重最大,根冠比适宜且稳定。研究表明,水培油麦菜苗期地上部和根系生长及生理特性受到氮素形态配比的显著影响,且根系的生理响应更敏感;营养液中硝铵态氮配比为7.5∶2.5时,油麦菜受胁迫程度最低,地上部和根系生长较协调,油麦菜生长和生理状况最佳。