日本血吸虫新基因Sj-MA的克隆、表达及保护性免疫

为发现新基因 ,寻找日本血吸虫病新疫苗候选分子 ,采用Sj雄虫免疫血清筛选Sj成虫cDNA文库。经测序发现新基因Sj MA含有一个完整的阅读框 ,推测其由 2 4 9个氨基酸组成 ,编码分子量为 2 8.8kD的可溶性蛋白质 ,并带有多个能被磷酸化激活的位点 ,提示其可能为一重要的信息传递分子。将Sj MA的cDNA亚克隆至原核表达载体pGEX 5X ,获得Sj MA原核表达的重组体rSj MA/GST ,并在E .coli中高效表达为谷胱甘肽S 转移酶 (GST)融合蛋白 ,分子量为 5 4 .8kD ,Western印迹显示融合蛋白质能被抗雄虫和抗GST血清识别。融合蛋白质免疫小鼠可诱导 34.2 9%的减虫率 ,与对照组有显著性差异 (P <0 .0 0 1 )。表明新基因Sj MA表达的蛋白质能诱导小鼠的抗日本血吸虫的保护性免疫 ,提示其作为日本血吸虫疫苗候选分子的潜在价值     

重组结核分枝杆菌Hsp16.3的纳米金免疫传感器检测Hsp16.3抗体

克隆和表达结核分枝杆菌热休克蛋白16.3(Hsp16.3),建立纳米金免疫传感器检测结核病患者血清Hsp16.3抗体。PCR扩增hsp16.3基因,构建重组表达质粒pQE30-hsp16.3,表达和纯化Hsp16.3,Western blot分析其反应原性;晶种生长法制备金纳米棒并连接Hsp16.3,建立纳米金免疫传感器检测血清Hsp16.3抗体,接受者操作特性(ROC)曲线评价其灵敏度和特异性。成功构建重组表达质粒pQE30-hsp16.3,纯化Hsp16.3具有良好的反应原性;Hsp16.3的纳米金免疫传感器分别检测50例结核病患者、42例非结核肺病患者和50例体检健康者血清,红移值大于3.5的例数分别为42、7、1例;ROC曲线显示,曲线下面积0.888(P0.01),界值3.5,灵敏度82%,特异性98%。结果表明,Hsp16.3的纳米金免疫传感器可用于检测结核病血清Hsp16.3抗体。     

SARS冠状病毒S蛋白片段2的表达纯化与多克隆抗体的制备

采用RTPCR技术从SARS冠状病毒基因组扩增编码S蛋白的S2基因片段(第2170到2814位碱基),克隆到pMD18T载体并测序。用限制性内切酶消化后,S2基因亚克隆至表达载体pGEX4T2,转化大肠杆菌JM109,筛选鉴定阳性菌落。扩增培养含pGEXS2质粒的JM109大肠杆菌,经IPTG诱导,超声破菌,GSHSepharose亲和层析纯化目的蛋白,Westernblot检测SARS患者血清可以识别纯化的蛋白。用此蛋白免疫NIH小鼠,获得了高滴度抗GSTS2抗体的血清,为进一步研究SARS冠状病毒的亚单位疫苗奠定基础。     

SARS冠状病毒S蛋白片段2的表达纯化与多克隆抗体的制备

采用RT-PCR技术从SARS冠状病毒基因组扩增编码S蛋白的S2基因片段(第2170到2814位碱基),克隆到pMD18-T载体并测序.用限制性内切酶消化后,S2基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌JM109,筛选鉴定阳性菌落.扩增培养含pGEX-S2质粒的JM109大肠杆菌,经IPTG诱导,超声破菌,GSH-Sepharose亲和层析纯化目的蛋白,Western-blot检测SARS患者血清可以识别纯化的蛋白.用此蛋白免疫NIH小鼠,获得了高滴度抗GST-S2抗体的血清,为进一步研究SARS冠状病毒的亚单位疫苗奠定基础.     

一种新型的药物载体──S－脂质体

一种新型的药物载体──Ｓ－脂质体袁仕善（武汉大学生命科学学院,４３００７２）关键词药物载体,脂质体Ｓ－脂质体是指含有神经节苷脂ＧＭ１或聚乙二醇衍生物的脂质体。ＧＭ１引入了唾液酸残基增强了膜的稳定性,极大地降低了血浆成分诱发的脂质体溶解的敏感度和其内容...     

钉螺肝脏表达蛋白质鉴定结果分析

钉螺是日本血吸虫的唯一中间寄主, 消灭钉螺是防治血吸虫病的关键。 开展钉螺蛋白质组学的研究, 对了解湖北钉螺的生长发育、营养和代谢状况具有重要的意义, 也为有效控制和杀灭钉螺提供参考依据。 国内有灭螺药物对钉螺肝脏超微结构及过氧化物酶同工酶影响的研究1, 但国内外尚无湖北钉螺肝脏蛋白质组学研究的报道。本研究用蛋白质组学方法初步分析了钉螺肝脏蛋白质的表达, 以建立大钉螺肝脏蛋白质组数据库, 为人们在蛋白质水平认识钉螺肝脏提供有利的参考。