狂犬病毒鼠脑复壮后的典型形态恢复及感染细胞内的形态发生学

[目的]观察比较鼠脑复壮前后狂犬病毒的形态变化,并观察病毒感染BHK-21细胞后不同时间的形态发生情况.[方法]以保存时间较长的SRV9毒株为原始材料,经乳鼠脑传代复壮后接种BHK-21细胞,浓缩、纯化后观察.[结果](1)未经复壮的病毒中DI粒子占较高比例,典型粒子只占少数,而复壮后典型粒子所占比例升高到病毒粒子总数的90%.(2)感染24h后在细胞浆内可以观察到典型病毒粒子,其数量随着培养时间的延长而增加.带毒传代之后的培养过程中细胞内病毒数量增加不明显.(3)病毒可以在细胞内的空泡膜表面以多种方式成堆出芽.[结论](1)鼠脑复壮可恢复狂犬病毒中典型粒子所占比例.(2)带毒传代1～2次时为狂犬病毒收获的最佳时机.(3)本研究为狂犬病毒的装配机制补充了数据.     

家蝇卵黄蛋白基因的克隆与结构序列分析

家蝇卵黄蛋白基因编码的卵黄蛋白是家蝇胚胎发育的重要营养来源 .根据 3种家蝇卵黄蛋白cDNA保守序列设计引物 ,用PCR技术从家蝇基因组DNA中扩增到大小为 76 8bp的mdYP1基因的部分DNA片段 .经地高辛标记成特异性探针 ,从构建的家蝇基因组文库中筛选出一个阳性克隆 ,并从该克隆中分离到大小为 3991bp的mdYP1基因组基因 .序列分析显示 ,该基因组序列含有约1 6kb的 5′ 上游区和 1 0kb的 3′ 下游区 ,编码区由一个 6 1bp的内含子和大小分别为 2 2 2bp和10 2 8bp的 2个外显子组成 .5′ 上游区含有典型的CAAT TATA盒 .     

猪瘟DNA疫苗制备工艺研究

猪瘟DNA疫苗制备工艺的建立是其走向产业化 ,从而在猪瘟防制中发挥作用所需解决的关键问题之一。以猪瘟DNA疫苗质粒pVAXE2IL2转化大肠杆菌后 ,转入发酵罐发酵培养。将菌体悬浮裂解和中和后 ,经澄清和浓缩处理 ,上阴离子交换色谱和体积排阻色谱进行纯化 ,首次提纯出符合药学规格的猪瘟DNA疫苗 ,且整个工艺回收率达 64.53% ,从而表明所建立的工艺为猪瘟DNA疫苗规模化生产奠定了技术基础。     

家蝇卵黄蛋白基因启动子区的克隆与活性分析

从家蝇基因组文库中分离到含约1．7kb5’上游区的家蝇卵黄蛋白-1基因组基因序列,根据其5’上游序列,PCR扩增出大小不同的4个启动子片段,分别插入到切除了CMV启动子的pCMV-GFP质粒中的绿色荧光蛋白报告基因上游,构建了pMYP1-GFP、pMYP2-GFP、pMYP3-GFP和pMYP4-GFP4个重组质粒。另将 684／ 7、 1165／ 7这两个启动子片段用SpeⅠ和HindⅢ双酶切,去除包含CAAT／TATA盒的 302／ 7序列区后,分别构建了pMYP5-GFP和pMYP6-GFP两个重组质粒。通过电转移实验和荧光检测表明。 684／ 7、 1165／ 7、 1616／ 7这3个启动子片段具有转录活性,而 684／ 7启动子片段的转录活性最强, 296／ 7、 684／ 302、 1165／ 302这3个启动子片段无转录活性。上述实验结果表明。 302／ 7序列区为启动子的核心部分。 302到 1616之间存在调控性启动子或增强子等其他一些顺式元件。细胞转染实验证实,6种启动子片段在BHK-21和Sf9细胞中都未表现出可检测的转录活性,说明家蝇卵黄蛋白基因启动子具有组织或细胞特异性。     

中国蝙蝠携带狂犬病毒研究进展

狂犬病(Rabies),是由狂犬病毒(Rabies Virus,RV)引起的人和所有哺乳动物的急性致死性中枢神经系统的自然疫源性疾病.该病呈全球性分布、病死率高,引起学者们对病原鉴定、免疫防治等的广泛研究,并取得了重大进展.研究表明,蝙蝠是多种人兽共患疾病病毒的储存宿主,因此,蝙蝠携带狂犬病毒的调查研究引起广大学者们的广泛关注,蝙蝠在我国物种丰富,分布广泛,作为很多病毒的可能自然宿主,其感染携带RV的流行病学数据尚未可知.本文对我国蝙蝠的种类、分布以及蝙蝠作为狂犬病毒自然宿主的研究进展进行了综述,为广大学者的进一步相关研究提供参考依据.