全文获取类型
收费全文 | 532篇 |
免费 | 55篇 |
国内免费 | 245篇 |
出版年
2024年 | 7篇 |
2023年 | 14篇 |
2022年 | 18篇 |
2021年 | 17篇 |
2020年 | 14篇 |
2019年 | 30篇 |
2018年 | 29篇 |
2017年 | 22篇 |
2016年 | 33篇 |
2015年 | 27篇 |
2014年 | 41篇 |
2013年 | 30篇 |
2012年 | 31篇 |
2011年 | 42篇 |
2010年 | 23篇 |
2009年 | 27篇 |
2008年 | 37篇 |
2007年 | 41篇 |
2006年 | 25篇 |
2005年 | 16篇 |
2004年 | 40篇 |
2003年 | 24篇 |
2002年 | 25篇 |
2001年 | 16篇 |
2000年 | 12篇 |
1999年 | 26篇 |
1998年 | 9篇 |
1997年 | 10篇 |
1996年 | 19篇 |
1995年 | 19篇 |
1994年 | 10篇 |
1993年 | 12篇 |
1992年 | 9篇 |
1991年 | 7篇 |
1990年 | 7篇 |
1989年 | 9篇 |
1988年 | 11篇 |
1987年 | 7篇 |
1986年 | 7篇 |
1985年 | 5篇 |
1984年 | 5篇 |
1983年 | 6篇 |
1982年 | 3篇 |
1981年 | 2篇 |
1980年 | 1篇 |
1979年 | 3篇 |
1974年 | 1篇 |
1964年 | 1篇 |
1959年 | 1篇 |
1955年 | 1篇 |
排序方式: 共有832条查询结果,搜索用时 187 毫秒
1.
1994~1998年5月,我院应用沈阳天龙制药厂生产的蝮蛇抗栓酶治疗脑梗死患者98例,现将疗效观察结果报告如下。1 资料与方法1.1 资料 98例均是我院1994~1998年5月住院病人,发病6h~10d,符合全国第四次脑血管病学术会议提出的诊断标准,并经头颅CT扫描排除脑出血,无禁忌症(出血性疾病,近期有出血,大手术病史、溃疡病史),其中男60例,女38例,年龄40~80岁。1.2 治疗方法 0.9%生理盐水250ml加蝮蛇抗栓酶0.5u,持续静脉滴注,14天为1个疗程,同时给营养神经、保护脑组织、控制血压等处理。1.3 疗效评定 治疗前和治疗2周末按照全国第四次脑血管… 相似文献
2.
3.
复合酶解法提取三七皂苷的实验研究 总被引:8,自引:2,他引:6
以三七提取液中总皂苷的含量和提取物得率为指标,考察了乙醇回流法、渗漉法、纤维素酶解法、果胶酶解法、复合酶解法的优劣,并采用单因素法和四因素(纤维素酶用量、果胶酶用量、酶解温度、乙醇浓度)三水平正交设计法对复合酶解法提取工艺条件进行优选,得到如下较理想的提取工艺条件:纤维素酶用量为15U/g(生药)、果胶酶用量为140U/g(生药),酶解pH值为4.5,酶解温度为50℃,乙醇浓度为80%,提取时间为2.5h。所得三七提取液中总皂苷的含量为12.01%,提取物得率为35.82%。 相似文献
4.
通过3'RACE克隆策略获得绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP) Gynostemmin的5个cDNA序列gynostemminⅠ~Ⅴ及其下游非编码区(3' untranslated region, 3'UTR)。它们的编码区长度除gynostemminⅡ为825 bp外,其余均为831 bp。其下游非编码区的长度分别为279、174、170、161和171 bp。在3'UTR中,gynostemminⅠ比另外4个多了两个小的茎环结构和一富含AU的不稳定子元件,其mRNA的稳定性可能因此受到影响。 相似文献
5.
6.
小鼠胚胎干细胞建系技术研究进展 总被引:4,自引:0,他引:4
目前,对小鼠胚胎干细胞的研究较为深入,并已成为研究细胞分化及信号转导、新基因发现及功能鉴定、器官发生、人类疾病和药物开发等的有效手段。胚胎干细胞建系是一项基础性工作。虽然技术日趋成熟,有些品系小鼠的胚胎干细胞建系已是常规技术,但不同品系小鼠胚胎干细胞的建系效率仍有很大差异,建系途径和方法各有特点,一个品系胚胎干细胞的建系方法不一定都适用于其他品系。本文从小鼠胚胎干细胞建系的途径、分离操作技术、培养体系等方面进行综述,并就与之相关的有些问题提出思考和对策。 相似文献
7.
具有抗HIV活性的天花粉蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:天花粉蛋白(TCS)有较强的抗HIV活性。利用基因工程技术在大肠杆菌中表达TCS并进行纯化。方法:从新鲜栝楼叶片中获取TCS基因组DNA,利用PCR技术扩增其全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态E.coliDH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序;将所获阳性重组质粒转化感受态E.coliBL21(DE3)得到工程菌,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE及Western印迹鉴定;用Ni-NTA柱对所获目的蛋白进行纯化。结果:获得了目的蛋白的可溶性高效表达,并通过了Western印迹鉴定。经Ni-NTA柱纯化后,得到大量均一的6His-TCS融合蛋白。结论:TCS在大肠杆菌中的表达与纯化,为通过基因工程方法研制具有抗HIV活性的药物奠定了基础。 相似文献
8.
用PCR法扩增枯草芽孢杆菌的漆酶基因lac2.构建表达质粒pPIC9K-lac2.通过电转法将lac2基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性和高表达漆酶的转化子作为工程菌GS115(pPIC9K-lac2).在发酵罐中发酵GS115(pPIC9K-lac2)表达重组蛋白.在50 L发酵罐中加入20 L无机盐发酵培养基.在发酵的第一阶段连续24 h补加50%甘油-0.8% PTM4增殖P.pastoris,然后用甲醇-0.8% PTM4诱导49 h.在发酵过程中,通过调节搅拌的频率和通气量,将溶氧维持于20% ~30%,用氨水维持pH 5.0.放罐时生物量为A600=266.5,表达漆酶1097.5U/L发酵液. 相似文献
9.
目的:用毕赤酵母表达L-阿拉伯糖异构酶。方法:用PCR法扩增大肠杆菌的L-阿拉伯糖异构酶基因,构建含L-阿拉伯糖异构酶基因的毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K-ai。通过电转法将pPIC9K-ai转化毕赤酵母GS115基因组。先筛选出高G418抗性的克隆,然后再从高拷贝的克隆中筛选出高表达重组L-阿拉伯糖异构酶的重组子作为工程菌GS115(pPIC9K-ai)。结果:在甲醇诱导下,摇瓶发酵GS115(pPIC9K-ai)3d,分泌表达L-阿拉伯糖异构酶32 mg/L。结论:毕赤酵母表达的L-阿拉伯糖异构酶具有转化D-半乳糖为D-塔格糖的生物活性。每升GS115(pPIC9K-ai)发酵液能转化D-半乳糖生成30 mgD-塔格糖。 相似文献
10.
黄土丘陵区不同植被土壤氮素转化微生物生理群特征及差异 总被引:5,自引:0,他引:5
采用最大或然计数法(most probable number, MPN)对黄土高原洞子沟流域不同植被恢复阶段土壤氮素微生物生理群(氨化细菌、亚硝化细菌、反硝化细菌)数量分布特征进行了测定,结果表明:1)土壤氨化细菌、亚硝化细菌和反硝化细菌数量随植被恢复而增加,三者最大值分别为最小值的74、4和31倍,其中氨化细菌和反硝化细菌的数量在铁杆蒿群落最低,辽东栎群落最高,亚硝化细菌数量在丁香群落最低,辽东栎群落最高;2)植被恢复对各氮素生理群影响不同,对氨化细菌影响最大,其次分别为反硝化细菌和亚硝化细菌;3)各氮素生理群数量差异较大,氨化细菌>反硝化细菌>亚硝化细菌。研究区氨化细菌占总数的75%-80%,反硝化细菌占20%-25%时,生态系统最为稳定;4)土壤理化性质与各功能菌关系紧密,其中,土壤容重和硝态氮含量与微生物数量相关性最大,全钾、矿化氮和微生物量氮也表现出很大的相关性。 相似文献