内皮特异性miR-342-5p敲除致小鼠内皮损伤和心血管功能紊乱

摘要 目的：我们前期研究发现有氧运动促进内皮细胞等分泌miR-342-5p,miR-342-5p通过外泌体富集至心肌细胞后发挥心脏保护作用。本研究的主要目的是明确内皮来源的miR-342-5p在心血管功能调控中的作用。方法：我们构建了内皮特异性miR-342-5p敲除小鼠,通过心脏超声检测和血管收缩舒张功能检测观察了该小鼠心血管功能的变化;培养血管内皮细胞,通过对细胞存活率检测、相关蛋白的表达检测等方法对miR-342-5p发挥心血管保护作用的机制进行探究。结果：内皮miR-342-5p敲除致小鼠运动能力降低、心脏收缩功能不变,但舒张功能紊乱。且内皮miR-342-5p敲除致小鼠血管口径变小、微血管密度降低和血管内皮功能紊乱。内皮miR-342-5p敲除致小鼠心血管功能紊乱的机制与其引起的内皮细胞损伤有关。敲低miR-342-5p致内皮细胞中caspase 9水平增加,引起内皮细胞活性降低和凋亡增加。结论：这些结果进一步证实了内皮细胞来源的miR-342-5p在心血管功能中的重要作用,提示miR-342-5p在防治心血管疾病中的潜在应用。     

生酮饮食通过上调肝脏和棕色脂肪组织PPARα提高小鼠耐低温能力

本文旨在探究短期生酮饮食对小鼠耐低温能力的影响及过氧化物酶体增殖物激活受体α (peroxisome proliferatoractivated receptor α, PPARα)在其中的作用及机制。将C57BL/6J小鼠分为正常饮食(WT+ND)组与生酮饮食(WT+KD)组,室温下分别用正常或生酮饮食饲料喂养2 d后,将其置于4°C环境中12 h,检测小鼠在低温条件下核心温度、血糖、血压的变化,并用Western blot检测PPARα和线粒体解偶联蛋白1 (uncoupling protein 1, UCP1)蛋白表达水平。将PPARα敲除小鼠分为正常饮食(PPARα^-/-+ND)组与生酮饮食(PPARα^-/-+KD)组,室温下分别用正常或生酮饮食饲料喂养2 d后,将其置于4°C环境中12 h,同样进行上述指标检测。结果显示,在室温下,与WT+ND组相比,WT+KD组小鼠肝脏及棕色脂肪组织中PPARα和UCP1蛋白水平均显著上调。在低温条件下,与WT+ND相比,WT+KD组小鼠核心温度及血糖升高,平均动脉压降低;生酮饮食可上调WT+KD...     

敌敌畏对多疣狭口蛙不同发育期蝌蚪的急性毒性影响

为了解农药对不同发育期蝌蚪的毒性,以多疣狭口蛙Kaloula verrucosa蝌蚪为对象,采用水生生物急性毒性试验方法,研究杀虫剂敌敌畏(DDVP)对25期、26期、35期和42期蝌蚪的急性毒性影响.结果表明,在水温19.5～22.0℃条件下,敌敌畏对各期蝌蚪96 h LC50分别为1.13、1.43、1.38和0.61 mg/L,各期蝌蚪对敌敌畏的敏感顺序为42期>25期>35期>26期.由此得出敌敌畏对25期、26期和35期蝌蚪属中等毒性,对42期蝌蚪则表现为高毒.因此建议农药施用应尽量避开蝌蚪的变态期进行.蛙类胚胎期(出膜后)随着发育对外界环境的耐受性增强,蝌蚪期随着发育对外界环境的敏感性增强.鉴于42期蝌蚪意外死亡率高的特点,认为不宜采用变态期蝌蚪进行急性毒性试验.     

改良的大鼠模拟失重模型制备方法*

目的: 介绍一种改良的尾部悬吊使后肢去负荷的制备大鼠模拟失重模型的方法。方法: 90只成年雄性SD大鼠随机分为对照组,经典尾吊组和改良尾吊组(每组30只)。经典尾吊组利用医用胶带和纱布制作大鼠尾套后悬吊大鼠尾部。改良尾吊组在上述操作基础之上,在尾套内增加聚乙烯发泡棉隔层,以缓冲纱布对尾部的挤压,保证远端血液循环。对照组尾部不做特殊处理。尾吊4周后观察尾部损伤和尾套脱落等并发症,测量大鼠体质量及右侧比目鱼肌湿重。结果: 与对照组相比,经典尾吊组的比目鱼肌湿重/体质量比值显著减少,但体质量无显著差异,大鼠尾部远端出现缺血坏死损伤的发生率为40.0%,尾套脱落的发生率为26.7%,模型成功率为33.3%;与经典尾吊组相比,改良尾吊组的尾部损伤程度明显降低,远端缺血坏死率为13.3%, 尾套脱落率为3.3%,模型成功率为83.3% (P均＜0.05)。结论: 采用改良尾吊法建立大鼠模拟失重模型能够显著减少鼠尾坏死和尾套脱落发生率,简单易行,提高了模型制备的成功率。     

心房钠尿肽通过上调OPA1表达抑制心衰小鼠心肌线粒体分裂并改善心脏功能

目的:探讨心房钠尿肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)对后负荷增加引起的心脏功能下降的保护作用及其机制。方法:选择雄性C57小鼠30只,将其随机分为假手术组(sham)、主动脉弓结扎(Transverse aortic constriction,TAC)手术组和主动脉弓结扎手术ANP干预组(TAC+ANP)。ANP通过皮下注射4周,随后超声检测心脏功能、四腔心切片观察心肌重构,电镜观察心肌线粒体的形态与数量,Western-Blot检测心肌组织中融合分裂相关分子的表达。结果:同sham组相比,TAC组射血分数(Ejection fraction,EF)降低,且左室舒张末内径(End-diastolic left ventricular internal diameter,LVIDd)、左室舒张期后壁厚度(End-diastolic left ventricular posterior wall thickness,LVPWd)、左室质量(LV mass)、心肌质量/胫骨长度(Heart weight/tibial length,HW/TL)显著增加(P0.05),线粒体面积减小伴数量增加(P0.05),且线粒体融合相关蛋白OPA1表达量下降(P0.05)。同TAC组相比,TAC+ANP组EF显著增加,且LVIDd、LV mass、HW/TL均显著下降(P0.05),线粒体面积增加伴数量减少(P0.05),且线粒体融合相关蛋白OPA1表达量上调(P0.05)。在离体培养的心肌细胞中,给予ANP处理可减轻H_2O_2诱导的OPA1表达下降,给与ANP竞争性多肽抑制剂anantin后该作用消失。结论:ANP通过上调OPA1的表达抑制线粒体分裂改善后负荷增加导致的心脏功能下降。     

miR-494-3p通过下调胰岛素受体底物-1促糖尿病大鼠心肌细胞胰岛素抵抗

越来越多的证据表明microRNA广泛参与调控心血管功能。我们预实验结果显示糖尿病大鼠心肌miR-494-3p增加,且有研究表明miR-494-3p与肥胖等代谢异常有关。因此,本研究旨在探讨miR-494-3p在糖尿病心肌胰岛素敏感性改变中的作用及其机制。利用高脂饲料联合链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,提取心肌组织RNA进行qPCR检测,结果显示糖尿病大鼠的心肌miR-494-3p表达水平与正常大鼠相比明显上调(P 0.05)。体外高糖高脂诱导H9c2细胞胰岛素抵抗模型,qPCR结果显示细胞中miR-494-3p水平明显升高(P 0.01),并随高脂程度加重而增加;抑制miR-494-3p表达可以增加胰岛素刺激下细胞对葡萄糖的摄取(P 0.01),并提高胰岛素刺激后Akt磷酸化水平(P 0.05);单纯过表达H9c2细胞中的miR-494-3p可以抑制胰岛素刺激的葡萄糖摄取,并降低Akt磷酸化水平(P 0.01)。生物信息学联合蛋白免疫印迹实验证实胰岛素受体底物-1 (insulin receptor substrate 1, IRS1)是miR-494-3p负性调节胰岛素信号转导的靶分子之一。上述结果提示,miR-494-3p通过下调IRS1促进糖尿病大鼠心肌细胞胰岛素抵抗的形成。     

似金隐藻有丝分裂及胞质分裂的观察

似金隐藻(Cryptomonas chrysoidea)是从青岛附近渤海湾海水中分离得到的一种单细胞藻类。对它的胞质分裂和有丝分裂进行的观察表明,它的胞质分裂在有丝分裂的中期开始,细胞前端沟口处先开始分裂,继而沿纵轴纵沟处形成一收缩沟完成的。似金隐藻的有丝分裂过程中没有染色体和着丝点形成;核膜进入中期时完全消失,纺锤体呈桶状,微管通过染色质团中的通道或直接与染色质团块相联;在后期和末期,两块分开的染色质团十分靠近相应的色素体内质网膜。本文对其分裂过程进行了讨论。     

利用组织培养对秦岭百合属植物的保种繁殖研究

通过组织培养的方法对秦岭野生百合属植物进行了保种繁殖研究。实验证明,在ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ上可诱导云南大百合、秦岭麝香百合和川百合产生较多的小鳞茎,在ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ上继代培养２０多次仍保持较强的活力和稳定的遗传性。而卷丹在ＭＳ＋１ｍｇ／ＬＮＡＡ上诱导产生小鳞茎,在ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ上继代培养较好。结果表明,通过组织培养可以建立百合属植物的种质基因库。     

起始密码子区域相关序列多态性的开发及在苜蓿遗传多样性上的应用

目前广泛使用的基于PCR基础的分子标记多为扩增非编码区域,或是随机基因组中扩增,在QTL定位中得到的位点一般与目标性状基因距离较远,我们开发了一个新的基于启动子序列目的基因型分子标记技术——启动子区域相关序列多态性（SCRP）,试图使标记能够更为准确的反映不同品种的遗传基础。它利用启动子位置保守一致序列 （“Kozak”序列） 作为其上游引物,利用内含子富含“AATT”的特性,作为核心序列设计下游引物,上下游引物均为18bp,引物间通过组合配对的方式作为扩增引物对。设计了14条上游引物和10条下游引物,共140对引物组合,对34个苜蓿品种进行扩增,研究了34个苜蓿的遗传多样性。每个PCR反应产生3~16个50~2000bp的条带,结果表明该标记简单、可靠、具有较高多态性,并且扩增区域为一种目的基因型分子标记,在种质资源研究中具有重要价值。