脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达及表达产物性质的研究

从环境中筛选到了脂肪酶高产菌株金黄色葡萄球菌JH,依据NCBI上发表的原核微生物脂肪酶基因序列的多序列比对,发现它具有很强的序列保守性。利用PCR从金黄色葡萄球菌JH基因组中扩增得到了脂肪酶基因,利用基因重组技术将其整合到质粒pC194中,并导入到枯草芽孢杆菌中进行表达。应用选择抗药性筛选重组子,利用硫酸铵沉淀法和离子交换层析分离纯化重组脂肪酶,并用DS-PAGE进行纯度鉴定,确定其相对分子量约为32000Da。通过对其酶学特性的研究发现,重组脂肪酶在反应温度为41℃, pH为8.0时具有最大活性,其Km和Vm各自为0.34mM和308μmol•mg-1min-1,Ca2+、K+、Mg2+能激活这种酶的活性鳩e2+、Cu2+、Co2+则抑制它的活性。     

海栖热袍菌内切葡聚糖酶Cel12B与木聚糖酶XynA CBD结构域融合基因的构建、表达及融合酶性质分析

海栖热袍菌内切葡聚糖酶Cel12B是极耐热胞外酶,氨基酸序列分析表明不含有纤维素结合结构域(CBD),对结晶纤维素无活性,但同样菌种来源的木聚糖酶XynA有催化结构域和纤维素结合结构城。用同样极耐热酶CBD区域和Cel12B融合构建重组质粒pET-20b-Cel12B-CBD,经诱导表达后,对结晶纤维素有活性,酶学特性研究表明:最适反应温度为100℃、最适pH为5.8、在pH4.5~7.0时酶活力稳定,90℃保温2h仍有87%的酶活。     

趋磁菌AMB-1超氧化物歧化酶Fe-SOD在大肠杆菌中的表达及生理活性研究

超氧化物歧化酶(SOD)可以减轻超阳阴离子O2-对细胞的毒害作用,提高菌体的抗氧化能力,从而改善菌株的生理状态.利用PCR技术,将趋磁菌AMB-1的超氧化物歧化酶基因esod克隆至原核表达载体pET-20b(+),并在E coli BL21(DE3)有效表达.重组菌株BL21 (DE3)/(pET-20b-fesod-histag)在0.6 mmol/L IPTG诱导浓度下进行发酵培养,在生长前期2-14 h生长速率优于对照组E.coli BL21(DE3)/(pET-20b).通过亲和层析柱纯化后,重组酶蛋白纯度达电泳均一,超氧化物歧化酶fesod活性最造作用温度为25℃,在25℃和45℃下酶热稳定较好,pH4.2-8.2之间酶活力稳定.趋磁菌AMB-1来源的Fe-SOD作为一种抗氧化酶,在大肠杆菌中的有效表达从一定程度上改善了宿主菌的生长情况.     

水产养殖中益生菌研究进展

益生菌在水产养殖中能够净化水质、预防疾病、促进生长且安全、环保、无抗性,是抗生素的理想替代品,具有重要的研究价值和广阔的应用前景。本文主要从益生菌制剂的定义概述、作用机理及特性进行阐述,分析益生菌制剂存在的问题,探讨水产养殖用益生菌制剂的研究方向。     

嗜热菌Caldicellulosiruptor bescii Athe_0597基因克隆与表达

嗜热菌Caldicellulosiruptor bescii能够高效水解木质纤维素,C.bescii分泌的纤维素降解体系中含有多种糖苷水解酶和未知功能的非催化蛋白.未知功能非催化蛋白Athe_0597能与多种纤维素底物结合且在纤维素降解体系中高丰度存在.本研究对Athe_0597进行了生物信息学分析;以C.bescii基因组为模板,利用PCR技术扩增Athe_0597基因;构建pCold Ⅰ-0597表达质粒并在Escherichia coli BL21(DE3)中表达,优化诱导表达条件.生物信息学分析显示,Athe_0597的前22个氨基酸为信号肽,去除信号肽后的蛋白理论分子质量为54.59 kD,等电点为9.27,亲水性系数和不稳定系数分别为-0.488和23.88,是亲水性稳定蛋白;成功克隆Athe-0597基因并在E.coli BL21(DE3)中成功表达;获得重组蛋白最佳诱导表达条件:诱导剂IPTG浓度为0.25 mmol/L,诱导时间4 h,诱导前菌体浓度OD600m为0.6,诱导温度30℃.本研究为Athe_0597在C.bescii高效水解纤维素中的功能研究提供了理论基础.     

三种不同小球藻去除亚硝态氮和氨氮能力的研究

为了研究小球藻在不同质量浓度的氨氮和亚硝态氮环境下的去除能力与生长效果,从实验室挑选3株不同的小球藻CV315-1(Chlorella sp.)、CV315-2(Chlorella sorokiniana)和CV315-3(Chlorella pyrenoidosa)分别置于不同质量浓度的氨氮和亚硝态氮模拟污水中,在温度26℃,光照强度8000 Lux,光暗比为12 h∶12 h的光照培养箱中培养168 h,每隔24 h取样检测模拟污水中氨氮和亚硝态氮的质量浓度和小球藻浓度。实验结果表明:当氨氮浓度4 mg/L时,CV315-1、CV315-2和CV315-3均能在120 h完全去除。当氨氮浓度6 mg/L时,CV315-3能在144 h时完全去除,而CV315-1和CV315-2在168 h时完全去除。并且随着氨氮浓度的升高,三株藻的去除率均逐渐降低,当氨氮浓度10 mg/L时,CV315-1和CV315-3生长速度最快。当亚硝态氮浓度10 mg/L时,CV315-1能在120 h时完全去除,而CV315-2和CV315-3在144 h时完全去除。并且随着亚硝态氮浓度的升高,三株藻的生长速度逐渐升高。研究结果表明:CV315-1、CV315-2和CV315-3均能在不同质量浓度的氨氮和亚硝态氮环境中生长,且具有良好的耐受能力与去除效果,在净化养殖污水方面有着广阔的应用前景。     

微生物发酵棕榈粕研究进展

目前，棕榈粕因其低廉的价格和丰富的产量成为热门的动物饲料原料，但其高含量的抗营养因子纤维素阻碍了其在动物饲料中的高效应用。微生物发酵处理可以有效地降低棕榈粕中抗营养因子含量，提高其营养价值，并提升其品质。文章对棕榈粕的化学成分及微生物发酵棕榈粕、发酵棕榈粕在动物养殖中的应用研究进展进行综述，旨在为微生物发酵棕榈粕饲料的技术应用提供参考。     

毕赤酵母水解工艺的研究

在发酵过程中产生的总体积为30%～40%的毕赤酵母菌体，大部分在发酵后，会直接把酵母菌体排入环境中，不仅浪费资源，还污染环境，因此，实现资源再利用是文章的研究目的。最终结果表明，对毕赤酵母自溶破壁的最佳自溶水解条件为50℃、pH 6.0，作用时间为30 h、4%Na Cl，酵母悬浮液终体积分数为10%。此外，通过对木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶进行研究发现，添加木瓜蛋白酶效果最佳，添加后的酵母水解物氨基氮得率为4.5%，固形物得率为59%，粗蛋白含量为45.38%。