大肠杆菌中青霉素G酰化酶成熟的限制性因素

为了研究大肠杆菌中青霉素G酰化酶 (PenicillinGacylase ,PAC)成熟的限制性步骤 ,分别构建了PAC表达质粒pKKpacSP ,pETpacSP ,并将它们在大肠杆菌宿主中表达。通过酶活性的测定及Westernblotting分析 ,分别在PAC自身表达系统 ,Tac ,T7及氧调控表达系统中 ,研究PAC前体蛋白加工成α亚基、β亚基的效率及亚基折叠组装形成活性酶的能力。结果表明 :PAC成熟过程中的限制性步骤因宿主 载体系统而异 ;PAC本身表达系统中 ,前体肽加工成α亚基、β亚基的效率为 57.2 % ,亚基组装能力为 0.72;Tac启动子表达调控系统中α亚基的折叠和稳定成为限制性步骤 ;T7及氧调控表达系统中 ,PAC前体肽加工成α亚基、β亚基的效率达 90 %左右 ,亚基组装成活性酶的能力分别为 1 82 ,2 ;低氧调控系统表达PAC时 ,成熟的效率最高 ,PAC表达的单位重量活性提高 10倍.     

应用原生质体融合技术定向改造林可霉素产生菌的探索

金色链霉菌streptomyces aureofaciens(LM^r,CTC^r,产金霉素)的原生质体经u。V．照射40min灭活后,与林可链霉菌林可变种Streptomyces Iinclnensis Var lincilne—nsis(LM^r,CTC^I,产林可霉素),在42％PEG(Mw6000)诱导下进行种间原生质体融合,在含金霉素50μg／Mi的再生平板上直接选择融合子,融台率达9．05×10^-5。从大量融合体中筛选到4株产生抗菌物质不同于亲株并较稳定的菌株。对其中一株所产的抗生索作了初步鉴别,推测其结构与林可霉素相近。另一株的薄层层析R^VB_f值与氯林可霉素相近,尽管此等产物还有待于进一步鉴别,但这一育种途径值得探讨。     

干扰素基因工程菌产物表达数学模型的研究

根据阻遏蛋白,辅阻遏因子与启动基因之间的相互作用,建立了采用色氨酸启动子的基因工程重组徽生物的产物表达数学模型。提出了mRNA最大转录速率常数和产物表达速率常数与比生长速率呈线性关系的假设,用干扰素基因工程菌培养过程中的实验数据估计了mR—NA转录速率常数,干扰素表达速率常数和干扰素降解速率常数。推导出了发酵过程中干扰素表达量和细胞内干扰素比活计算公式。运用这些公式可以通过检测色氨酸浓度和细胞比生长速率来计算预测干扰紊表达量。确定最佳的终止培养时间。     

信号肽疏水性的提高促进青霉素G酰化酶分泌

设计和合成了一段具有连续１０仆亮氨酸强疏水核心的信号肽（ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ,ＡＳＰ）,由ＥｃｏＲＩ－ＫｐｎＩ位点融合到青霉素Ｇ酰化酶（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｇａｃｙｌａｓｅ,ＰＡＣ）信号肽（ｗｉｌｄ ｔｙｐｅｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ,ＷＴＳＰ）的－４Ｐｒｏ位点,分别构建了ＰＡＣ表达质粒：ｐＫＫｐａｃ△ＳＰ,ｐＫＫｐａｃＷＴＳＰ,ｐＫＫｐａｃＡＳＰ,ｐＥＴｐａｃ     

固定化酵母细胞连续生产转化糖反应动力学的研究

利用海藻酸钠固定化面包酵母细胞,在搅拌罐和填充柱反应器内连续反应由蔗糖生产转化糖,对该过程的反应动力学研究结果表明;内,外传质阻力,转化酶活力、料液流量,搅拌速率和媒体半径对转化率有影响,本文给出了它们之间相互关系的数学表达式,本文还定义了阻力因子,动力因子及返混因子,并讨论了它们对转化效率所起的作用,给出了串联反应器操作的有关计算公式,测定了有关动力学参数,给出了料液流量控制,搅拌转速控制,媒体半径选择和最大转化率操作条件的计算方法,并在搅拌罐反应器、填充柱反应器和串联搅拌罐反应器中进行了实验和计算,从实验上验证了动力学理论研究结果。     

固定化金霉素产生菌原生质体转化林可霉素反应模型的研究

建立了固定化金霉素产生菌金色链霉菌(Streptomyces aurofaciens)原生质体转化林可霉素反应动力学模型并模拟计算了反应过程,模型计算与实验结果有好的一致性。讨论了各反应参数对转化反应的影响,给出了转化率与反应时间的关系式和最大转化率计算式,还对转化反应动力学模型进一步应用进行了讨论。