牙斑幽门螺杆菌与慢性胃炎之间的关系

目的研究牙斑幽门螺杆菌与慢性胃炎之间的关系。方法对胃炎组、胃炎治疗组分别进行牙斑和胃黏膜幽门螺杆菌培养和比较。结果牙斑细菌培养：胃炎组阳性14例,阳性率为12．8％;治疗组阳性11例,阳性率为10．1％。胃黏膜细菌培养：胃炎组阳性47例,阳性率为43．1％;治疗组阳性19例,阳性率为17．4％。治疗前后比较牙斑标本差异无显著性（P〉0．05）,胃黏膜标本差异有非常显著性（P〈0．001）。结论牙斑中确实存在着幽门螺杆菌,而且是胃内反复感染的源泉,以致慢性胃病反复发作,难以治愈。     

低剂量创伤弧菌感染小鼠心肌与骨骼肌电镜超微结构观察比较

目的:观察低剂量创伤弧菌感染小鼠心肌、骨骼肌的超微结构变化,比较创伤弧菌引起的特征性病变下肢水肿骨骼肌病变与心脏病变出现的次序,探讨下肢水肿是否存在与心肌病变有关.方法:16只6～8周ICR(清洁级)小鼠.实验组12只腹腔注射＜LD50(1.34×107个/ml)的菌量(4.45×105个/ml)0.2ml,4只注射生理盐水0.2 ml作为菌液对照.分别取1 h、3 h、6 h、12 h小鼠心肌、后肢骨骼肌肌肉组织0.1cm×0.1 cm×0.1 cm置电镜固定液,超薄切片观察超微结构.结果:引起的动物模型实验组小鼠主要的实质性病变在心肌.实验组3 h就发现肌原纤维间隙扩大,肌丝断裂,肌膜下水肿较明显.6 h肌丝排列紊乱,疏松,局灶性肌丝断裂溶解.12 h核固缩水肿,间隙水肿,肌丝断裂,线粒体肿胀.而骨骼肌肌肉超微结构变化不明显,3 h、6 h和12 h实验组未死亡小鼠只表现肌组织间质变化,肌浆网扩张,组织间质水肿,胶原纤维排列稀疏、溶解.结论:本实验心肌、骨骼肌水肿与临床下肢水肿的症状相吻合,并提示心肌的实质病变明显早于骨骼肌,比较而言创伤弧菌所致病变是以重要脏器心脏的损伤为主,早期创伤弧菌对骨骼肌肌肉的实质性损伤并不明显.由创伤弧菌所致的原发性败血症表现双下肢出血性水肿可能不是创伤弧菌初始病变.     

美达霉素产生菌中立体专一性酮基还原酶基因med-ORF12的表达

美达霉素是链霉菌产生的具有强抗肿瘤活性的芳香聚酮类抗生素,其砒喃环并内酯结构对于其抗癌活性非常重要。位于美达霉素生物合成基因簇中的基因med-ORF12编码立体专一性酮基还原酶,可能参与美达霉素的砒喃环并内酯结构中手性中心(C3S)的形成,但在美达霉素产生菌中的功能和表达还未曾研究。【目的和方法】为了研究med-ORF12在野生菌中的表达情况以及与美达霉素生物合成的关系,本文采用了原核表达、抗体制备、免疫杂交等技术方法对这个基因展开了体内表达研究。【结果】首先利用pET载体建立了med-ORF12的原核表达系统,在优化诱导表达条件的基础上获得了可溶性目的蛋白,制备了相应的多抗血清;然后利用多抗血清对美达霉素产生菌中的基因med-ORF12的表达情况进行了检测,表明在美达霉素产生菌中参与次生代谢的med-ORF12在稳定期大量表达,同时伴随美达霉素的大量积累。【结论】这些结果表明在美达霉素产生菌中,基因med-ORF12参与次生代谢,其表达与美达霉素生物合成有一定相关性。     

氧化酸性水与复方醛、氯消毒剂对乙肝表面抗原杀灭效果

目的观察氧化酸性水(EOW)、2%戊二醛、500 mg/L三氯异氰尿酸以及醛、氯复方消毒剂对乙肝表面抗原杀灭效果,证实EOW杀灭乙肝病毒的可靠性,也试图使一些老消毒剂开发出新用途。方法用悬液法检测EOW原液、2%戊二醛、500 mg/L三氯异氰尿酸以及不同比例的复方醛、氯消毒剂对HBsAg杀灭效果,用小牛血清干扰杀灭试验。统计学方法两两比较选用LSD法,小牛血清干扰杀灭效果采用析因设计方差分析。结果EOW或复方消毒液对乙型肝炎病毒表面抗原杀灭效果比单用2%戊二醛、500 mg/L三氯异氰尿酸快速,杀灭率高(P<0.01)。500 mg/L三氯异氰尿酸与2%戊二醛体积比为1∶2、1∶3、1∶4的复方消毒液杀灭效果最好,血清干扰比EOW相对较小。结论一定条件下,醛、氯复方消毒剂可以替代EOW。三氯异氰尿酸对戊二醛可能有活化作用,2种消毒剂可能存在某种协同作用。     

乳杆菌bsh基因的高效表达及高活性酶蛋白获得

目的探讨乳杆菌bsh基因的高效表达及胆盐水解酶(BSH)的高活性酶蛋白获得。方法从本实验室保存的12株乳杆菌菌株中,通过Ca²⁺沉淀法初筛获得具BSH活性的菌株,根据GenBank上公布的16S rRNA同源性最高的乳杆菌的BSH全基因序列,设计特异性引物,PCR扩增获得bsh基因并克隆至表达载体pET28α,构建BL21pET28αbsh原核表达体系。经IPTG诱导后,对表达产物进行SDSPAGE分析及Western blot验证。结果研究表明在分子质量大小约35、37 kD处有预期条带出现,初步表明BSH蛋白表达成功。进而对表达各条件进行优化,最佳酶活条件为IPTG浓度0.1 mmol/L、诱导pH 6.5、诱导温度37 ℃、诱导时间1 h。经镍柱亲和层析纯化制备BSH制剂,邻苯三酚红钼法蛋白浓度测定为1 446 mg/dL,茚三酮法测酶活性最高可达21 248.27 U/(g·prot),为纯化前的635.4倍。结论乳杆菌bsh基因可溶性表达成功且高酶活BSH纯化获取为进一步的研究和药物转化奠定基础。     

PBL教学法在《环境微生物学》实验教学中探索与实践

【摘 要】 实验课程教学在培养复合型和创新型人才中具有不可替代的重要作用,为适应当代学科的交叉发展趋势,培养21世纪高素质创新型的生物学人才。在传统教学模式下,学生的注意力通常集中在实验操作上,对于理解原理、方法比较、结果分析讨论的参与性不高,缺乏动手做实验的兴趣;因而所开实验基本上是最为经典的实验,不能够全面展示新方法和新技术。本项目拟对《环境微生物学》实验教学在教学方法上进行改革,通过设置1～2项综合性强的实验项目,引进以问题为基础PBL(中文)的教学模式,把传统的经典的内容与新知识、新方法有机的结合起来进行教学,培养学生主动学习、主动思索、主动解决问题的能力,充分挖掘开发学生的潜能和创造性,将PBL模式应用于《环境微生物学》的实验教学中,激发学生主动学习的积极性,提高学生的综合思维能力和动手能力,达到提升实验教学的层次和水平。     

重构肠道菌群Ⅱ型糖尿病大鼠造模血脂代谢变化及肝细胞线粒体超微结构观察

目的重构肠道菌群Ⅱ型糖尿病大鼠模型脂类代谢变化比较,探讨肠道菌群潜在的调脂作用。方法将64只SD雄性大鼠随机分为对照组、造模组、益生组和去污组。采用高糖高脂喂养,亚致病剂量（30mg／mL）链脲佐菌素腹腔一次性注射造模,分别于2周、4周后取腹腔主动脉血做血脂检测,同时处死大鼠取肝脏做电镜切片观察。结果注射4周后各组出现的胆固醇升高两两比较差异有统计学意义（P〈0．01）,LDL升高差异有统计学意义（P〈0．01）;益生组肝细胞线粒体受损明显;去污组血脂升高相对较轻,肝细胞内有大量脂肪堆积。结论益生菌对Ⅱ型糖尿病大鼠胆固醇升高有一定改善作用,肝线粒体损伤较明显;去污染组损伤相对较轻,而脂肪堆积明显;提示糖尿病脂类代谢与肠道菌群密切相关。     

蜂胶酊对小鼠大肠埃希菌阴道炎疗效观察

目的探讨蜂胶酊对小鼠阴道内致病菌抑制及调理阴道菌群的作用。方法通过感染大肠埃希菌建立小鼠阴道炎模型,用10％和20％蜂胶酊冲洗治疗去除大肠埃希菌在小鼠阴道的定植。倾注培养（37℃,48h）计数阴道分泌物的细菌总数,镜下观察阴道黏膜炎症程度。结果蜂胶酊治疗组小鼠阴道内细菌的数量明显较对照组的数量减少（P〈0．05）,治疗组黏膜炎症的治愈程度显著好于对照组。结论蜂胶酊对小鼠大肠埃希菌性阴道炎有较好的治疗效果。     

乳杆菌喂食大鼠后目标菌克隆筛选与确认

目的确认乳杆菌能否顺利通过胃酸屏障并在肠道内定植为进一步研究乳杆菌对大鼠的生理代谢影响做基础,为乳杆菌菌株的应用提供有效依据。方法采用浓度梯度药物平板筛选利福平耐受菌株,用耐利福平（15 mg/L）乳杆菌菌株喂食SD雄性大鼠并采集其新鲜粪便,在耐药平板上筛选出能在大鼠结肠内定植良好的耐药菌株,并得到16S rDNA的鉴定结果,利用16S rDNA序列同源性分析对乳酸菌进行分类鉴定。结果粪便中检测出的乳杆菌耐药菌株经纯化鉴定后与所喂食的乳杆菌同源。结论实验所筛选出的耐利福平乳杆菌在大鼠结肠内成功定植。