肠炎沙门氏菌基因工程减毒株的免疫效果及安全性评价

[背景] 相较于灭活疫苗和弱毒疫苗,沙门氏菌（Salmonella）基因工程减毒活疫苗具有的优越性逐渐显现,研究也不断深入。[目的] 探究肠炎沙门氏菌G9菌株的4株基因缺失株G9（ΔhilA）、G9（ΔhilD）、G9（ΔssrABhilA）和G9（ΔssrABhilAhilD）的免疫效果及生物安全性。[方法] 以肠炎沙门氏菌基因缺失菌株G9（ΔhilA）、G9（ΔhilD）、G9（ΔssrABhilA）、G9（ΔssrABhilAhilD）及其亲本菌株G9的最佳免疫剂量接种小鼠后,利用间接ELISA法、流式细胞术、MTT法、小鼠攻毒试验及倾注平板法等对各缺失株的免疫效果和安全性进行评价。[结果] G9（ΔhilD）诱导血清IgG抗体效价最高,G9（ΔhilD）和G9（ΔssrABhilAhilD）产生肠黏膜IgA抗体效价最高,4株缺失菌诱导IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-β、MCP-1细胞因子的能力与亲本株G9差异不显著（P>0.05）,产生的CD4⁺/CD3⁺、CD8⁺/CD3⁺ T细胞比率呈上升趋势,而且G9（ΔssrABhilA）和G9（ΔssrABhilAhilD）最高;G9（ΔssrABhilAhilD）诱发的脾淋巴细胞增殖指数最高;免疫小鼠后4株缺失株对G9攻毒提供的保护率为80%-100%,而且小鼠肝脏、脾脏及小肠绒毛无明显病理变化,对鼠伤寒沙门氏菌攻毒提供的保护率为50%-80%;接种后12 d,小鼠肝脏、脾脏及小肠中定殖的菌株能基本清除,而且在体外能连续稳定传代30代。[结论] G9（ΔhilA）、G9（ΔhilD）、G9（ΔssrABhilA）和G9（ΔssrABhilAhilD）对小鼠的免疫效果和生物安全性均良好,有成为肠炎沙门氏菌基因工程减毒活疫苗的可能。     

肠炎沙门氏菌ssrAB、hilA、hilD基因缺失菌株的构建及其生物学特性

【背景】沙门氏菌(Salmonella)是重要的人畜共患病原菌,由于耐药菌株的不断出现,新型防治方法的研究迫在眉睫。【目的】探究ssrAB、hilA、hilD基因对肠炎沙门氏菌致病作用的影响,筛选安全可靠的沙门氏菌减毒活疫苗或载体用菌株。【方法】采用自杀性质粒介导的同源重组技术,分别构建ssrAB、hilA、hilD单基因缺失株(ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD)、双基因缺失株(ΔssrABhilA、ΔssrABhilD、ΔhilAhilD)和三基因缺失株(ΔssrABhilAhilD),并比较上述缺失菌株与亲本菌株间生物学特性的差异。【结果】基因缺失后菌株的生长速率无显著变化(P0.05);除ΔhilD生物膜形成能力最强外,其他基因缺失菌株生物膜形成能力变化不显著(P0.05);ΔssrABhilAhilD和ΔssrABhilA的LD50值最高,ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD次之;亲本菌株引起的小鼠十二指肠的病变程度较所有缺失菌株明显严重;在所有缺失菌株中,ΔssrABhilAhilD对HeLa细胞的黏附力最低,ΔhilD在小鼠体内的定殖率最高;而机体分泌IL-1、IL-18、IFN-γ的能力与沙门氏菌ssrAB、hilA、hilD基因无显著相关性(P0.05)。【结论】构建的7株基因缺失株中,ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD、ΔssrABhilA和ΔssrABhilAhilD有致病力低、生长速率良好、能有效刺激细胞因子产生等特性,具备作为沙门氏菌减毒活疫苗或载体的潜质。