水稻条叶枯病毒(RStV)基因组组分4的克隆与序列分析

利用RTPCR技术合成并扩增了水稻条叶枯病毒(RStV)中国云南分离物基因组组分4的全长cDNA,将PCR产物克隆在载体pCRII上,并进行全序列测定,所得核苷酸序列及推测的氨基酸序列与日本分离物T进行比较。结果表明,在核苷酸水平,两分离物的vORF、vcORF及基因间非编码区序列的同源性分别为94.9%、94.1%、86.1%,5’端非编码区序列相同,而3’非编码区同源性为96.1%,仅有两个核苷酸不同;在氨基酸水平,vORF及vcORF编码蛋白的同源性分别为99.4%和98.3%。可见,编码区的大小及其氨基酸序列和两末端序列都是很保守的。因此,中国云南分离物Y与日本分离物T可能有很近的亲缘关系。     

膜泡运输蛋白VdSec22参与大丽轮枝菌胞外蛋白的分泌和致病性

摘要:【目的】验证大丽轮枝菌分泌途径中一个膜泡运输蛋白VdSec22的功能,为防治棉花黄萎病提供潜在的生物靶点。【方法】利用“正负双向筛选法”的方法,构建大丽轮枝菌VdSec22蛋白编码基因缺失的突变体菌株ΔQF。通过农杆菌介导的转化,将其编码基因VdSec22重新导入ΔQF构建了功能回补菌株CΔQF。以野生型菌株为对照,检测上述菌株分泌胞外蛋白(果胶酶、纤维素酶和毒素蛋白)的能力;采用蘸根接种的方法,检测上述菌株对棉花致病性的差异。同时通过定量PCR检测内质网分子伴侣表达量的方法,推断突变体菌株ΔQF中是否发生了内质网应激反应。【结果】成功构建了基因敲除突变体ΔQF和功能回补菌株CΔQF。突变体菌株ΔQF的果胶酶、纤维素酶、毒素蛋白的分泌能力和对棉花的致病性均较野生型减弱,并且产生了内质网应激反应。重新导入VdSec22基因可弥补突变体菌株ΔQF的上述缺陷。【结论】VdSec22是大丽轮枝菌的一个重要分泌途径蛋白,在大丽轮枝菌诸多胞外致病蛋白的分泌和棉花致病性中起重要作用。VdSec22可作为防治棉花黄萎病的潜在生物靶点。     

Cloning of a NaCl-induced fructose-1, 6-diphosphate aldolase cDNA from Dunaliella salina and its expression in tobacco

Itisaworld-widefocusthatsoilbecomesmoreandmoresaline.Aboutone-thirdirrigablelandbecomeslostallovertheworldforthereasonthatthesalinityistoohigh.Therefore,im-provingthesalt-toleranceofcropsseemsmoreandmoreimportant.Previousstudyonthemecha-nismofsaltresistantofplantshaspaidmoreattentiontohigherplants,whileonlyafewtoalgae.Studyintheseyearsshowedthatalgaehadthesimilarbiophysiologicalandbiochemicalreactiontoallhigherplantsinadversity[1].Soitisreliabletoapplyalgatorelatedstudy.Dunaliellasalina,akind…     

水稻条叶枯病毒基因组组分3的克隆与序列分析

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术,合成并扩增了水稻条叶枯病毒（ＲＳｔＶ）中国云南分离 物基因组组分３的全长ｃＤＮＡ。将ＰＣＲ产物克隆在载体ｐＣＲⅡ上,进行全序列测定。将所得核苷酸序列及其所推导的氨基酸序列与日本分离物Ｔ进行同源性比较,结果表明,在核苷酸水平上,两分离物的５’端非编码区序列相同,ｖＯＲＦ、ｖｃＯＲＦ及基因间非编码区序列的同源性分别为９７．６％、９６．８％及８７．６％,而３’端非编码区同源性为９８     

水稻牺叶枯病毒基因产物在水稻和昆虫体内的Western印迹分析

将ＲＳｔＶ基因组组分３编码的ＮＳ３和ＮＣ蛋白基因以及组分４编码的ＮＣＰ和ＮＳｖｃ４蛋白基因分别克隆于大肠杆菌表达载体ｐＧＥＸ３Ｘ,在ＩＰＴＧ诱导下,表达出４种融合蛋白。这些表达产物用于免疫动物产生多克隆抗血清,以制备的多克隆抗血清为探针,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析了宿主植物和介体昆虫体内ＮＳ３,ＮＣ,ＮＣＰ和ＮＳｖｃ４种基因表达的产物。     

莱芜猪心脏cDNA文库的构建与鉴定

以莱芜猪心脏为供试材料,采用改进的异硫氰酸胍法提取心脏总RNA。通过SMART技术反转录合成全长cD-NA,经LD-PCR扩增后与pMD18-T载体连接并转化细菌DH5α,测定滴度和重组率,构建成莱芜猪心脏全长cDNA文库。经初步检测,原始文库的滴度为1.8×105CFU/mL,重组率约为94.4%。从原始文库随机挑取13个单菌落过夜培养,提取质粒,经HindⅢ和EcoRⅠ双酶切,凝胶电泳显示插入片段大小在0.3-2.0kb之间。     

莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库的构建和鉴定

目的:构建莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库,以便研究与莱芜猪优良性状相关的基因。方法:采用改良的异硫氰酸酸胍一步法制备总RNA;利用SMART技术,以PrimeScript反转录酶逆转录合成第一链cDNA,通过LD-PCR扩增获得cDNA双链;经蛋白酶K消化和CHROMA SPIN-400柱分级分离后,收集500 bp以上的cDNA片段,并与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,建成原始文库;随机挑取单菌落,用HindⅢ和EcoRⅠ进行双酶切鉴定重组子插入片段大小。结果:经鉴定,原始文库的滴度为2.8×105 cfu/mL,重组率约为98%,插入片段大小为0.5～2 kb,平均插入片段长度大于1 kb。结论:建立的cDNA文库质量良好,可以用于目的基因的筛选。     

利用植物生产异源蛋白的研究进展

植物作为生产异源蛋白的生物反应器,近年来颇受关注,与复杂,昂贵的以细胞培养为基础的表达系统相比,具有安全、廉价及规模化生等特点。作者简述了利用植物生产外源蛋白的主要策略及异源基因在植物中表达的研究进展。     

灰飞虱类酵母型共生菌18S rDNA序列变异及系统发生

分离纯化了云南楚雄、宁夏银川、北京通县、上海七宝镇、四川西昌５个地区的灰飞虱体内类酵母型共生菌（Ｙｅａｓｔ－ｌｉｋｅ Ｓｙｍｂｉｏｎｔｓ,ＹＬＳ）,并对其１８ＳｒＤＡＮ的约６００ｂｐ的序列进行了测定。结合已有的序列,构建了不同宿主的ＹＬＳ的分子系统树。结果表明,灰飞虱的ＹＬＳ属于子囊菌亚门Ｐｙｒｅｎｏｍｙｃｅｔｅｓ纲,与此纲的Ｈ．ｃｈｒｙｓｏｓｐｅｒｍｕｓ亲缘关系最近。我国各地区及日本的灰飞虱体内     

泰山虫草子实体形态特征与rDNA变异位点分析

用光学显微镜和扫描电镜对采自泰山的虫草子实体可孕部分进行形态观察,结果表明泰山虫草在子实体形态、子囊的排列方式、子囊的包埋方式、子囊壳的形态等与九州虫草完全一致。对虫草核糖体DNA的18S、28S、ITS区克隆测序,并进行序列比对后发现两种虫草的碱基差异较小,其同源性高达99%,符合种内遗传特性。结合形态学和分子生物学两方面的特征,初步推断两者可能都是九州虫草。