伊曲康唑和羟基伊曲康唑体外抗菌活性比较

目的了解伊曲康唑和羟基伊曲康唑对临床常见深部感染真菌的体外敏感性,并对两者抗菌活性进行比较分析。方法酵母菌分离自血液和无菌体液标本,曲霉菌分离自气管插管吸取物、支气管肺泡灌洗液和保护性毛刷;酵母菌采用显色培养基和API 20C鉴定到种,曲霉菌用乳酸酚棉兰压片镜检鉴定到种;微量肉汤稀释法进行药敏试验。结果全国10家医院共收集到338株真菌,包括念珠菌281株,曲霉菌37株,新生隐球菌18株和其他酵母菌2株。伊曲康唑(ITZ)对白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌的敏感率分别为83.8%,70.8%,78.6%,38.5%;50%以上克柔念珠菌为剂量依赖性敏感;伊曲康唑对光滑念珠菌敏感性较差;而对于新生隐球菌、黄曲霉和烟曲霉的MIC50/MIC90分别为0.5/0.5、1/1、1/1μg/mL;羟基伊曲康唑与伊曲康唑有相似的抗菌活性。结论伊曲康唑对大部分深部感染真菌的敏感性较好,光滑念珠菌对伊曲康唑耐药株增多;伊曲康唑主要代谢产物有体外抗菌活性。     

施用生物炭基肥对喀斯特石灰土磷元素特性的影响

以贵州省喀斯特山地石灰土为研究对象,采用盆栽试验方法,研究施用生物炭(稻壳炭)、猪粪堆肥和NPK肥3种肥料制成的生物炭基肥,测定土壤中不同形态磷含量、碱性磷酸酶活性及刺槐幼苗生物量。试验共设10个处理,分别为CK、M、F、MF、RH1MF、RH2MF、RH4MF、RH8MF、RH4M、RH4F(其中CK代表对照,M代表堆肥,F代表化肥,RH代表稻壳炭,数字代表生物炭按炭土质量比计算在生物炭基肥中的配比)。结果表明,施用生物炭基肥可显著提高喀斯特石灰土中总磷、有效磷、有机磷、微生物量磷含量及刺槐幼苗生物量,生物炭高施用量下处理(RH8MF)的效果更好,且4种不同形态的磷含量相互之间呈极显著正相关(P0.01);生物炭中等用量配比下生物炭基肥处理(RH2MF、RH4MF)的土壤碱性磷酸酶活性最高,分别比CK提高82.7%、63.4%。综上所述,施用生物炭基肥,尤其在生物炭较高施用量下,可以显著改善喀斯特石灰土中磷素含量,可改善石灰土中磷素含量较低状况,提高喀斯特山地人工幼林地生态恢复的成效。     

慢性阻塞性肺病患者巨噬细胞功能与受体表达的关系研究

目的:研究慢性阻塞性肺病(COPD)患者气道巨噬细胞功能变化及其与受体表达的相关性。方法:将COPD患者84例按病情分为轻中度组44例,重度组40例,选取同期健康体检者40例作为对照组,获取3组诱导痰,分离痰巨噬细胞,检测3组吞噬荧光标记曲霉孢子的吞噬指数(PI),采用实时定量反转录PCR法检测3组吞噬相关受体的表达。结果:轻中度组与重度组细胞总数均多于对照组,而巨噬细胞比例却显著下降(P0.05);轻中度组与重度组巨噬细胞吞噬功能均受到抑制,3组PI比较差异有统计学意义(P0.05);3组巨噬细胞胶原结构清道夫系统(MARCO)、清道夫受体A1(SR-A1)表达量比较差异不明显(P0.05);轻中度组与对照组Toll样受体4(TLR4)表达量比较差异不明显,但重度组TLR4表达上调,与轻中度组、对照组比较差异有统计学意义(P0.05);3组MUC5A、AQP5表达量比较差异显著(P0.05);巨噬细胞PI与TLR4、黏蛋白5AC(MUC5A)表达量呈负相关(P0.05),与水通道蛋白5(AQP5)表达量呈正相关(P0.05)。结论:COPD患者巨噬细胞占细胞总数的比例下降,其吞噬功能也受到抑制,其机制可能与TLR4、MUC5A表达上调及AQP5表达下调等有关。     

foxp3转染的CD4~+ CD25~- T细胞治疗急性肺损伤的研究

目的通过基因转染技术将foxp3基因导入CD4+CD25-T淋巴细胞,生成CD4+CD25-Foxp3+T细胞,通过输入急性肺损伤小鼠模型体内,促进炎症消退,为体外定向操纵调节T细胞生成和细胞过继治疗急性肺损伤奠定基础。方法采用RT-PCR法从小鼠胸腺来源cDNA文库中扩增获得foxp3 cDNA,亚克隆至构建pIRES2-EGFP质粒中,构建并筛选出重组质粒pmFoxp3-IRES2-EGFP;采用免疫磁珠法分离CD4+CD25-T淋巴细胞,穿孔法转染Foxp3基因至CD4+CD25-T淋巴细胞,流式细胞仪检测CD4+和EGFP共表达的细胞比例;将foxp3基因转染的小鼠CD4+CD25-T细胞通过尾静脉输注急性小鼠体内,通过ELISA法检测小鼠肺泡灌洗液中TNF-α以及IL-1β细胞因子的表达,通过肺组织病理研究肺部炎症的消退状况。结果成功构建双基因共表达重组质粒pmFoxp3-IRES2-EGFP;免疫磁珠法较高纯度分离CD4+CD25+、CD4+CD25-T淋巴细胞,电穿孔法成功将重组质粒pmFoxp3-IRES2-EGFP转染致CD4+CD25-T细胞,CD4+和EGFP共表达的细胞比例为35.5%;过继Foxp3基因转染的小鼠CD4+CD25-T细胞以及Treg均能抑制急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中TNF-α以及IL-1β炎性细胞因子的表达,促进炎症的消退。结论转染Foxp3基因的CD4+CD25-细胞同Treg(CD4+CD25-)细胞一样可以通过细胞过继治疗急性肺损伤。     

肺涎沫假丝酵母菌感染1例

涎沫假丝酵母菌(Candida zeylanoides)是一种少见的条件致病性真菌,其导致的系统性真菌感染罕见,仅见感染性心内膜炎、一过性菌血症和关节炎的报道,这些患者均存在明确的危险因素.涎沫假丝酵母菌导致的肺部真菌感染国内外目前未见报道.本文报道1例肺部涎沫假丝酵母菌感染,该患者为中年男性,既往体健,无明确的危险因素,影像学检查发现其两下肺大片状浸润性阴影,经皮肺穿刺活检标本病理学检查(PAS和PAM染色)、真菌培养(法国生物梅里埃微生物自动分析仪Vitek32 YBC卡鉴定)确诊为涎沫假丝酵母菌肺部感染,经氟康唑和斯皮仁诺治疗后治愈.     

RNA干扰技术抑制BAG-1在大鼠肺泡巨噬细胞表达及恢复GR抗炎效应的研究

目的利用RNA干扰技术,建立脂多糖(LPS)和地塞米松(Dex)作用大鼠肺泡巨噬细胞BAG-1基因阻断模型,并阐明BAG-1表达对糖皮质激素受体(GR)抗炎活性的影响。方法构建两个针对BAG-1的RNAi质粒表达载体,分别命名为SiBAG-1α和SiBAG-1β,经测序确认后,转染大鼠肺泡巨噬细胞。细胞免疫组织化学法检测细胞核中BAG-1表达变化;电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测GR活性变化。结果经测序证实:成功构建两个针对BAG-1基因的RNAi(RNA干扰)质粒表达载体SiBAG-1α和SiBAG-1β;转染质粒SiBAG-1α可明显降低胞核内BAG-1蛋白表达(P<0.05),而转染质粒SiBAG-1β对胞核内BAG-1蛋白表达无明显影响;质粒SiBAG-1α转染组细胞GR活性明显明显增强(P<0.05)。结论成功地构建并筛选出一个特异而高效地阻断BAG-1表达的质粒表达载体SiBAG-1α,抑制BAG-1表达可恢复GR抗炎活性,逆转GR活性下降所致的糖皮质激素抵抗。     

RNA干扰人pttg表达对肺癌SPC-A-1细胞表型的影响

目的研究RNA干扰人pttg表达对肺癌SPC-A-1细胞恶性表型的影响。方法构建针对人pttg的RNA干扰真核表达载体,运用脂质体介导转染SPC-A-1细胞并用G418筛选出阳性克隆株;半定量PCR和Western blot检测转染后PTTG mRNA及蛋白的表达水平;人工计数法检测阳性克隆株SPC-A-1细胞染色体倍性的变化;氚-胸腺嘧啶核苷掺入法观察抑制人pttg表达后SPC-A-1细胞增殖能力的改变;TUNEL法检测细胞凋亡的变化情况。结果成功构建针对人pttg基因的RNA干扰真核表达载体（命名为Si-hPTTG）,转染后筛选获得人pttg下调表达的SPC-A-1细胞株;Si-hPTTG转染使SPC-A-1细胞PTTG mRNA和蛋白的表达较未转染组和阴性对照质粒组均显著下调;Si-hPTTG转染后SPC-A-1细胞染色体众数和平均数增加,3H掺入量显著降低,细胞凋亡明显增加。结论人pttg下调表达可增加SPC-A-1细胞染色体众数和平均数,伴有减轻染色体结构畸变的趋势;显著抑制SPC-A-1细胞增殖,增加细胞凋亡。人pttg可能是肺癌治疗的新靶点。