胰岛素在巨噬细胞泡沫化过程中对Toll样受体4表达的影响及其机制

目的:观察胰岛素对巨噬细胞破泡沫化过程中Toll样受体4(TLR4)表达及IL-6、TNF-α分泌的影响.方法:采用体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导建立泡沫细胞模型,分为对照组、ox-LDL组、用胰岛素组、PI3K-AKT抑制剂组.油红O染色观察泡沫细胞模型的建立,取细胞上清用ELISA法检测白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;流式细胞术检测膜蛋白TLR4表达量,Western-blot检测TLR4、核因子-κB (NF-κB)的表达水平.结果:与对照组相比,ox-LDL处理过的巨噬细胞可向泡沫细胞转换,同时TLR4、NF-κB蛋白表达水平以及IL-6、TNF-α水平显著增加(P＜0.05);而使用胰岛素干预后ox-LDL的作用显著减弱,TLR4、NF-κB蛋白表达水平以及IL-6、TNF-α水平显著降低(P ＜0.05 vs ox-LDLgroup);而使用PI3K-AKT抑制剂干预后,抑制剂显著降低胰岛素的作用,TLR4、NF-κB蛋白表达水平以及IL-6、TNF-α水平显著升高(P ＜0.05 vs ox-LDL+ insulin).结论:ox-LDL可诱导巨噬细胞向泡沫细胞转化,同时上调TLR4及NF-κB蛋白表达,增加炎性因子分泌,促进了AS进程,而胰岛素可使ox-LDL的作用显减弱,减少TLR4、NF-κB蛋白表达及炎性因子分泌,从而减轻AS进程,其机制可能与胰岛素通过PI3K-AKT抑制TLR4-NF-κB通路有关.     

吸烟大鼠肺脏AQP4 和MUC5AC 的表达及其与 一氧化氮的关系

目的:研究烟草烟雾吸入对大鼠肺组织水通道蛋白4(AQP4)和粘蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响及其与支气管肺泡灌洗液内一氧化氮代谢物水平的关系,探讨氧化应激对肺部水转运和粘液分泌的影响。方法:免疫组化法观察AQP4在肺组织内的表达,平均光密度法比较模型组和空白组大鼠AQP4的表达差异;半定量RT-PCR法检测肺组织内AQP4及MUC5AC mRNA的表达水平;硝酸还原酶法测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液内一氧化氮代谢产物的浓度,分析模型组AQP4、MUC5AC mRNA的表达水平与支气管肺泡灌洗液内一氧化氮代谢物浓度之间的相关关系。结果:AQP4在空白对照组呈强阳性染色,在模型组呈弱阳性染色,两者平均光密度值有显著差异(P<0.05)。模型组动物肺组织AQP4 mRNA的表达降低,MUC5AC mRNA的表达升高,与空白组比较均有显著差异(P<0.05),模型组动物支气管肺泡灌洗液内一氧化氮代谢产物的浓度与肺组织AQP4 mRNA表达水平呈负相关,相关系数r=-0.798(,P<0.05),与MUC5AC mRNA的表达水平呈正相关,相关系数r=0.857(,P<0.05)。结论:吸烟可导致肺组织AQP4表达下降进而影响气道内水的转运。一氧化氮可能参与了烟雾吸入动物模型中AQP4与MUC5AC基因表达的调控。     

大鼠实验性根尖周炎中TLR2表达的研究

目的研究混合菌在大鼠根尖周炎过程中对Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)的表达影响。方法取20只SD大鼠,随机分为4组,每组5只。对鼠的右侧下颌第一磨牙开髓,A1~A4组封药时间分别为1、2、3和4周。对照为健康的左侧下颌第一磨牙。按照实验设计的时间点处死SD大鼠,提取右下颌第一磨牙根尖区组织,采用Real-time PCR检测TLR2mRNA的表达情况。结果对照中有少量TLR2mRNA表达,A1和A2组TLR2mRNA的表达水平(1.71±0.10 vs 2.49±0.22)呈增高趋势,分别是对照数值(1.00)的1.71倍和2.49倍(P0.05);A3组最高峰(2.94±0.14)为对照(1.00)的2.94倍(P0.05);但A4组(1.79±0.14)开始下降。A2与A3两组(2.49±0.22 vs 2.94±0.14)比较差异有统计学意义。结论 TLR2在大鼠的混合菌感染的根尖周炎全过程中均有所表达,其表达水平在根尖周炎中发挥着重要作用。     

Fucoidan对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用

目的观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan)对巨噬细胞RAW264.7体外吞噬活性、细胞因子TNF-α和IL-6分泌,以及Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响。方法实验分对照组,Fucoidan高、中、低剂量组(浓度分别是200、400和800μg/mL)。药物处理6~48h后,MTT法检测RAW264.7细胞活力;中性红比色法检测细胞吞噬活性;ELISA法检测培养上清中TNF-α和IL-6的分泌水平;实时定量PCR检测Toll样受体4(TLR4)mRNA表达量。结果与对照组相比,Fucoidan显著增强RAW264.7细胞代谢活力和吞噬能力(P0.01),增加TNF-α和IL-6的分泌,上调TLR4的表达,呈剂量依赖关系。结论 Fucoidan可上调TLR4表达,增强巨噬细胞代谢和吞噬活性,增加TNF-α和IL-6的分泌,具有潜在的调节免疫作用。     

吸烟大鼠肺脏AQP4和MUC5AC的表达及其与一氧化氮的关系

目的：研究烟草烟雾吸入对大鼠肺组织水通道蛋白4（AQP4）和粘蛋白5AC（MUC5AC）表达的影响及其与支气管肺泡灌洗液内一氧化氮代谢物水平的关系,探讨氧化应激对肺部水转运和粘液分泌的影响。方法：免疫组化法观察AQP4在肺组织内的表达,平均光密度法比较模型组和空白组大鼠AQP4的表达差异;半定量RT—PCR法检测肺组织内AQP4及MUC5ACmRNA的表达水平;硝酸还原酶法测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液内一氧化氮代谢产物的浓度,分析模型组AQP4、MUC5ACmRNA的表达水平与支气管肺泡灌洗液内一氧化氮代谢物浓度之间的相关关系：结果：AQP4在空白对照组呈强阳性染色,在模型组呈弱阳性染色,两者平均光密度值有显著差异（P〈0．05）。模型组动物肺组织AQP4mRNA的表达降低,MUC5ACmRNA的表达升高,与空白组比较均有显著差异（P〈0．05）,模型组动物支气管肺泡灌洗液内一氧化氮代谢产物的浓度与肺组织AQP4mRNA表达水平呈负相关,相关系数r=-0．798,（P〈0．05）,与MUC5ACmRNA的表达水平呈正相关,相关系数r=0．857,（P〈0．05）。结论：吸烟可导致肺组织AQP4表达下降进而影响气道内水的转运。一氧化氮可能参与了烟雾吸入动物模型中AQP4与MUC5AC基因袁达的调控．     

氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞吞噬和分泌功能的影响

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对巨噬细胞源性泡沫细胞吞噬功能和炎症相关因子分泌功能的影响。方法:利用佛波酯(phorbol ester,PMA)诱导THP-1细胞分化形成巨噬细胞,之后采用ox-LDL处理48小时后,诱导其形成泡沫细胞。利用中性红吞噬实验,分析泡沫细胞形成前后吞噬功能的变化;通过ELISA法,检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)含量,观察ox-LDL对THP-1巨噬细胞功能的影响。结果:细胞形态学结果表明,我们成功利用ox-LDL诱导THP-1巨噬细胞形成泡沫细胞;进一步发现ox-LDL诱导THP-1巨噬细胞表面的清道夫受体CD36表达升高,并促进细胞吞噬功能增加,进一步促进细胞内胆固醇含量显著升高(P0.05);同时,ox-LDL能够刺激巨噬细胞大量分泌TNF-α(P0.05)。结论:ox-LDL通过增强清道夫受体CD36表达,提高巨噬细胞的吞噬功能,引起大量胆固醇聚集,产生细胞毒性损伤,并促进TNF-α炎性因子的大量分泌。     

TLR-4 在慢性阻塞性肺病患者肺组织表达的研究

目的:观察COPD患者肺组织中TLR-4,IL-8,MUC5AC的表达,并探讨其在气道炎症、气道高分泌中的作用。方法:非COPD、COPD组男性肺癌病人各20例,取其肺叶切除后的外周肺组织,对肺组织标本行HE及AB-PAS染色,用免疫组织化学方法检测肺组织中TLR-4,IL-8,MUC5AC的表达并分析其相关性。结果:①COPD患者肺组织中TLR-4,IL-8,MUC5AC表达较对照组增高(P<0.05)。TLR-4主要在气道上皮细胞、肺巨噬细胞及血管内皮细胞表达,IL-8在气道壁、肺泡间隔、血管壁及肺组织内浸润的单核细胞、巨噬细胞、多形核白细胞均有表达,MUC5AC主要在气道上皮杯状细胞中表达。②TLR-4、IL-8表达与气道炎细胞评分成正相关(P<0.05)。TLR-4与IL-8、MUC5AC表达成正相关(P<0.05)。结论:COPD患者肺组织中TLR-4高表达可能参与了COPD的气道炎症及气道高分泌,这可能是通过增加IL-8与MUC5AC的表达来实现的。     

益生菌对急性溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜Toll样受体表达的影响

目的探讨益生菌对溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型肠黏膜Toll样受体(TLRs)表达的调控及其在UC发生发展中可能的作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、金双歧治疗组(C组)、Toll样受体4单克隆抗体(TLR4m Ab)干预组(D组)。采用三硝基苯磺酸(TNBs)法造模,C组给予金双歧灌服,D组给予TLR4m Ab腹腔注射,第8天处死全部大鼠。对每组大鼠进行疾病活动指数(DAI)评分及组织病理学(HPS)评分,应用实时荧光定量(RT-PCR)法测定TLR4、TLR2 m RNA的表达。结果 B组DAI及HPS评分均明显高于A组(P0.05),C组和D组较模型组均有所缓解(P0.05)。TLR4、TLR2 m RNA在B组的表达明显高于A组,差异有统计学意义(P0.05),而在C组和D组的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 UC大鼠结肠组织中TLR4、TLR2表达异常,益生菌能抑制TLR4、TLR2的表达,可能是一种有效治疗UC的方法。     

香烟烟雾暴露对支气管哮喘大鼠肺组织水通道蛋白5表达的影响

目的探讨香烟烟雾暴露对支气管哮喘大鼠肺组织水通道蛋白5(Aquaporin 5,AQP5)和黏蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为3组(n=10),对照组雾化生理盐水,哮喘组采用卵清白蛋白(OVA)致敏并吸入激发制备哮喘模型,哮喘+烟雾暴露组于每日雾化激发OVA前给予香烟烟雾吸入。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞计数及分类,测定肺组织病理变化及湿干重比值。实时定量PCR(Realtime PCR)测定AQP5和MUC5AC mRNA的表达,免疫组化法测定AQP5蛋白分布情况,免疫印迹法(Western blot)测定AQP5蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BALF中MUC5AC的含量。结果①与对照组相比,哮喘组大鼠BALF中白细胞、淋巴细胞、嗜酸粒细胞、中性粒细胞数量明显增加;与哮喘组相比,暴露组大鼠BALF中白细胞、中性粒细胞数量明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。②与对照组相比,哮喘组和暴露组大鼠肺组织中AQP5表达明显减少,而MUC5AC蛋白含量明显增加;与哮喘组相比,暴露组大鼠肺组织中AQP5明显减少,而MUC5AC蛋白含量明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。③肺组织中AQP5表达与肺组织BALF中MUC5AC蛋白含量呈负相关(r=-0.852和-0.895,P<0.05)。结论香烟烟雾暴露可导致哮喘大鼠肺组织AQP5表达减少而MUC5AC含量增加,进一步加重哮喘气道炎症和黏液高分泌反应,这可能为哮喘吸烟患者的早期防治提供新思路。     

湿热应激和习服对小鼠气道黏液分泌的影响

目的：通过观察高温高湿环境暴露下小鼠气道黏液分泌相关蛋白在不同时间段的变化,探讨应激和习服在湿热环境中对呼吸系统疾病的作用。方法：45只BABL/c小鼠随机分成5组（n=9）：对照组、湿热1组、湿热2组、湿热3组、湿热4组。对照组普通环境饲养,7 d后处死。其余各组置入气候箱接受湿度（95±5）%,温度（33±0.5）℃的高温高湿刺激,第12小时处死为湿热1组,第24小时处死为湿热2组,第4天处死为湿热3组,第7天处死为湿热4组。免疫组化法检测小鼠肺黏蛋白5AC （MUC5AC）、表皮生长因子受体（EGFR）、水通道蛋白1（AQP1）、水通道蛋白5（AQP5）蛋白表达。结果：把小鼠置入高温高湿环境后,小鼠肺组织在12 h时AQP5增高,在24 h时MUC5AC、EGFR的蛋白表达增高,与正常组比较差异均有统计学意义（P<0.05）;第7天,MUC5AC蛋白表达水平显著低于正常组（P<0.05）;其余时间段,MUC5AC、EGFR、AQP5蛋白表达均与正常组无明显差异。AQP1蛋白表达在湿热各组均与正常组无差异,与湿热1组、湿热2组比较,湿热3组、湿热4组表达则减弱（P<0.05）。结论：湿热应激可引起小鼠气道黏液高分泌,持续处于该环境则可能产生一系列更复杂的反应。     

诱导痰黏蛋白5AC对支气管哮喘和慢性阻塞性肺疾病的鉴别价值

摘要 目的：对支气管哮喘（BA）患者和慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者诱导痰黏蛋白5AC（MUC5AC）、炎症细胞和炎症因子水平进行比较以及相关性分析,评估MUC5AC鉴别BA和COPD的价值。方法：选取2018年9月至2019年9月来海南医学院第一附属医院就诊的BA稳定期患者（BA组）60例,同期COPD稳定期（COPD组）患者60例。诱导痰法采样并处理痰液,检测诱导痰MUC5AC、炎症细胞中性粒细胞（Neu）、巨噬细胞（Mac）、嗜酸性粒细胞（Eos）、淋巴细胞（Lym）、炎症因子血管内皮生长因子（VEGF）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、白介素13（IL-13）和白介素17（IL-17）水平,通过Pearson相关分析对MUC5AC水平与Neu、Mac、Eos、Lym、VEGF、ICAM-1、IL-13、IL-17的关系进行分析。此外,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析MUC5AC、炎症细胞及炎症因子鉴别诊断BA及COPD的效能。结果：COPD组诱导痰MUC5AC水平高于BA组,差异有统计学意义（P＜0.05）;COPD组诱导痰Mac和Eos水平均低于BA组,COPD组诱导痰Neu水平高于BA组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;COPD组诱导痰VEGF、ICAM-1、IL-13和IL-17水平均低于BA组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;Pearson相关分析结果显示,诱导痰MUC5AC与炎症细胞Mac、Eos和炎症因子VEGF、ICAM-1、IL-13和IL-17呈负相关（P＜0.05）,与炎症细胞Neu呈正相关（P＜0.05）。经ROC曲线分析可得：诱导痰MUC5AC鉴别BA和COPD的曲线下面积、灵敏度、特异度以及约登指数均高于炎症细胞Neu、Mac、Eos以及炎症因子VEGF、ICAM-1、IL-13、IL-17。结论：COPD患者诱导痰MUC5AC水平高于BA患者,MUC5AC与炎症细胞和炎症因子有关,MUC5AC的检测有助于鉴别BA或COPD,其有望作为临床BA或COPD的监测指标和治疗靶点。     

血清MUC1、SCD-1、NLRP3在溃疡性结肠炎患者中的表达与凝血功能异常的相关性

摘要 目的：探讨与分析血清粘蛋白1（MUC1）、硬脂酰辅酶A脱氢酶-1（SCD-1）、含NLR家族PYRIN域蛋白3（NLRP3）在溃疡性结肠炎患者中的表达与凝血功能异常的相关性。方法：2019年8月到2021年7月选择在本院诊治的溃疡性结肠炎患者78例作为病例组（包括轻度组患者50例与中重度组患者28例）,同期选择在本院进行体检的健康人员78例作为对照组,检测三组血清MUC1、SCD-1、NLRP3水平与凝血指标,同时进行相关性分析与影响因素分析。结果：三组的血小板计数（PLT）、平均血小板体积（MPV）、血红蛋白（HGB）对比无差异（P>0.05）。中重度组与轻度组的血清MUC1、SCD-1、NLRP3含量高于对照组,中重度组高于轻度组（P<0.05）。中重度组与轻度组的部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）低于对照组,纤维蛋白原（FIB）高于对照组,中重度组与轻度组对比也存在差异（P<0.05）。在病例组中,Pearson 分析显示血清MUC1、SCD-1、NLRP3表达水平与凝血指标存在相关性（P<0.05）。Logistic多元回归方程显示MUC1、SCD-1、NLRP3等都为影响患者病情活动度的重要因素（P<0.05）。结论：溃疡性结肠炎患者多伴随有血清MUC1、SCD-1、NLRP3的高表达,也多伴随有凝血功能异常,MUC1、SCD-1、NLRP3表达与凝血功能异常存在相关性,也是影响患者病情活动度的重要因素。     

大柴胡汤对轻症急性胰腺炎患者Th17/Treg免疫平衡和血清水通道蛋白的影响

摘要 目的：观察大柴胡汤对轻症急性胰腺炎（MAP）患者辅助性T细胞17 /调节性T细胞（Th17/Treg）免疫平衡和血清水通道蛋白（AQP）的影响。方法：按照随机数字表法，将天津中医药大学第一附属医院2020年4月~2022年4月期间收治的95例MAP患者分为对照组（西医基础治疗，47例）和研究组（对照组基础上接受大柴胡汤治疗，48例）。对比两组中医证候积分、Th17/Treg免疫平衡、AQP1、AQP5、AQP6和实验室指标。结果：两组治疗7 d后两胁胀痛，矢气则舒，右中上腹痛，恶心呕吐，抑郁易怒，嗳气呃逆，大便不畅评分均下降，且研究组低于对照组（P<0.05）。两组治疗7 d后Treg细胞比例升高，Th17细胞比例、Th17/Treg下降，且研究组的改善幅度大于对照组（P<0.05）。两组治疗7 d后AQP1、AQP5、AQP6升高，且研究组高于对照组（P<0.05）。两组治疗7 d后淀粉酶（AMY）、脂肪酶（LIP）、C反应蛋白（CRP）下降，且研究组低于对照组（P<0.05）。结论：大柴胡汤治疗MAP疗效确切，可以缓解患者的临床症状，有效改善MAP患者Th17/Treg免疫平衡和血清AQP1、AQP5、AQP6水平。     

膝骨关节炎患者关节液和滑膜中IL-6、MMP-13、VEGF的表达及与病情进展的关系

目的:研究膝骨关节炎(KOA)患者关节液和滑膜中白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及与病情进展的关系。方法:选择自2017年1月到2017年6月在我院就诊的KOA患者30例进行研究,其中维吾尔族和汉族各15例,分别记为维吾尔族组和汉族组。另选同期在我院接受骨折修复和截肢等手术治疗的10例无骨关节炎的患者作为对照组。对比各组IL-6、MMP-13及VEGF水平以及关节软骨中水通道蛋白3(AQP3)阳性表达率,对比维吾尔族组和汉族组软骨不同区域内AQP3阳性表达,分析KOA患者关节液和滑膜中IL-6、MMP-13、VEGF及关节软骨中AQP3的阳性表达与病情进展的相关性。结果:维吾尔族组和汉族组关节液和滑膜中IL-6、MMP-13及VEGF水平均分别高于对照组,差异均有统计学意义(均P0.05)。维吾尔族组和汉族组关节软骨中AQP3阳性表达率均分别明显高于对照组,且维吾尔族组明显高于汉族组,差异均有统计学意义(均P0.05)。维吾尔族组和汉族组浅层软骨磨损严重区的AQP3阳性表达率明显高于软骨深层区和软骨下骨区,差异均有统计学意义(均P0.05)。Spearman相关性分析显示,KOA患者关节液和滑膜中IL-6、MMP-13、VEGF及关节软骨中AQP3的阳性表达与病情进展均呈正相关(均P0.05)。结论:KOA患者关节液和滑膜中IL-6、MMP-13、VEGF水平及关节软骨中AQP3阳性表达均异常升高,以上指标参与了病情的进展,且AQP3阳性表达高低还与民族有关,临床上可考虑将这些指标作为监测KOA患者病情的靶点。     

胰腺癌患者循环肿瘤细胞及TLR4、TLR9、myd88的表达水平与其化疗效果及转移、复发的关系

目的:探讨胰腺癌患者循环肿瘤细胞(CTC)中Toll样受体4(TLR4)、Toll样受体9(TLR9)、髓样分化因子88(myd88)的表达水平与患者化疗效果及转移、复发的关系。方法:将我院2015年6月-2016年6月收治并确诊的48例胰腺癌患者作为试验组,收集患者循环肿瘤细胞(CTC),检测其TLR4、TLR9、myd88信号表达情况,探讨其TLR4、TLR9、myd88信号表达水平与患者化疗效果及转移、复发的关系。结果:48例胰腺癌患者检出CTC 35例,检出率为72.9%。胰腺癌死亡、转移、复发患者TLR4、TLR9、myd88表达水平分别高于其存活、未转移、未复发患者,组间具有统计学差异(P0.05)。胰腺癌化疗效果CR患者TLR4、TLR9、myd88表达水平显著低于其化疗效果PR、SD、PD患者,且四组间差异具有统计学意义(P0.05);TLR4、TLR9、myd88表达水平与被膜受侵犯、淋巴结转移、肿瘤大小、CA199水平呈正相关(P0.05)。结论:胰腺癌患者CTC中TLRs/myd88信号表达水平与患者化疗效果及转移、复发密切相关。     

dl-3-正丁基苯酞对脑损伤大鼠的神经保护作用的实验研究

目的:研究dl-3-正丁基苯酞(NBP)对脑损伤大鼠的神经保护作用。方法:将100只7周龄清洁级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分成5组,分别为假手术组、模型组、NBP低、中和高剂量组,每组20只。使用控制性皮层撞击损伤建立中型大鼠颅脑损伤模型。将NBP溶解在大豆油中,NBP低、中和高剂量组分别按照每天20、40和80 mg/kg的剂量灌胃,假手术组和模型组灌胃等体积的大豆油,共给药2周。采用改良神经功能缺损评分(m NSS)对大鼠的神经系统状况进行评价。检测各组大鼠治疗后的脑组织含水量以及脑组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。TUNEL方法鉴定细胞的凋亡。通过RT-PCR、Western blot或免疫组化检测脑组织中Nrf2、NQO-1、HO-1、ApoJ、MMP9、AQP4、Caspase-3和AKT的表达。结果:NBP治疗2周后,NBP低、中和高剂量组大鼠的m NSS评分和神经元凋亡率以剂量依赖性方式显著降低(P0.05)。与模型组比较,NBP低、中和高剂量组大鼠的脑含水量均显著降低(P0.05)。与模型组比较,NBP低、中和高剂量组大鼠的MDA显著降低,而SOD和GSH-Px显著升高(P0.05)。与模型组比较,NBP低、中和高剂量组大鼠的细胞核Nrf2显著升高,而细胞质Nrf2显著降低(P0.05)。与模型组比较,NBP低、中和高剂量组大鼠的NQO-1和HO-1蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与模型组比较,NBP低、中和高剂量组大鼠的AQP4、MMP-9、ApoJ和Caspase-3的m RNA和蛋白表达水平均显著降低,而AKT显著升高(P0.05)。结论:NBP对创伤性颅脑外伤大鼠具有一定的神经保护作用。     

过表达MicroRNA-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控人退变髓核细胞自噬的研究

目的:探讨过表达mi R-21通过PTEN/PI3K/AKT通路对人退变髓核细胞自噬的影响。方法:构建稳定过表达mi R-21 mimic人退变髓核细胞,转染无意义序列作为mi R-21 mimic control组,采用RT-qPCR检测转染效率;利用MDC荧光染色法观察细胞自噬泡;Western-Blot检测细胞自噬相关蛋白LC3和P62的表达以及PTEN/PI3K/AKT信号通路中关键蛋白PTEN、PI3K及AKT的表达水平。结果:RT-qPCR结果表明mi R-21 mimic转染成功且效率较高,与mi R-21 mimic control组及空白细胞对照组相比,差异显著(P0.05)。荧光显微镜观察MDC染色情况,mi R-21 mimic组的细胞中几乎没有发现自噬体,而mi R-21 mimic control组以及空白对照组细胞中自噬体均较多,与前者相比差异均明显,具有统计学意义(P0.05)。mi R-21 mimic组细胞中LC3-II/LC3-I表达量的比值均显著低于mi R-21 mimic control组及空白对照组细胞(P0.05);而P62在mi R-21 mimic组细胞中表达量显著高于mi R-21 mimic control组及空白细胞对照组,具有统计学意义(P0.05)。mi R-21 mimic组中PTEN蛋白的表达水平较低,与另外两组相比具有统计学意义(P0.05);磷酸化的PI3K(p-PI3K)和AKT(p-Akt)在mi R-21 mimic组中均明显高于mi R-21 mimic control组和空白细胞对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:mi R-21可以通过靶向沉默PTEN,促进PI3K和AKT发生磷酸化,进而使PTEN/PI3K/AKT信号通路被激活,最终抑制人椎间盘退变髓核细胞的自噬。     

肺虚痰阻证模型大鼠肺组织水通道蛋白1 和5 分子表达与补肺化痰方对 其影响*

目的:1)从肺泡上皮水主动转运功能的角度探讨肺虚痰阻证的发生机理。2)通过观察肺虚痰阻证模型的AQP的活性及其相关基因、蛋白的表达和补肺化痰中药复方治疗前、后的对比,观察这一过程中上述指标的变化情况。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药治疗组。模型组和治疗组造模40天,治疗组在造模26天后,药物灌胃治疗2周。采用组织化学染色法,对大鼠肺进行病理分析;RT-PCR的方法检测大鼠肺组织中AQP1、AQP5基因表达;western blot法检测大鼠肺组织中AQP1、AQP5蛋白水平。结果:1)与正常组相比,模型组局部出现明显炎症反应(P<0.01),治疗组局部炎症反应减轻(P<0.05)。2)mRNA结果显示,AQP1在正常组有表达,在模型组和治疗组未见表达。AQP5模型组与正常组相比,表达量显著增高(P<0.01);治疗组与模型组比较,表达量显著降低(P<0.01),但与正常组无显著差异。3)蛋白水平上,AQP1在模型组和治疗组与正常组相比差异显著(P<0.05),表达下降。AQP5模型组与正常组相比,显著升高(P<0.01);治疗组与模型组比较,显著下调(P<0.05);正常组表达低于治疗组,差异显著(P<0.05)。结论:1)AQP1和5基因及蛋白表达量变化是肺虚痰阻证的病理机制之一。2)补肺化痰中药复方可调节肺虚痰阻证模型大鼠肺组织AQP 5基因及蛋白表达。提示补肺化痰中药复方治疗肺虚痰阻证其作用机制与调节AQP5有关。