肿瘤特异性蛋白B7-H4纳米抗体的筛选和鉴定

羊驼体内存在天然缺少轻链的重链抗体,克隆重链抗体可变区(VHH),即可构建单域抗体(single-domain antibodies,sdAbs),又称纳米抗体(nanobody,Nb)。利用非免疫羊驼噬菌体文库筛选肿瘤特异性蛋白B7-H4的纳米抗体,经过4轮淘选,ELASE鉴定阳性克隆噬菌体,测序获得其DNA序列后体外转录为mRNA,将修饰纯化后的mRNA转染到肿瘤细胞,利用细胞免疫荧光检测mRNA在肿瘤细胞内是否表达,Western印迹进一步验证其表达情况;通过CCK-8法鉴定其对肿瘤细胞的增殖抑制能力;划痕实验鉴定其对肿瘤细胞迁移能力的影响;Transwell法鉴定其对肿瘤细胞的侵袭能力的影响;裸鼠荷瘤模型瘤旁注射mRNA,鉴定其在体内实验对肿瘤组织的作用。结果显示,通过淘选获得1个高亲和性的噬菌体株菌H6;DNA测序并导出的氨基酸序列符合羊驼纳米抗体结构;将其mRNA导入肿瘤细胞,能有效表达出纳米抗体H6;转染H6-mRNA的肿瘤细胞(0.84±0.08)与未转染H6-mRNA的对照组(1.83±0.04)相比,其增殖能力明显受到抑制,P<0.01,其迁移和侵袭能力(78.60±5.36)明显低于空白对照组(197.80±21.04),效果优于B7-H4 mRNA的siRNA(95.40±16.56);在裸鼠乳腺癌模型中能有效抑制肿瘤生长,效果优于紫杉醇和B7-H4 mRNA的siRNA。这说明筛选所得抗B7-H4纳米抗体H6能特异结合B7-H4蛋白并封闭其功能,导致肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制。该结果为利用B7-H4作为治疗癌症的靶点提供了实验基础。     

ITS/CHS1靶位序列分析结合SRAP分子标记技术鉴定Nannizzia incurvata临床分离株

以转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）和几丁质合成酶1（chitinase synthase 1,CHS1）为鉴定靶位,结合种系进化分析将2007年至2016年分离自头癣或面癣患儿的12株石膏样小孢子菌复合体成员（现被归入Nannizzia菌属）鉴定到种水平,其中5株为Nannizzia gypsea（Microsporum gypseum）,另7株为Nannizzia incurvata（Microsporum incurvatum）。在此基础上,通过序列相关扩增多态性（SRAP）分子标记进一步证实二者在DNA多位点存在扩增多态性。本研究证实在我国湖北地区存在Nannizzia incurvata,为我国开展Nannizzia菌属的分子流行病学研究提供了实验室依据和支持。     

自体吸疱表皮移植术结合搔刮术治疗白癜风的临床评价

目的:观察和比较搔刮术结合负压吸疱术和传统负压吸疱术对白癜风复色的疗效。方法:将90例稳定期白癜风患者随机分成搔刮术结合负压吸疱术组(45例)和传统负压吸疱术组(45例),分别给予搔刮术结合负压吸疱术和传统负压吸疱术治疗。治疗后,比较两组的复色情况,是否留有白斑缝隙,并进行白癜风疗效评价。进一步分析皮损部位、性别、临床类型对搔刮术结合负压吸疱术和传统负压吸疱术临床疗效的影响。结果:治疗后,搔刮术结合负压吸疱术组和传统负压吸疱术组在整体疗效无显著性差异(P0.05)。搔刮术结合负压吸疱术组术后获得成片复色比例显著高于传统负压吸疱术组(88.9%vs. 4.4%,P0.001)。不同性别患者接受搔刮术结合负压吸疱术和传统负压吸疱术的疗效比较均无统计学差异(P0.05)。表皮移植术结合搔抓术组和单一表皮移植术组中,皮损发生在颈部、面部相比于躯干部、四肢、手足部的疗效明显更佳,局限型和节段型相比于散发型、肢端型的疗效更佳。结论:自体吸疱表皮移植术结合搔刮术用于稳定期白癜风的复色效果相比于传统自体吸疱表皮移植术疗效更佳。     

脐血干细胞移植治疗中间型脊髓性肌萎缩症1例并文献复习

目的：探讨脐血干细胞移植治疗中间型脊髓性肌萎缩症的临床治疗可行性及效果。方法：已确诊的中间型脊髓性肌萎缩症患儿,采用脐血干细胞移植治疗,4次为一疗程,移植途径采用静脉输注（1次）加蛛网膜下腔注射（3次）的方法,治疗前和治疗后半年均需完善神经系统体检、实验室检查、FIM评分、肌电图等。结果：移植治疗后患儿神经系统症状明显改善,FIM评分提高,实验室检查肌酶下降,肌电图提示重收缩每10.0ms所检肌运动单位较前增加。随访10月患儿未出现副反应。结论：应用脐血干细胞移植治疗中间型脊髓性肌萎缩症是有效安全的,可以改善患儿神经功能。     

南岳衡山藤本植物资源研究

根据野外调查,结合文献资料,对南岳衡山藤本植物的区系及其生态特征进行了初步的研究,结果表明:该区野生藤本植物共计59科129属282种(含变种),分别占该区维管植物科、属、种总数的29.35％、16.82％和15.60％.该区地里成分复杂,以热带性分布为主,温带成分亦占有较大比例,其中科、属以泛热带分布型最多,分别占科、属总数的38.98％和23.26％,而种以热带亚洲分布型最多,达25.89％,表明该区藤本植物区系是以热带性质为主的亚热带类型,同时也显示出该区藤本植物区系向温带渗透和过渡的性质;该区中国特有种丰富,共计106种,占种总数的37.59％,属华东区系,与华东、华中、华南及滇、黔、桂有着极密切的联系;该区藤本的生态分布是随着海拔的升高,温度的降低,藤本的种类与数量也相应地减少.树木和藤本无亲疏关系,未发现某些藤本偏爱某些树种胜于其他树种;在区系关系上,该区与康龙和庐山的关系最为密切,而与崀山和龙底的关系较为疏远.     

衡山青冈栎群落结构及物种多样性研究

利用样方法进行野外群落调查,共设计了15个样方,每个样方大小为20m×5 m,对衡山青冈栎(Cyclobalanopsis glauca)群落的种类组成、外貌、结构特征及物种多样性进行了研究.结果表明:在1 500 m2样地中,共有维管束植物26科37属46种,其中优势科为壳斗科、山茶科和蔷薇科等;该群落主要是以青冈栎为主的单优种群落,生活型谱以高位芽植物占绝对优势,叶级谱以中、小型叶为优势的特点,群落季相不明显;群落分层较明显,乔木层树种很少,灌木层种类较丰富,对群落物种多样性具有较大影响;物种多样性分析显示该群落多样性指数偏低,其多样性复杂程度由高到低的顺序为灌木层、藤本层、乔木层、草本层.     

新冠病毒主蛋白酶小分子抑制剂荧光共振能量转移高通量筛选模型的优化与应用北大核心CSCD

基于荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)原理,以新冠病毒主蛋白酶(main protease, Mpro)为靶标,建立并应用Mpro小分子抑制剂FRET高通量筛选模型,以期快速筛选新型Mpro小分子抑制剂。利用大肠杆菌原核表达与分离纯化高活性的Mpro,再以FRET法进行比活力测定。基于FRET原理,以7-甲氧基香豆素-4-乙酸(7-methoxycoumarin-4-acetic acid, MCA)与2,4-二硝基苯酚(2,4-dinitropheno, Dnp)标记的多肽作为Mpro水解底物,通过优化反应缓冲液、Mpro反应浓度、反应温度与时间及DMSO耐受浓度,建立并应用Mpro小分子抑制剂FRET高通量筛选模型进行苗头化合物的筛选。利用大肠杆菌实现了高活性Mpro的原核表达与分离纯化,且比活力不低于40 000 U/mg。通过一系列优化实验,使用0.4μmol/L Mpro与5μmol/L底物建立了Z′因子值为0.79的Mpro小分子抑制剂FRET高通量筛选模型,且反应体系中含有的二硫苏糖醇(1,4-dithiothreitol,DTT)是影响FRET筛选模型可靠性的重要因素。通过对天然产物化合物库进行高通量筛选,发现白花丹素与银杏酸在体外对Mpro酶活性具有良好的抑制作用。本研究建立了基于FRET原理的Mpro小分子抑制剂高通量筛选模型,初步证实了白花丹素与银杏酸是一类新型苗头化合物,为抗新型冠状病毒药物先导化合物的筛选与发现奠定了基础。     

鸡胚胎干细胞多能性相关基因cNanog和cPouV干扰载体的构建及筛选

旨在构建靶向鸡胚胎干细胞多能性相关基因cNanog和cPouV的siRNA表达载体,并在体外检测其对cNanog和cPouV表达的抑制作用。分别选择cNanog和cPouV中3个区域合成寡聚核苷酸构建siRNA表达载体,同时构建cNanog和cPouV全基因表达载体来检测基因表达下调的效果。经Western blotting检测显示,所构建的siRNA表达载体可在293T细胞内表达siRNA或shRNA,诱发RNA干扰效应,从而抑制目的基因cNanog和cPouV的表达。不同位点的寡核苷酸序列抑制效率不同,其中pS3-cNanog和pS3-cPouV重组质粒的干扰效果和抑制效率最好。研究结果为后续得到稳定干扰cNanog和cPouV基因的重组载体和进一步研究cNanog和cPouV基因功能奠定了基础。     

南岳衡山珍稀濒危野生植物资源调查

2008—2010年,对南岳衡山野生植物资源进行了实地调查,调查结果表明:南岳衡山有国家重点保护野生植物17种,其中一级保护3种,二级保护14种。国家珍稀濒危植物14种。列入2007年《中国物种红色名录》中受胁威的珍稀濒危植物87种,其中极危1种,濒危13种,易危36种,近危26种,无危11种。兰科植物23属46种,且具有附生、地生和腐生各种生态类型。另外对银杏、伯乐树居群进行了分析,得出南岳衡山是银杏野生居群保存和现代分布地区之一,保存在该区的银杏,伯乐树的天然林应为原始林的残遗成分,具有古老和残遗特性。     

湖南烙铁头蛇毒中一个新的舒缓激肽增强肽（TmF）

通过 70 %冷甲醇抽提、SephadexG 15分子筛和反相高效液相色谱C1 8层析 ,从湖南产烙铁头蛇毒 (Trimeresurusmucrosquamatus)冻干粉中纯化得到一个新的舒缓激肽增强肽 (BPP) ,命名为TmF。该小肽的氨基酸序列为pGlu Gly Arg Pro Leu Gly Pro Pro Ile Pro Pro (pGlu表示焦谷氨酸 )。序列结果分析表明 ,TmF和已经分离得到的BPPs有很高的序列同源性。MSI MS测定其分子量为 1.110 7kD。TmF的生物学活性和药理学活性检测的结果表明 ,它增强舒缓激肽 (BK) ( 1mg L)诱导的离体豚鼠回肠纵行肌收缩的活性为 ( 1.13± 0 .3)单位 (mg L) ;TmF ( 5 .0× 10 - 4mg kg)可以增强约 ( 14± 2 )mmHg的由BK( 5 .0× 10 - 5mg kg)诱导的舒张压下降 ;在抑制剂试验中 ,不同剂量的TmF和 5× 10 - 2 mg的血管紧张素转化酶保温 30min ,结果表明大约2 .0× 10 - 3mg的TmF表现出对ACE水解活性的半数抑制率 (IC50 )。