| 肿瘤特异性蛋白B7-H4纳米抗体的筛选和鉴定 |
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| 引用本文： | 刘瑜,刘宁,张志霞,马红,孙忠兴,葛银林.肿瘤特异性蛋白B7-H4纳米抗体的筛选和鉴定[J].中国生物化学与分子生物学报,2020(4):457-466. |
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| 作者姓名： | 刘瑜 刘宁 张志霞 马红 孙忠兴 葛银林 |
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| 作者单位： | 青岛大学基础医学院生物化学与分子生物学系;青岛市立医院皮肤科;青岛大学松山医院检验科 |
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| 基金项目： | 山东省科技发展计划(No.2014GGH218023)资助。 |
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| 摘 要： | 羊驼体内存在天然缺少轻链的重链抗体,克隆重链抗体可变区(VHH),即可构建单域抗体(single-domain antibodies,sdAbs),又称纳米抗体(nanobody,Nb)。利用非免疫羊驼噬菌体文库筛选肿瘤特异性蛋白B7-H4的纳米抗体,经过4轮淘选,ELASE鉴定阳性克隆噬菌体,测序获得其DNA序列后体外转录为mRNA,将修饰纯化后的mRNA转染到肿瘤细胞,利用细胞免疫荧光检测mRNA在肿瘤细胞内是否表达,Western印迹进一步验证其表达情况;通过CCK-8法鉴定其对肿瘤细胞的增殖抑制能力;划痕实验鉴定其对肿瘤细胞迁移能力的影响;Transwell法鉴定其对肿瘤细胞的侵袭能力的影响;裸鼠荷瘤模型瘤旁注射mRNA,鉴定其在体内实验对肿瘤组织的作用。结果显示,通过淘选获得1个高亲和性的噬菌体株菌H6;DNA测序并导出的氨基酸序列符合羊驼纳米抗体结构;将其mRNA导入肿瘤细胞,能有效表达出纳米抗体H6;转染H6-mRNA的肿瘤细胞(0.84±0.08)与未转染H6-mRNA的对照组(1.83±0.04)相比,其增殖能力明显受到抑制,P<0.01,其迁移和侵袭能力(78.60±5.36)明显低于空白对照组(197.80±21.04),效果优于B7-H4 mRNA的siRNA(95.40±16.56);在裸鼠乳腺癌模型中能有效抑制肿瘤生长,效果优于紫杉醇和B7-H4 mRNA的siRNA。这说明筛选所得抗B7-H4纳米抗体H6能特异结合B7-H4蛋白并封闭其功能,导致肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制。该结果为利用B7-H4作为治疗癌症的靶点提供了实验基础。
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| 关 键 词： | 纳米抗体 B7-H4 体外转录 免疫疗法 噬菌体展示技术 |
Screening and Identification of Nanobody for Tumor Specific Protein B7-H4 |
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| LIU Yu,LIU Ning,ZHANG Zhi-Xia,MA Hong,SUN Zhong-Xing,GE Yin-Lin.Screening and Identification of Nanobody for Tumor Specific Protein B7-H4[J].Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology,2020(4):457-466. |
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| Authors: | LIU Yu LIU Ning ZHANG Zhi-Xia MA Hong SUN Zhong-Xing GE Yin-Lin |
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| Institution: | (Department of Biochemistry and Molecular Biology,School of Basic Medicine,Qingdao University,Qingdao 266021,Shandong,China;Dermatology Department of Qingdao Municipal Hospital,Qingdao 266011,Shandong,China;Department of Clinical Laboratory,Songshan Hospital,Qingdao University,Qingdao 266021,Shandong,China) |
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