应用环介导等温扩增技术(LAMP)检测蜜蜂黑蜂王台病毒的研究

【目的】本文旨在建立用于临床检测黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)的环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),为该疾病的检测和防控提供技术支撑。【方法】根据BQCV基因保守序列设计4条特异性引物,探究LAMP扩增的最优条件,并与常规的PCR(Polymerase chain reaction)检测方法进行比较。【结果】建立的LAMP方法特异性好,检测下限为86 fg,灵敏度比PCR高100倍。临床检测显示其对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica和中华蜜蜂Apis cerana cerana均准确有效,且检出率比普通PCR法高10%~20%。【结论】建立的针对BQCV的LAMP检测方法为养蜂生产第一线检测和预防BQCV提供了技术支持,有一定的应用价值。     

基于Illumina HiSeq测序技术研究吡虫啉对意大利蜜蜂雄蜂的影响

[目的]雄蜂对蜂群繁衍有着非常重要的作用.本研究旨在探究吡虫啉对意大利蜜蜂Apis mellifera Ligustica雄蜂生长发育和基因表达产生的影响.[方法]以意大利蜜蜂雄蜂为研究对象,分别以0.00001、0.0001和0.001 μg/μL浓度的吡虫啉对雄蜂幼虫进行连续饲喂处理.每天观察并记录幼虫的发育形态及死亡率,在雄蜂幼虫后期(移虫后6d)测量幼虫体重.利用Illumina HiSeq测序技术对经吡虫啉处理的雄蜂进行转录组测序,进而对差异表达基因进行深入分析.[结果]取食吡虫啉后的雄蜂幼虫,体重低于正常雄蜂,当浓度高于0.0001μg/μL时差异显著;雄蜂幼虫取食吡虫啉后出现死亡现象,且死亡率随吡虫啉浓度的升高而增大;差异表达基因分析结果上调与下调基因数量分别为390个和130个.GO富集分析结果上调基因共分布于55个GO条目,富集基因数量最多的是细胞进程、细胞、细胞组件、细胞膜、细胞膜组件、结合,下调基因共分布于48个GO条目,富集基因数量最多的是细胞进程、细胞、细胞组件.富集在有关生殖功能的差异表达基因中,上调基因数量为21个,下调基因数量为5个.KEGG代谢通路富集分析结果上调基因富集在159个通路上,其中富集基因数最多的是蛋白质消化吸收和神经活性配体-受体相互作用通路.下调基因富集在71个通路上,其中富集基因数最多的是溶酶体、胰液分泌、神经活性配体-受体相互作用通路.[结论]吡虫啉能抑制意大利蜜蜂雄蜂的生长发育,甚至造成幼虫死亡,同时,可以影响雄蜂的神经系统、代谢系统和生殖系统等.本研究结果为蜜蜂资源保护提供理论依据.     

基于Illumina HiSeq测序技术研究吡虫啉对意大利蜜蜂雄蜂的影响

[目的]雄蜂对蜂群繁衍有着非常重要的作用.本研究旨在探究吡虫啉对意大利蜜蜂Apis mellifera Ligustica雄蜂生长发育和基因表达产生的影响.[方法]以意大利蜜蜂雄蜂为研究对象,分别以0.00001、0.0001和0.001 μg/μL浓度的吡虫啉对雄蜂幼虫进行连续饲喂处理.每天观察并记录幼虫的发育形态及死亡率,在雄蜂幼虫后期(移虫后6d)测量幼虫体重.利用Illumina HiSeq测序技术对经吡虫啉处理的雄蜂进行转录组测序,进而对差异表达基因进行深入分析.[结果]取食吡虫啉后的雄蜂幼虫,体重低于正常雄蜂,当浓度高于0.0001μg/μL时差异显著;雄蜂幼虫取食吡虫啉后出现死亡现象,且死亡率随吡虫啉浓度的升高而增大;差异表达基因分析结果上调与下调基因数量分别为390个和130个.GO富集分析结果上调基因共分布于55个GO条目,富集基因数量最多的是细胞进程、细胞、细胞组件、细胞膜、细胞膜组件、结合,下调基因共分布于48个GO条目,富集基因数量最多的是细胞进程、细胞、细胞组件.富集在有关生殖功能的差异表达基因中,上调基因数量为21个,下调基因数量为5个.KEGG代谢通路富集分析结果上调基因富集在159个通路上,其中富集基因数最多的是蛋白质消化吸收和神经活性配体-受体相互作用通路.下调基因富集在71个通路上,其中富集基因数最多的是溶酶体、胰液分泌、神经活性配体-受体相互作用通路.[结论]吡虫啉能抑制意大利蜜蜂雄蜂的生长发育,甚至造成幼虫死亡,同时,可以影响雄蜂的神经系统、代谢系统和生殖系统等.本研究结果为蜜蜂资源保护提供理论依据.     

室内纱笼条件下不同蛋白饲粮对工蜂生理代谢的影响

本文旨在探究不同蛋白饲粮对蜜蜂生长发育代谢的影响进而指导养蜂生产实践,试验选取刚出房的意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica 270头,分为3组,3个重复,每个重复30头工蜂,分别饲喂3种饲粮。对照组饲粮：蜂蜜∶蔗糖粉=1∶3;试验组A饲粮：花粉∶蜂蜜∶蔗糖粉=5∶1∶6;试验组B饲粮：蜂粮∶蜂蜜∶蔗糖粉=5∶1∶6。在纱笼内进行室内喂养,观察记录蜜蜂7 d内的存活情况;采用液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）方法检测试验组A与B饲粮对饲喂5日龄蜜蜂的代谢差异,对数据进行模式识别分析,筛选鉴别差异代谢物。结果表明：饲喂试验组B饲粮的蜜蜂比试验组A蜜蜂存活时间显著增长（P<0.05）;代谢组数据显示试验组A和B明显分离,共鉴定出15个差异代谢物,包括氨基酸、维生素、糖类等,其中11个差异代谢物下调,4个差异代谢物上调;代谢物通路分析差异显著有甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢通路,精氨酸和脯氨酸代谢通路,赖氨酸降解通路、戊糖磷酸通路（P<0.05）。说明在纱笼等特殊环境中,工蜂饲粮不可直接加入花粉,按照蜂粮∶ 蜂蜜∶蔗糖粉=5∶1∶6的比例混合制成的人工饲粮更适合蜜蜂生存。     

应用等温环介导扩增方法检测蜜蜂残翅病毒的研究

本文的目的在于建立用于临床检测残翅病病毒(Deformed wing virus,DWV)的等温环介导扩增技术(Loopmediated isothermal amplification,LAMP),为该疾病的预防和控制提供理论依据。在DWV基因保守序列设计4条引物,探究LAMP扩增的最优条件,并与常规的PCR(polymerase chain reaction)检测方法进行比较。建立的LAMP方法检测下限为0.89 pg,灵敏度比PCR高100倍而且特异性好。临床检测显示建立的LAMP方法可行、准确、方便、灵敏。针对DWV的LAMP建立的检测方法为养蜂生产第一线检测和预防DWV提供了技术支持,有一定的应用价值。     

中国东方蜜蜂雄蜂的形态特征

为探讨雄蜂形态特征应用于中国东方蜜蜂分类区划的价值及可能性,测定全国16个省市地区东方蜜蜂的28个与雄蜂职能相关的形态学指标,利用SPSS19.0将获得的形态指标数据进行均数分析、ANOVA分析、主成分分析和聚类分析。结果显示,雄蜂样本中三亚个体最小,工蜂样本中白沙个体最小,二者同属海南地区,均数分析结果基本一致;全部28个形态指标各样点雄蜂之间均存在显著性差异(p0.01),与对照组工蜂ANOVA分析结果完全一致(p0.01);利用形态指标的主成分分析发现雄蜂组全部10个长度指标和肘脉a及3个重量指标聚集为一个独立区域,与对照组工蜂反映出主要信息基本一致;聚类分析中基于雄蜂形态指标的聚类结果对比目前公认的东方蜜蜂分类结论,可以大致区分各地的东方蜜蜂种群。因此,利用雄蜂形态特征分类中国东方蜜蜂具有一定可能性和参考价值,本研究为东方蜜蜂资源的区划提供了新思路和基础数据。