肠道病毒ECHO20血清型鉴定和VP1序列初步分析

肠道病毒(Enterovirus)是最常见的人类致病病毒之一,包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇A组病毒、柯萨奇B组病毒和ECHO病毒。一般认为大多数肠道病毒感染症状轻微或不明显,然而有时肠道病毒感染也可能是严重甚至致命的[1]。2004年云南省潞西县局部地区发生小规模的甲肝流行,我们从当地     

肠道菌群相关代谢物丁酸的量效和时效对人脐带间充质干细胞IL-6表达的影响CSCD

目的探究人肠道菌群相关代谢物丁酸(butyric acid,BA)对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)的细胞因子分泌的影响。方法用含不同浓度丁酸(0.02、0.08、0.32、1.25和5.00 mmol/L)的培养基培养细胞24、48和72 h,采用ELISA法检测上清液中白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)表达情况,以不含丁酸的完全培养基作为对照组。结果培养24 h,中等浓度区IL-6表达增加,以浓度为1.25 mmol/L时增加最明显,低、高浓度组与对照组比较差异无统计学意义;培养48 h,低浓度组IL-6表达下降,中间浓度区的1.25 mmol/L浓度组及高浓度组表达量增加;培养72 h,低浓度区IL-6表达量下降且差异有统计学意义,中间浓度区表达增加,高浓度组呈下降趋势但差异无统计学意义。结论丁酸对hUC-MSCs的IL-6表达有量效性和时效性,因此丁酸的不同量效和时效对hUC-MSCs的生理性和病理性功能调节可能会有不同效应。     

细胞因子诱导外周血单个核细胞的转录和蛋白表达研究

采用干扰素-γ、抗CD3单克隆抗体和IL-2体外诱导扩增外周血单个核细胞成为cIK细胞,并于诱导培养前及培养第15d时分别收集细胞样本。在对培养前后细胞的增殖、形态及表面标志变化检测的同时。提取总蛋白进行定量、双向电泳和银染。利用ImageMasterTM软件对培养前后表达相同和不同的蛋白质点进行分析,并选择其中24个蛋白质点进行质谱鉴定。对于部分培养前后具有代表性的蛋白,进一步采用qPCR技术分析其的转录情况。结果表明,培养前后细胞的蛋白质组学特征是完全不同的,相同表达蛋白点主要与基因的转录因子和细胞骨架相关,诱导后特异表达蛋白主要与细胞生长、增殖相关。虽然在转录与蛋白水平上呈现出部分负相关现象,由于蛋白质组才是基因表达的最终形式,结合蛋白差异研究结果提示,经细胞因子诱导后,CIK细胞的大量扩增与细胞内蛋白表达改变相关。     

肠道病毒ECHO20血清型鉴定和VP1序列初步分析

肠道病毒(Enterovirus)是最常见的人类致病病毒之一,包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇A组病毒、柯萨奇B组病毒和ECHO病毒.一般认为大多数肠道病毒感染症状轻微或不明显,然而有时肠道病毒感染也可能是严重甚至致命的[1].2004年云南省潞西县局部地区发生小规模的甲肝流行,我们从当地部分患者粪便标本中分离到多株甲肝病毒,同时,经过肠道病毒组合血清和单价血清的中和试验,证明患者为甲肝和ECHO20病毒双重感染.通过文献检索我们发现,国内对ECHO20病毒的相关研究极少,且多限于病毒的血清学分离鉴定,而对其重要的衣壳蛋白编码基因vp1的测定和分析尚未见报道,为阐明ECHO20分离株的分子流行病学特征,分析其基因变异规律,探讨我国分离株和国外分离株的区别和联系,我们测定了编码重要抗原决定簇的整个vp1序列,并和GenBank中已有的ECHO20病毒vp1基因序列进行了比较分析.     

人外周血淋巴细胞体外诱导培养前后细胞表型与细胞毒活性相关性研究

为了分析体外细胞因子诱导培养CIK细胞过程中细胞表型的变化与其杀瘤活性的相关性及为临床过继免疫治疗提供实验依据,本研究采用体外诱导方法扩增培养正常人外周血淋巴细胞及单个核细胞,应用流式细胞术测定培养前、培养第7天和第14天的CD3~+等15种不同表型细胞百分率的变化,用CCK-8试剂检测第7天和第14天的细胞毒活性。结果显示,扩增培养后T细胞活化表型的表达和细胞毒活性在第7天最强,与其细胞表型CD3~+CD25~+、CD3~+CD28~+、CD3~+CD25~+CD28~+、CD3~+CD4~+呈正相关(P<0.05),与CD3~+CD45RA~+CD45RO~+呈负相关(P<0.05)。本研究表明测定培养细胞活化相关表型可以间接监测其杀瘤能力,为临床CIK细胞过继免疫治疗的应用提供实验依据。     

肠道菌群相关代谢物丁酸的量效和时效对人脐带间充质干细胞增殖的影响

目的探讨人肠道菌相关代谢物丁酸对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)增殖的影响。方法用含不同浓度丁酸(0.02、0.08、0.32、1.25和5.00 mmol/L)的干细胞培养基培养hUC-MSCs,采用CCK-8增殖实验检测24、48和72 h细胞增殖情况,并与正常对照组比较。结果 hUC-MSCs的增殖与丁酸的量效和时效均有关系,作用24 h内抑制hUC-MSCs增殖,到48 h则表现出低浓度促进细胞增殖、高浓度抑制细胞增殖的作用;当时间达到72 h,则低浓度丁酸对hUC-MSCs的促增殖作用减弱,高浓度组对其增殖抑制的作用有所增强。结论丁酸对hUC-MSCs增殖的影响存在量效和时效的共同作用,适宜的丁酸浓度和作用时间对机体肠道的功能维持及平衡有重要影响。     

肝素对逆转录抑制作用的研究

目的:研究肝素在逆转录过程中的作用.方法:提取人肺胚胎二倍体细胞和肝素抗凝血中总RNA,经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的质量好后,逆转录合成相应的cDNA,分别进行看家基因β-actin的聚合酶链反应(PCR),其产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测;用基因芯片技术检测cDNA.将肝素抗凝血中提取的总RNA分为等量的两部分,分别用肝素酶或氯化锂处理RNA进行逆转录为cDNA和RNA合成cDNA后再用肝素酶或氯化锂处理,分别进行看家基因β-actin的聚合酶链反应(PCR),其产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测;并用基因芯片技术检测氯化锂处理RNA后cDNA.结果:二倍体细胞来源的RNA为模板,能扩增出β-actin产物,并且在基因芯片上有杂交点.肝素抗凝血来源的RNA,在肝素酶或氯化锂作用后行逆转录者,能扩增到β-actin的目的片段,且基因芯片上有杂交点;而在未处理者不能扩增到目的片段,且基因芯片上无杂交点.结论:肝素是一种逆转录的抑制剂.对RNA逆转录cDNA过程有较强的抑制作用.