假单胞菌M18rsmA-突变株的构建及其对Plt和PCA合成的区别性调控作用

假单胞菌(Pseudomonas sp.)M18是促进植物生长的根际细菌,能产生吩嗪1羧酸（PCA）和藤黄绿菌素（Plt）两种不同的抗生素抑制植物病原菌,保护植物免受病害。运用PCR方法,从M18基因组中,扩增出rsmA基因部分片段,并以该片段为探针,从M18的基因组柯斯文库中筛出阳性克隆,切取带有rsmA基因及两侧序列的15kb片段,中间插入编码Kmr的DNA片段,获得rsmA-体外突变体。运用同源重组剔除技术,构建了M18菌株的rsmA突变株M18R-。突变株M18R-生物合成Plt的能力比野生型M18提高4倍,但是,PCA产量仅为野生型的20%。研究结果表明,全局性调控基因rsmA可能通过不同的机制区别性地影响Plt和PCA的生物合成。     

活化菌剂施用量对基材肥力及狗牙根生长的影响

为促进贫瘠土地区植被混凝土生态防护工程的持续性, 利用大渡河流域双江口水电站工区种植土制备植被混凝土, 研究了活化菌剂施用量对植被混凝土肥力、植物生物量与养分农学效率的影响。结果表明: 活化菌剂的施用使基材pH 值降低, 对植物生长有正面影响; 活化菌剂施用量的增加, 不同程度提高了基材单个肥力因子水平, 有效降低了综合肥力指数; 植物生物量与养分农学效率则随活化菌剂施用量的增加呈单峰曲线变化, 当施用量为基材质量的6%-9%时达到峰值。综合考虑基材肥力与植物生长状况, 推荐植被混凝土中活化菌剂施用量为6%-9%。     

乳糖诱导耐热木聚糖酶基因在大肠杆菌中表达

考察乳糖代替IPTG诱导耐热木聚糖酶基因在重组大肠杆菌BL21中表达的可行性。分别以IPTG和乳糖作为诱导剂,对诱导时机、诱导剂浓度、诱导持续时间等主要因素进行了分析比较。结果表明,当菌体生长至发酵液吸光值OD600达1．3时加入乳糖其终浓度达29．2 mmol／L,37℃,持续诱导9．5h,木聚糖酶活力达到最高,为3587.5U,是IPTG优化条件下持续诱导7h达到的最高酶活的2．07倍,而成本只有IPTG的1／204。     

三峡水库秭归段消落带植物群落特征及其与环境因子的关系

消落带植被群落特征及物种多样性的研究一直是植物生态学和恢复生态学研究的热点。三峡水库的运行对消落带生态系统造成了极大的影响,如引起绝大部分河岸带土著植物消失、生物多样性降低以及土壤侵蚀严重等一系列生态学问题。研究消落带植物群落特征及其影响机制,旨在丰富消落带新生湿地生态学研究内容,为消落带植被的恢复、湿地保护和管理提供科学依据。通过对三峡水库秭归段香溪河与童庄河陡坡消落带植物群落及其环境因子的实地调查,并结合双向聚类分析及典范对应分析(CCA),研究了三峡水库消落带植物群落特征、物种多样性及其与环境因子之间的关系。结果表明:(1)在三峡水库秭归段消落带共发现维管植物34种,隶属于15科32属,其中菊科(Compositae)和禾本科(Gramineae)种类数较多,为优势物种,植物群落组成以草本植物为主,一年生和多年生草本植物为23种和11种,分别占67.65%和32.35%,一年生植物占绝对优势;(2)随海拔升高,物种数、Shannon多样性指数、Pielou均匀度从低海拔到高海拔随着海拔的增加而升高,而Simpson优势度指数指数从低海拔到高海拔呈下降趋势;(3)双向聚类显示消落带...     

基因工程菌1020耐热木聚糖酶的纯化

目的：提纯基因工程菌1020耐热木聚糖酶。方法：超声破碎细胞,而后经过热变性处理和Ni—NTA亲和层析分离纯化。结果：根据pET System Manual的方法分析木聚糖酶主要分布在可溶性细胞质中;超声破壁功率400W,破碎15min时效果最佳;粗酶液经过70℃,热变性30min处理后,纯化倍数达到4．9;采用Ni—NTA Sephrose F．F一步层析可以得到电泳纯的木聚糖酶,纯化倍数13．4,得率29．4％。结论：热变性处理是一种有效的提纯手段,合理的条件可以使纯化倍数提高;Ni—NTA亲和层析是纯化含His标签的目的酶的特异高效纯化方法。     

厦门大屿岛三种鹭的种群动态和营巢

对厦门大屿岛白鹭保护区的夜鹭（Nycticorax nycticorax）、白鹭（Eegrtta garzetta）和池鹭（Ardeola bacchus）进行种群动态和营巢观察研究。3种鸟的数量季节变化都很大,5～7月数量高峰期,每月总数都达5000只左右。5月底共5610只,3种鸟的比例分别为50.8%、32.0%和17.2%。4月开始大量在相思树梢上营巢,5月中至6月初巢数多达6000多个。结果表明,3种鸟都是厦门的繁殖鸟和留鸟。     

从噬菌体抗体库中淘选血纤维蛋白特异的单链抗体

为构建小鼠噬菌体抗体库 ,以获得对人血纤维蛋白特异的抗体 ,由小鼠脾脏提取 m RNA,经反转录 PCR扩增出抗体重链、轻链可变区基因片段 ,将二者和一段编码十五肽 (Gly4 Ser) 3的 DNA接头借助重组 PCR组装成为单链抗体 (single- chain antibody,Sc Ab)基因 .将单链抗体基因插入噬菌体展示载体 p CANTAB- 5E,通过电击法转化大肠杆菌 TG1细胞 ,用辅助噬菌体 M1 3K0 7超感染 ,构建了库容量在 1 0 8以上的噬菌体单链抗体库 .利用亲和选择方法 (淘选 ) ,从噬菌体抗体库中选得血纤维蛋白特异的单链抗体 .模拟抗体成熟过程 ,用 DNA改组 (DNA shuffling)技术使抗体基因重新组合 ,构建新的改组抗体库 ,并从中选择到提高了亲和力的噬菌体单链抗体 .抗体基因在大肠杆菌中表达 ,表达蛋白经 Sephadex G- 75柱层析分离 ,得到初步纯化的单链抗体蛋白 .     

中华蚊母树在干旱-水淹交叉胁迫下形态和活性氧代谢的适应机制

为阐明中华蚊母树（Distylium chinense）在消落带干旱-水淹交叉胁迫下的形态和活性氧（ROS）代谢适应机制，通过控制实验模拟了三峡水库消落带的水文节律，研究了干旱-水淹交叉胁迫及恢复过程施加不同外源物质对中华蚊母树形态学和ROS清除的变化。结果表明：（1）前期干旱胁迫增强了中华蚊母树对后期水淹胁迫的适应，主要表现在叶片脱落、大量不定根的形成及茎基部膨大等形态学的变化；（2）干旱或水淹单一胁迫下，中华蚊母树·OH、O₂^·等ROS水平明显高于对照，表现出氧化应激反应，其超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）等抗氧化系统酶活性及脯氨酸（Pro）等抗氧化系统小分子含量也均显著高于对照，表现出一定的抗氧化防御作用机制，且在复合胁迫下，SOD、CAT、APX酶活性及Pro含量显著高于单一胁迫；（3）恢复阶段，相关性分析表明，中华蚊母树清除ROS （·OH、O₂^·）的酶促（SOD、CAT、APX）及非酶促（Pro）系统具有一定的协同性。同时，恢复阶段施加脱落酸（ABA），内源Pro显著高于正常水平；施加Pro，SOD、CAT等抗氧化酶活性显著高于对照；施加可溶性糖（Glu），APX活性显著升高。表明外源添加ABA、Pro、Glu，均对ROS的清除产生显著影响，同时，SOD活性显著高于CAT和APX活性，因此SOD可能是中华蚊母树清除冗余ROS的主要因子。因此，中华蚊母树形态学的变化、较高的脯氨酸积累和对ROS有效的清除防御，可能是其适应干旱-水淹交叉胁迫的主要机制，ABA、Pro、Glu等外源物质的添加对中华蚊母树的胁迫恢复过程具有显著的促进作用，前期干旱可提高中华蚊母树植株对后期水淹的耐受能力。     

大肠杆菌合成1,2,4-丁三醇的途径优化

1,2,4-丁三醇(BT)是一种在工业中有多种用途的重要的非天然化合物。文中通过将外源基因xdh和mdlC导入大肠杆菌BW25113表达,并敲除了xylA、xylB、yagE、yjhH、yiaE和ycdW等木糖和中间产物代谢旁路基因,构建了能够将D-木糖转化为BT的重组菌株。为优化BT合成途径,针对BT合成途径中的限速步骤——3-脱氧-D-甘油-戊酮糖酸的脱羧反应,进行了新酶的筛选和评价,获得了可显著提高反应效率的新的2-酮酸脱羧酶——KivD,并构建了表达该酶的重组菌株BW-025。在此基础上,通过初步条件优化,将BT产量提高至2.38g/L;进一步调节途径中各个酶的表达量,探究了它们对BW-025合成BT的影响,最终获得了BT产量较BW-025提高了48.62%的重组菌株BW-074。     

假单胞菌M18rsmA-突变株的构建及其对Plt和PCA合成的区别性调控作用

假单胞菌(Pseudomonas sp．)M18是促进植物生长的根际细菌,能产生吩嗪-1-羧酸(PCA)和藤黄绿菌素(Plt)两种不同的抗生素抑制植物病原菌,保护植物免受病害。运用PCR方法,从M18基因组中,扩增出rsmA基因部分片段,并以该片段为探针,从M18的基因组柯斯文库中筛出阳性克隆,切取带有rsmA基因及两侧序列的1．5kb片段,中间插入编码Km‘的DNA片段,获得rsmA^-体外突变体。运用同源重组剔除技术,构建了M18菌株的rsmA突变株M18R^-。突变株M18R^-生物合成Plt的能力比野生型M18提高4倍,但是,PCA产量仅为野生型的20％。研究结果表明,全局性调控基因rsmA可能通过不同的机制区别性地影响Plt和PCA的生物合成。