体内外精原干细胞介导大群生产转基因鸡

本研究以重组的绿色荧光蛋白基因为标记,采用公鸡睾丸内转染精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）和体外转染SSCs再移植的方法,探索家禽转基因新方法．同时比较了公鸡接受不同剂量外源基因的转基因效率．结果显示：（i）接受外源基因剂量分别为50,100,150和200μg／mL时,48h后睾丸细胞显示绿色荧光的比率分别为4．0％,8．7％,10．2％和13．6％,差异显著（P〈0．05）．睾丸内注射外源基因第25天后,随着时间的增长,精子表达绿色荧光的百分率逐渐提高,到第70天后表达率达到高峰,且趋于稳定,4个剂量组分别为12．7％,12．8％,15．9％和19．1％．差异显著（P〈0．05）;（ii）第70天的睾丸冰冻切片观察,曲精细管周边均有荧光表达;（iii）F1代中,56．2％（254／452）的胚盘表达绿色荧光．活鸡血样PCR检测56．5％（13／23）为阳性,Southern blot检测证明外源基因已整合到鸡基因组;F2代中,53．2％（275／517）的胚盘表达绿色荧光．活鸡血样PCR检测52．9％（9／17）为阳性;（iv）F,代和F2代鸡心、肝、肾和肌肉等组织冰冻切片观察和PCR检测,绿色荧光阳性率在50．0％～66．7％之间;（v）体外SSCs转染外源基因后移植,可在受体公鸡睾丸中生长发育,正常产生精子．后代中,12．5％（8／64）的胚盘表达绿色荧光,活鸡血样PCR检测11．1％（2／18）为阳性．结果证明精原干细胞介导转基因是一种简单、高效、可大群体生产转基因鸡的有效途径．