体内外精原干细胞介导大群生产转基因鸡

本研究以重组的绿色荧光蛋白基因为标记，采用公鸡睾丸内转染精原干细胞（spermatogonial stem cells，SSCs）和体外转染SSCs再移植的方法，探索家禽转基因新方法．同时比较了公鸡接受不同剂量外源基因的转基因效率．结果显示：（i）接受外源基因剂量分别为50，100，150和200μg／mL时，48h后睾丸细胞显示绿色荧光的比率分别为4．0％，8．7％，10．2％和13．6％，差异显著（P〈0．05）．睾丸内注射外源基因第25天后，随着时间的增长，精子表达绿色荧光的百分率逐渐提高，到第70天后表达率达到高峰，且趋于稳定，4个剂量组分别为12．7％，12．8％，15．9％和19．1％．差异显著（P〈0．05）；（ii）第70天的睾丸冰冻切片观察，曲精细管周边均有荧光表达；（iii）F1代中，56．2％（254／452）的胚盘表达绿色荧光．活鸡血样PCR检测56．5％（13／23）为阳性，Southern blot检测证明外源基因已整合到鸡基因组；F2代中，53．2％（275／517）的胚盘表达绿色荧光．活鸡血样PCR检测52．9％（9／17）为阳性；（iv）F，代和F2代鸡心、肝、肾和肌肉等组织冰冻切片观察和PCR检测，绿色荧光阳性率在50．0％～66．7％之间；（v）体外SSCs转染外源基因后移植，可在受体公鸡睾丸中生长发育，正常产生精子．后代中，12．5％（8／64）的胚盘表达绿色荧光，活鸡血样PCR检测11．1％（2／18）为阳性．结果证明精原干细胞介导转基因是一种简单、高效、可大群体生产转基因鸡的有效途径．