尿路致病性大肠杆菌中Ⅰ型限制-修饰系统C5423-5425的鉴定

[目的] 多方面鉴定尿路致病性大肠杆菌中的Ⅰ型限制-修饰（restriction-modification,RM）系统C5423-5425,并揭示其功能与生理意义。[方法] 利用Lambda Red重组系统构建CFT073 DNA甲基化转移酶基因缺失株Δc5424;利用单分子实时测序分析以获得C5424甲基化修饰的位点与基序;利用转化效率试验说明RM系统抵御外源DNA的转化;利用转录组测序和荧光定量RT-PCR鉴定C5424的调控基因;利用软琼脂平板运动试验等方法研究细菌生理功能的变化。[结果] 用生物信息学方法鉴定了一个Ⅰ型RM系统;获得了c5424的突变株;鉴定了C5424修饰的靶序列G^mAGNNNNNNNGTCA/TG^mAC NNNNNNNCTC,并揭示了靶序列在基因组中的分布;C5424系统可以抵御外源DNA的进入;c5424的缺失显著影响17个基因的表达,包括运动相关基因motB和抗活性氯基因rclR等;c5424的缺失显著影响CFT073的运动能力和抗次氯酸的能力。[结论] 本文从多方面鉴定了尿路致病性大肠杆菌CFT073中的I型RM系统C5423-5425,这个系统对细菌具有重要的生理意义。本文对研究细菌的表观遗传学具有参考价值。     

黄芪多糖联合布洛芬对创伤感染患者巨噬细胞分泌功能、T淋巴细胞亚群水平的影响及其影响因素分析

目的:探讨黄芪多糖联合布洛芬对创伤感染患者巨噬细胞分泌功能、T淋巴细胞亚群水平的影响及影响因素。方法:2014年3月-2018年3月我院收治创伤感染患者85例,其中重度感染39例,将所有患者按感染轻重进行平衡随机分为对照组43例和研究组42例,对照组应用布洛芬治疗,研究组应用黄芪多糖联合布洛芬治疗。比较两组患者巨噬细胞分泌功能、T淋巴细胞亚群水平,分析患者发生重度感染的影响因素及巨噬细胞分泌功能、T淋巴细胞亚群水平与创伤感染的关系。结果:治疗后研究组患者血清中肿瘤坏死因子(TNF)、白介素细胞-6(IL-6)和白介素细胞-1(IL-1)的水平低于对照组(P<0.05)。治疗后研究组外周血中CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺和CD4⁺/CD8⁺水平高于对照组(P<0.05)。巨噬细胞分泌功能较高、T淋巴细胞亚群水平较低的患者发生重度感染的概率较高(P<0.05);巨噬细胞分泌功能与创伤感染呈正向关联关系(P<0.05,OR>1);T淋巴细胞亚群水平与创伤感染呈负向关联关系(P<0.05,OR<1);治疗方法以研究组方法为优(P<0.05,OR>1)。结论:黄芪多糖联合布洛芬治疗创伤感染患者效果更显著,巨噬细胞分泌功能、T淋巴细胞亚群水平均是创伤感染的影响因素。     

真养雷氏菌DKC1菌株镉抗性czcC基因的克隆与表达

利用PCR技术从真养雷氏菌 (Ralstoniaeutropha)菌株质粒中扩增出 1 2kb的镉抗性系统结构修饰蛋白的编码基因czcC ,然后将其克隆到pGEM T easy载体上 ,构建重组质粒 ,经EcoRⅠ酶切分析和核苷酸序列分析 ,与Gen Bank中登录的czcC基因序列相似性高达 98% ,显示其具有正确的czcC基因核苷酸序列 ,并利用pET 30a( )Vector在E .coliBL2 1中进行了成功表达。为进一步研究微生物抗镉机理及构建耐镉基因工程菌提供重要的基础资料     

低钾胁迫对棉花光合作用和光合产物分配的影响

分别选用钾高效和钾低效棉花基因型各一个进行大田试验,探讨低钾胁迫对棉花光合作用和光合产物的积累分配的影响.结果表明:低钾胁迫降低了棉花叶片的净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、胞间CO2浓度(Ci)和气孔导度(Gs),降低了棉花的生物量,低钾胁迫同时促使光合产物较多地分配到营养器官,降低了生殖器官分配的比例,收获指数降低.不同棉花基因型的光合特性存在着差异,钾高效基因型(HG)的Pn、Tr、Ci和Gs无论施钾与否均高于钾低效基因型(LG).不同棉花基因型光合产物的分配模式存在着差异,无论施钾与否,HG的营养器官积累的干物质相对较少,往生殖器官分配的较多,收获指数高,而LG相反.2个基因型在苗期和蕾期的生物量没有显著性差异,而在桃期和吐絮期,HG的生物量显著高于LG.HG的钾利用指数在桃期和吐絮期均显著高于LG.研究表明,增施钾肥能够改善棉花叶片的光合功能并提高光合产物的分配效率.     

三氯乙烯对斑马鱼胚胎心脏发育的毒性作用及机制*

目的:研究三氯乙烯(TCE)对斑马鱼胚胎心脏发育的毒性作用及其机制,为寻找干预靶点提供实验依据。方法:斑马鱼胚胎来自于国家斑马鱼资源中心,分为DMSO组(对照组)、DMSO+CHIR组、DMSO+XAV组、TCE处理组、TCE+CHIR组和TCE+XAV组(TCE设置为1、10、100 ppb三个不同的浓度;DMSO:二甲基亚砜;CHIR:CHIR-99021,Wnt信号通路激活剂;XAV:XAV-939,Wnt信号通路抑制剂),每组60条。斑马鱼胚胎饲养于系统养殖水中,恒温28℃,每隔24 h更换养殖水,并分别加入相应药物。连续培养72 h,收集斑马鱼胚胎的心脏组织,提取RNA进行转录组芯片分析,并以荧光定量PCR验证Wnt信号通路相关基因的表达。结果:与对照组相比,三氯乙烯暴露导致斑马鱼心脏畸形显著增加,以心房心室比例异常、环化不全以及心包水肿等为主要表型。芯片分析结果显示,TCE处理组Wnt信号通路相关基因(Axin2、Sox9b、Nkx2.5)表达受到显著影响。qPCR结果进一步验证,TCE处理组与DMSO对照组相比,Wnt通路靶基因Axin2、Sox9b及Nkx2.5的mRNA水平显著下调(P＜0.05),提示Wnt信号通路被抑制。Wnt激活剂CHIR降低TCE导致的斑马鱼胚胎心脏发育异常,而添加Wnt通路抑制剂XAV后,斑马鱼胚胎心脏畸形率显著增加(P＜0.05)。结论:三氯乙烯暴露导致斑马鱼胚胎心脏畸形,Wnt信号通路参与三氯乙烯的心脏发育毒性。     

马肾果枝条的化学成分研究

采用多种色谱方法从马肾果(Aglaia testicularis C.Y.Wu)枝条中分离鉴定了11个化合物,分别是火焰花内酯B(1)、火焰花内酯苷A(2)、(E)-aglawone(3)、eichlerianic acid(4)、shoreic acid(5)、3β-羟基-5α,8α-表-二氧麦角-6,22-二烯(6)、豆甾-5-烯-3β,7α-二醇(7)、β-谷甾醇(8)、胡萝卜苷(9)、东莨菪内酯(10)、碳二十六酸(11)。化合物1~3,8~11均为首次从该植物中分离得到,而松香烷二萜内酯类衍生物1和2则是首次从米仔兰属植物中得到。化合物1对人肺癌细胞株AGZY 83-a表现出弱的抑制作用,IC50值为20.5μg mL-1。这为国产米仔兰属植物的开发应用提供了理论依据。     

耐盐细菌的渗透保护剂及其调渗机制

高渗环境下的细菌常在体内积累一些小分子物质（如糖类、醇类、氨基酸及其衍生物）作为渗透保护剂,以对抗高渗环境,编码这些物质吸收和合成的基因统称为渗透调节基因（Osm gene）。目前已有一些耐渗基因被克隆。     

一株多环芳烃降解菌的鉴定及GST基因克隆和序列分析

由石油污染土壤中分离到一株能以多环芳烃（菲、芴、萘）为唯一碳源的细菌,经形态观察、生理生化（BiologGN）和 G+C mol%分析,鉴定该菌为少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)。与16S rDNA序列同源性的比较进一步确证了鉴定结果。经菲诱导后的细菌谷胱甘肽S转移酶（Glutathione Stransferase, GST）酶活明显高于未诱导前,表明谷胱甘肽S转移酶可能与多环芳烃的降解有关。根据该酶基因的同源性序列设计引物,PCR扩增出编码谷胱甘肽S转移酶基因片段,进一步证实在该菌中有GST的存在。测序后基于编码GST的基因所进行的系统发育分析表明,该多环芳烃降解菌与其它多环芳烃降解菌在进化上亲缘关系较近。     

大肠杆菌副产物合成途径删除提高外源蛋白表达水平

大肠杆菌是应用最广泛的外源基因表达宿主。为探索阻断副产物产生途径对提高大肠杆菌表达外源蛋白的能力,本实验以野生型大肠杆菌菌株为基础,删除其乳酸脱氢酶基因(ldhA),磷酸烯醇式丙酮酸合成酶基因(pps)和丙酮酸甲酸裂解酶基因(pflB)。在此基础上,以甘露聚糖酶基因man为报告基因,考察阻断以上代谢途径对大肠杆菌产酶能力的影响。结果显示,以上述三个基因叠加删除的三重突变株为宿主时,重组茵产酶水平最高,比酶活达到158.3 U/mg,相比野生出发菌株提高82.3%。