铜绿假单胞菌Psl多糖转运蛋白PslD的表达与纯化研究

条件性致病菌铜绿假单胞菌是细菌生物被膜研究的模式菌,其分泌的胞外多糖Psl在生物被膜形成中起关键作用。PslD为Psl多糖的转运蛋白,由256个氨基酸构成,生物信息学分析揭示其有N端信号肽且为一次跨膜蛋白。分离纯化完整跨膜蛋白需要去垢剂的作用,去垢剂种类繁多且性质不一,研究设计了一套筛选溶解PslD的去垢剂的方案。通过抗组氨酸标签的Western blot分析,n-Decyl-β-D-maltopyranoside (DM),n-Decyl-N,N-dimethylamine-N-oxide(DDAO)及n-Dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide(LDAO)被认为溶解PslD的效率较高。通过改变总蛋白与去垢剂比例,进一步优化了去垢剂的溶解条件即8 mg/mL总蛋白:质量分数为1%的 LDAO。在此溶解条件下,仅通过第一步Ni柱亲和纯化目的蛋白纯度可到达80%以上,这为进一步结晶尝试及其结构生物学研究奠定基础。