| 铜绿假单胞菌Psl多糖转运蛋白PslD的表达与纯化研究 |
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| 引用本文： | 唐玮蔚,马旅雁,吴更.铜绿假单胞菌Psl多糖转运蛋白PslD的表达与纯化研究[J].微生物学杂志,2015(2):14-21. |
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| 作者姓名： | 唐玮蔚 马旅雁 吴更 |
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| 作者单位： | 上海交通大学生命科学技术学院 微生物代谢国家重点实验室，上海 200240;中国科学院微生物研究所 微生物资源前期开发国家重点实验室，北京 100101;上海交通大学生命科学技术学院 微生物代谢国家重点实验室，上海 200240 |
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| 摘 要： | 条件性致病菌铜绿假单胞菌是细菌生物被膜研究的模式菌，其分泌的胞外多糖Psl在生物被膜形成中起关键作用。PslD为Psl多糖的转运蛋白，由256个氨基酸构成，生物信息学分析揭示其有N端信号肽且为一次跨膜蛋白。分离纯化完整跨膜蛋白需要去垢剂的作用，去垢剂种类繁多且性质不一，研究设计了一套筛选溶解PslD的去垢剂的方案。通过抗组氨酸标签的Western blot分析，n-Decyl-β-D-maltopyranoside (DM),n-Decyl-N,N-dimethylamine-N-oxide(DDAO)及n-Dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide(LDAO)被认为溶解PslD的效率较高。通过改变总蛋白与去垢剂比例，进一步优化了去垢剂的溶解条件即8 mg/mL总蛋白:质量分数为1%的 LDAO。在此溶解条件下，仅通过第一步Ni柱亲和纯化目的蛋白纯度可到达80%以上，这为进一步结晶尝试及其结构生物学研究奠定基础。
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| 关 键 词： | 铜绿假单胞菌 胞外多糖 转运蛋白PslD 去垢剂 亲和层析 |
Expression and Purification of Extracellular Polysaccharides Psl Transporter PslD from Pseudomonas aeruginosa |
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| TANG Wei-wei,MA Lv-yan and WU Geng.Expression and Purification of Extracellular Polysaccharides Psl Transporter PslD from Pseudomonas aeruginosa[J].Journal of Microbiology,2015(2):14-21. |
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| Authors: | TANG Wei-wei MA Lv-yan and WU Geng |
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| Institution: | State Key Lab. of Microbial Metabolism, Schl. of Life Sci.. & Technol., Shanghai Jiao Tong Uni., Shanghai, 200240;State Key Lab. of Microbial Res. for Early Devel''t, Inst. of Microbiol.,China Acad. of Sci., Beijing, 1001001;State Key Lab. of Microbial Metabolism, Schl. of Life Sci.. & Technol., Shanghai Jiao Tong Uni., Shanghai, 200240 |
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