大连渤海老虎滩海域沉积物可培养放线菌的多样性

【目的】研究大连渤海老虎滩海域可培养放线菌的多样性。【方法】利用5种不同的培养基分离、培养海洋沉积物中的放线菌,并用16S rRNA基因序列对部分放线菌株进行系统发育分析。【结果】根据菌落表型共分离到1215株放线菌。选择271株具有代表性的菌株进行16S rRNA分析,结果表明,251株(92.26%)属于放线菌门,覆盖11个科,15个属;其余20株属于厚壁门和变形菌门;有7株为潜在的新种。【结论】大连渤海老虎滩海域的沉积物中存在较为丰富的放线菌和新种资源,这些菌株为将来开发新的微生物代谢产物奠定了基础。     

造血干细胞动员与移植治疗脑梗死的对比研究

目的对比造血干细胞（HSCs）内源性动员与外源性移植治疗大鼠脑梗死疗效。方法根据Longa线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型（MCAO）,7d后随机分成四组：A组（HSCs移植组）、B组（PBS组）、C组（HSCs动员组）、D组（对照组）。A组定向植入1×10^6个HSCs;B组植入PBS液;C组皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）10ug／kg／d,连用5d;D组不进行干预。移植前、后进行NSS评分;经免疫组化观察CD34、Nestin、VEGF、vWF阳性细胞的分布情况;TCC染色观察梗死体积的变化。结果第1周A组梗死侧半球CD34、Nestin、VEGF、vWF细胞高于其它3组（P〈0．01）,C组Nestin、VEGF、vWF细胞高于B组和D组（P〈0．05）;第4周各组未见CD34细胞,A、C两组Nestin、VEGF细胞减少,vWF细胞增多（P〈0．05）;A组Nestin、VEGF、vWF细胞高于其它3组（P〈0．01）,B、C、D组Nestin、VEGF细胞的差异无统计学意义,C组vWF细胞高于B组、D组（P〈0．05）。A组神经功能改善最显著,C组次之,B、D组间差异无统计学意义（P〉0．05）。A组梗死体积明显缩小（P〈0．01）,B、C、D组间无差异（P〉0．05）。结论HSCs外源性移植对脑梗死后袄的大鼠治疗效果好于动员。     

1950—2014年广西横县疟疾疫情流行病学分析及Markov模型预测

目的分析横县1950—2014年疟疾疫情监测数据,探讨该时期疟疾流行特点,为今后防控疟疾提供科学依据。方法收集横县1950—2014年疟疾疫情报告数据,应用Excel2007、SPSS18.0和Matlab2016a统计软件分析疟疾疫情的流行特征。用Markov模型对横县2012—2014年疟疾发病率进行预测,并验证预测效果。结果横县1950—2014年共报告疟疾发病数65 259例,年均发病率为119.74/10万。发病率趋势可分为4个阶段,各阶段年均发病率差异有统计学意义(χ2=365 257.034、P<0.05)。其中,1953年疟疾为发病率最高(4 490.14/10万),1996—2014年疟疾发病率则保持在0.77/10万以下,疟疾发病率总体呈下降趋势。2002—2014年无本地疟疾发生,但输入性疟疾病例占比逐步增大(1984—2014年间输入性疟疾病例占疟疾病例总数的93.75%)。同时,Markov模型预测模型用于发病率预测效果良好。结论广西横县经过60多年疟疾防治,原发性疟疾流行已经得到有效控制。但近年出现的输入性疟疾不可忽视,可能造成疟疾死灰复燃,应该把输入性疟疾的流行病学特征作为研究的重点工作。     

2型糖尿病人口腔高温G蛋白(HTPG)生物信息学分析

利用一系列生物信息学软件分析了2型糖尿病患者口腔微生物(放线共生放线杆菌)中的高温G蛋白的氨基酸组成、等电点、结构域、特征位点、二级结构等蛋白质性质。结果表明:高温G蛋白分子式为:C3167H4975N849O975S14,属于稳定蛋白;二级结构主要是以α-螺旋为主。初步预测了高温G蛋白的理化性质并初步确定了其二级结构。     

格尔德霉素基因工程高产菌株的构建和培养

在格尔德霉素产生菌吸水链霉菌17997(Streptomyces hygroscopicus 17997)中存在两种3-氨基-5-羟基苯甲酸(3-amino-5-hydroxybenzoic acid, AHBA)的生物合成基因簇, 根据同源性可分为苯醌类和萘醌类。已证明其中苯醌类的AHBA生物合成基因簇负责格尔德霉素(geldanamycin, Gdm)起始单位的合成, 而萘醌类的AHBA基因簇可能参与未知安莎化合物的生物合成。为提高吸水链霉菌17997菌种的Gdm发酵产量, 并研究高产菌种在固体培养基上孢子的生长周期。采用基因阻断技术, 将吸水链霉菌17997中的萘醌类AHBA生物合成基因簇(shnSOP)进行破坏, 以获得DSOP菌株, 从而减少对合成所需共同底物AHBA的争夺。HPLC分析结果表明DSOP菌株Gdm的发酵产量比原株提高185%。同时, 通过孢子计数发现该菌株在固体培养基上的孢子生长经历2个周期, 第2代孢子菌种的Gdm产量较高。     

麦迪霉素3-O-酰基转移酶在螺旋霉素链霉菌F21中酰化特性

螺旋霉素(SP)与麦迪霉素(MD)均为16元环大环内酯类抗生素, 并且结构非常相似。螺旋霉素含有3个组分,其结构差异表现在16元内酯环C3上的一个取代基的差异, SP I组分为羟基、SP II组分羟基乙酰化、SP III组分羟基丙酰化; 麦迪霉素是以麦迪霉素A1为主要组分的多组分抗生素, 麦迪霉素16元内酯环C3上连接的均为丙酰化羟基。已知这类抗生素16元内酯环C3羟基酰化是由一种称为3-O-酰基转移酶的蛋白催化完成。本研究将螺旋霉素产生菌—Streptomyces spiramyceticus F21中的螺旋霉素3-O-酰基转移酶基因用Streptomyces mycarofaciens ATCC 21454中的麦迪霉素3-O-酰基转移酶基因原位替换后, 发现所产生的螺旋霉素仍然含有3个组分, 并且螺旋霉素III组分也不是主要组分, 说明麦迪霉素3-O-酰基转移酶在螺旋霉素产生菌—S. spiramyceticus F21中不具有16元内酯环C3羟基丙酰化特异性以及酰化高效性, 也提示其在麦迪霉素产生菌中的丙酰化特异性和高效性可能与该菌株(种)的特性有关。     

麦迪霉素3-O-酰基转移酶在螺旋霉素链霉菌F21中的酰化特性

螺旋霉素(SP)与麦迪霉素(MD)均为16元大环内酯类抗生素,并且结构非常相似.螺旋霉素含有3个组分,其结构差异表现在16元内酯环C<,3>上的一个取代基的差异,SPⅠ组分为羟基、SPⅡ组分羟基乙酰化、APⅢ组分羟基丙酰化;麦迪霉素是以麦迪霉素A1为主要组分的多组分抗生素,麦迪霉素16元内酯环C3上连接的均为丙酰化羟基.已知这类抗生素16元内酯环C3羟基酰化是由一种称为3-O-酰基转移酶的蛋白催化完成.本研究将螺旋霉素产生菌-Streptomycesspiramyceticus F21中的螺旋霉素3-O-酰基转移酶基因用Streptomyces mycarofaciens ATCC 21454中的麦迪霉素3-O-酰基转移酶基因原位替换后,发现所产生的螺旋霉素仍然含有3个组分,并且螺旋霉素Ⅲ组分也不是主要组分,说明麦迪霉素3-O-酰基转移酶在螺旋霉素产生菌-S.spiramyceticus F21中不具有16元内酯环C3羟基丙酰化特异性以及酰化高效性,也提示其在麦迪霉素产生菌中的丙酰化特异性和高效性可能与该菌株(种)的特性有关.     

小菜蛾应对球孢白僵菌感染的免疫应答基因分析

通过室内生物测定,筛选对小菜蛾Plutella xylostella具有高毒力的球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株,分析小菜蛾应对球孢白僵菌浸染的免疫应答基因。采用新一代Illumina高通量测序技术对接种/感染48h与未接种的小菜蛾样品分别进行转录组测序,筛选差异表达基因;结合生物信息学分析差异表达基因的功能、分类及涉及的信号通路等。结果表明接种小菜蛾48h后诱导2 434个基因发生差异表达,包括1 080个上调基因和1 354个下调基因。GO分类结果表明,这些差异表达基因（DEGs）被注释到45个GO term中,包括23个生物学过程,12个细胞组分和10个分子功能。KEGG分析表明,1 308个DEGs被富集到25个功能途径,这些DEGs包括497个上调基因和811个下调基因。分析发现,DEGs编码蛋白包含肽聚糖识别蛋白、丝氨酸蛋白酶55、丝氨酸蛋白酶抑制剂以及细胞色素P450 6K1类的免疫相关蛋白。另外,组蛋白、磷酸泛酰半胱氨酸脱羧酶、双链RNA结合蛋白、黑芥子酶等基因在球孢白僵菌侵染过程中也高表达,推测这些基因可能参与小菜蛾应对球孢白僵菌侵染的免疫反应。研究结果为进一步研究小菜蛾免疫相关基因的功能奠定了基础。     

微生态制剂通过下调小鼠肝脏γδT细胞内IL-17的分泌缓解胆汁淤积性肝病

目的探讨微生态制剂通过下调小鼠肝脏γδT细胞内IL-17的分泌缓解胆汁淤积性肝病的机制。方法随机选取10只正常环境饲养的小鼠作为对照组,每日上下午给予10 mL/kg的生理盐水灌胃共20 d;按相关文献中小鼠胆汁淤积性肝病模型制备方法,将其余用于造模的30只小鼠每日上下午均采用50%葡萄糖+100%猪油脂1︰1比例的混合液10 mL/kg灌胃20 d,第21天,将α-萘基异硫氰酸盐(ANIT)100 mg/kg一次性灌胃,灌胃前后12 h禁食不禁水;随后在完成造模的30只小鼠中,随机选取10只作为模型组,再选取10只作为给药低剂量组,剩余10只为给药高剂量组;自第21天开始,对照组及模型组小鼠每日下午给予10 mL/kg生理盐水灌胃7 d,给药低剂量组以含双歧杆菌活菌数为10~3 CFU/mL的稀释液10 mL/kg灌胃7 d,给药高剂量组以含双歧杆菌活菌数为10~7 CFU/mL的稀释液10 mL/kg灌胃7 d。将小鼠处死后,小鼠肝脏HE染色进行组织病理学观察,小鼠血清采用ELISA试验进行肝功能及炎症因子IL-17检测;分离纯化小鼠γδT细胞并进行培养,通过qRT-PCR试验检测IL-17信号通路相关因子IL-17a、IL-17f、CCR6和CD163的表达水平。结果小鼠肝脏组织病理学观察显示微生态制剂对胆汁淤积性肝病有明显缓解效果,并且高剂量比低剂量的效果更明显;血清肝功能检测结果显示模型组小鼠血清ALT、AST、ALP、TBA、TBIL和LP-X水平较对照组升高(t=15.670、13.470、14.170、7.376、7.839、10.430,均P0.001),血清LEC、CHOL水平降低(t=4.089、6.022,均P0.001);给药低剂量组及给药高剂量组小鼠血清ALT、AST、ALP、TBA、TBIL和LP-X水平较模型组降低(F=83.330、39.400、71.680、20.820、17.000、27.300,均P0.001),血清LEC、CHOL水平升高(F=6.419,P=0.520;F=8.486,P=0.014);小鼠血清IL-17检测结果显示模型组较对照组升高(t=42.010,P0.001),给药低剂量组及给药高剂量组小鼠血清IL-17水平较模型组降低(F=454.700,P0.001);qRT-PCR试验结果显示微生态制剂给药能明显下调小鼠肝脏γδT细胞内IL-17信号通路相关主要因子IL-17a、IL-17f、CCR6和CD163的表达水平。结论微生态制剂能通过下调小鼠肝脏γδT细胞内IL-17的分泌缓解胆汁淤积性肝病的发展。     

尿毒症血液透析患者血清Lp-PLA2、FGF-23与自体动静脉内瘘成熟不良的关系研究

摘要 目的：探讨尿毒症血液透析患者血清脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）、成纤维细胞生长因子-23（FGF-23）与自体动静脉内瘘（AVF）成熟不良的关系。方法：选取2021年2月～2022年12月联勤保障部队第908医院肾内科收治的170例接受血液透析的尿毒症患者,根据AVF成熟情况分为成熟不良组57例和成熟组113例。采用酶联免疫吸附法检测血清Lp-PLA2、FGF-23水平。通过多因素Logistic回归分析尿毒症血液透析患者AVF成熟不良的影响因素,受试者工作特征（ROC）曲线分析血清Lp-PLA2、FGF-23水平对尿毒症血液透析患者AVF成熟不良的预测效能。结果：成熟不良组血清Lp-PLA2、FGF-23水平高于成熟组（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示,血磷、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、Lp-PLA2、FGF-23升高为尿毒症血液透析患者AVF成熟不良的独立危险因素（P＜0.05）。ROC曲线分析显示,血清Lp-PLA2、FGF-23水平单独和联合预测尿毒症血液透析患者AVF成熟不良的曲线下面积（AUC）分别为0.725、0.763、0.822,血清Lp-PLA2、FGF-23水平联合预测的AUC最大。结论：尿毒症血液透析患者血清Lp-PLA2、FGF-23水平升高与AVF成熟不良独立相关,血清Lp-PLA2、FGF-23水平联合对AVF成熟不良的预测效能良好。