口服草原兔尾鼠卵透明带3纳米乳剂DNA疫苗免疫效果研究

用免疫不育疫苗控制有害动物的数量成为动物种群数量控制的一个有效措施,对于大多数动物来说．口服饵料发送系统是最好的选择。但是口服疫苗容易产生耐受,且生物利用度低,利用多聚物包裹口服疫苗是一种打破口服耐受．提高其生物利用度的新途径。本文以纳米乳剂作为草原兔尾鼠卵透明带3（Lugurus zone pellucida 3,LZP3）DNA疫苗的发送载体,探讨通过口服途径增强小鼠的免疫效果和抗生育率。用纳米乳剂包裹lzp3 DNA疫苗后,采用强阴离子交换色谱法测定纳米乳剂的包封率．将制备好的质粒纳米乳剂lzp3 DNA疫苗通过口服饵料免疫小鼠,检测到免疫后小鼠的体内产生了特异性的抗LZP3的IgG和IgA。对免疫后小鼠进行抗生育实验,分析生育后免疫小鼠的卵巢病理切片。研究结果表明,用质粒纳米乳剂如p3DNA疫苗通过口服途径免疫．在小鼠的血清和粘液中检测到了特异性的抗LZP3的IgG和IgA,同时也产生了相应的抗生育作用．表明纳米乳剂作为口服不育疫苗的发送载体是可行的,为草原兔尾鼠鼠害的防治提供了理论基础．     

质粒纳米乳剂的制备与阴离子交换色谱测定方法

以纳米乳剂为载体包裹草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗,制备获得了纳米乳剂DNA疫苗,并对其进行了质量评价。采用界面乳化法制备质粒纳米乳剂,用电子显微镜测定了其粒径及其分布,根据质粒的带电特性,利用强阴离子Q SepharoseTMXL色谱柱分离纳米乳剂和游离质粒,建立了强阴离子交换柱质粒纳米乳剂包封率的快速测定方法。结果表明:制备的纳米乳剂DNA疫苗的平均粒径为(23±10)nm,包封率为80.5%。选择0.05mol/L的Tris-HCl为平衡液,流速为0.7mL/min,紫外检测波长260nm,柱温30℃,进样量为2mL的实验条件,质粒的含量和峰面积的线性关系良好(r=0.9983),加样回收率在95%以上,该方法简便快速、灵敏度高,重复性好,可用于纳米乳剂DNA疫苗包封率的快速测定。     

PolyI:C协同IL-15作为小鼠卵透明带3基因疫苗佐剂黏膜免疫效果的观察

目的:以Toll样受体拮抗物Poly I:C协同细胞因子IL-15作为免疫佐剂,通过滴鼻方式免疫ICR小鼠,对卵透明带3(murine zona pellucida,m ZP3)基因疫苗的免疫增强效果进行观察。方法:将Poly I:C和IL-15单独或协同与用壳聚糖(chitosan,Chi)包裹的m ZP3基因疫苗滴鼻免疫ICR小鼠,ELISA法检测小鼠血清中特异性抗m ZP3抗体和生殖道黏液、肺洗液中s Ig A的水平,MTT法检测淋巴细胞增殖,小鼠的平均窝仔数和生育率检测抗生育情况,组织学观察小鼠的卵巢病理切片。结果:Poly I:C协同IL-15共同免疫组能够显著提高免疫后小鼠抗m ZP3抗体的水平,促进淋巴细胞的增殖,平均窝仔数和生育率显著降低,小鼠的卵巢发育异常。结论:Poly I:C协同IL-15能够增强m ZP3基因疫苗的免疫效果,并在一定程度上降低小鼠生育率。     

铜绿假单胞菌荧光实时定量PCR标准品的构建

构建了荧光实时定量PCR标准品以检测水中的铜绿假单胞菌.利用所报道的铜绿假单胞菌gyrA基因为目的基因设计引物,通过培养细胞,煮沸法裂解细胞后做PCR,电泳,胶回收,然后与pMD19-T Vector连接并转化到感受态大肠杆菌中;氨苄青霉素筛选出白色菌落,菌落PCR及测序鉴定其特异性,根据OD值确定浓度,制备梯度浓度参考标准品,制作标准曲线,检测水样品中铜绿假单胞菌的菌量.