过表达外源ST3Gal I增加MCF-7细胞与胞外基质粘附和侵袭能力

为探讨过表达外源α2,3-唾液酸转移酶（ST3Gal Ⅰ）对乳腺癌MCF-7细胞粘 附和侵袭能力的影响,构建pEGFP-N1-ST3Gal I真核表达载体.采用GenEscortTM Ⅱ包裹后转染MCF-7细胞. MCF-7细胞为3组：未转染组 (M)、转染空质粒组 (P) 和转染ST3Gal I组 (ST3); 荧光显微镜观察融合蛋白EGFP ST3Gal I的表达.采用 半定量RT-PCR、Western印迹法分析转染后MCF-7细胞ST3Gal Ⅰ基因mRNA水平和 蛋白表达水平;流式细胞术分析ST3Gal Ⅰ下游产物细胞表面α2,3-唾液酸含量;采用细胞粘附实验及transwell小室检测转染前后细胞与基质胶Matrigel粘附、迁移和侵袭运动能力的变化.结果表明, 荧光显微镜下P组细胞内绿色荧光呈弥散分 布,而ST3组绿色荧光主要集中在细胞质中,RT-PCR与Western印迹也证实了外源 ST3Gal Ⅰ基因mRNA和蛋白表达均明显增加（P<0.05）,其下游产物细胞表面 α2,3-唾液酸含量明显增加（P<0.05）;与M、P组相比,ST3组表现为粘附、迁移和侵袭能力明显增强（P<0.05）.利用转染技术可明显提高外源ST3Gal Ⅰ在MCF -7细胞表达,明显增加MCF-7细胞与胞外基质（ECM）粘附、迁移和侵袭能力,可形成肿瘤入侵表型,将有望成为治疗乳腺癌转移的新靶点.     

双歧异黄酮奶粉对化疗荷瘤小鼠减毒增效作用的研究

目的：研究双歧异黄酮奶粉对化疗后荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法：以S180荷瘤C57BL／6小鼠为模型,系统地研究双歧异黄酮奶粉对瘤重和细胞功能的影响。结果：双歧异黄酮奶粉对荷瘤鼠化疗所引起的免疫功能低下具有明显的恢复作用,可显著提高化疗荷瘤鼠T细胞转化能力,明显促进化疗荷瘤鼠白介素—2(IL—2)分泌水平。结论;双歧异黄酮奶粉能够拮抗肿瘤抗原和化疗所引起的免疫抑制。     

双歧杆菌的生理作用及开发前景

存在于人体消化道的菌数可达100万亿个,菌体总重量约1.0～1.5kg,占人体总重量的1/50～1/60,与人体肝脏的重量相当,而产生酶的量却远远超过肝脏所产生的量.这些菌大多数与人和平共处有益而无害,称为正常菌群.其中95%以上是活菌,因此人体的营养、消化、生物拮抗、免疫、抗肿瘤、药物效能和抗衰老等离不开自身携带的微生物群.     

双歧杆菌模拟胃肠环境中抗性的研究

采用PYG培养基,模拟胃肠环境,即低pH值(1．5—4．5),高胆汁酸盐(9．1％-0．4％)对青春双歧杆菌进行抗性研究。同时对肠道致病性大肠埃希菌、福氏志贺菌和金黄色葡萄球菌拮抗性以及对氨苄青霉素、庆大霉素、卡那霉素和氯霉素的耐药性进行研究。结果表明,青春双歧杆菌在pH4．5时有较强的生存能力,4h活菌效可达10^7CFU／m1以上。且能在含0．1％-0．4％的胆汁盐中存活,在0．1％-0．2％时4h活菌总数可达10^5CFU／m1以上。同时对致病性大肠埃希菌、福氏志贺菌和金黄色葡萄球菌具有明显的抑菌作用,且对庆大霉素中度敏感,对氨苄青霉素、卡那霉素和氯霉素有耐受性。     

RNA干扰敲减FucT VII表达抑制人结肠癌细胞HT-29和HUVECs的粘附能力

 探讨利用RNA干扰（RNAi）技术抑制岩藻糖基转移酶Ⅶ（FucT Ⅶ）表达对人结肠癌细胞HT-29与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）粘附能力的影响及其机制.本课题构建3对针对FucT Ⅶ基因的RNAi表达载体,并将其转染入人结肠癌细胞HT-29,Western 印迹检测FucT Ⅶ及其下游产物sLeX蛋白的变化;实时PCR 检测FucT Ⅶ mRNA表达的变化;玫瑰红染色法检测RNAi 对HT-29与HUVECs细胞粘附能力的影响.结果显示,3对FucT Ⅶ siRNA表达载体均可有效抑制HT-29细胞FucT Ⅶ mRNA和蛋白表达,以pSilencer 2.0 FucT Ⅶ 2最为有效;与空白细胞组比较,转染pSilencer 2.0-FucT Ⅶ的HT-29细胞表面sLeX表达水平明显下降,以pSilencer 2.0-FucT Ⅶ 2最为显著;RNA干扰FucT Ⅶ表达后HT 29细胞和HUVEC之间的粘附能力明显受到抑制.研究表明,RNAi靶向沉默HT-29细胞中FucT Ⅶ基因表达可显著降低其下游产物sLeX的合成,进而抑制HT-29细胞与HUVECs的粘附能力.     

双歧异黄酮奶粉对H22荷瘤小鼠化疗后的增效减毒作用研究

目的研究双歧异黄酮奶粉对环磷酰胺化疗后H22荷瘤小鼠抗肿瘤的增效减毒作用及其机制。方法构建H22荷瘤C57BL／6小鼠模型,研究双歧异黄酮奶粉对环磷酰胺化疗后的抑瘤率,取脾和胸腺计算脏器指数,双抗夹心ELISA法测定抑癌基因P27的表达及IL-2的水平以探索增效减毒机制。结果双歧异黄酮奶粉与环磷酰胺联合抗肿瘤具有增效减毒作用。可诱导抑癌基因P27的表达,增加IL-2的水平。结论双歧异黄酮奶粉与环磷酰胺联合抗肿瘤具有增效减毒作用。     

双歧杆菌在蛋白类载体中混合发酵的实验研究

利用青春双歧杆菌在蛋白类载体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中添加蔗糖和促生长因子等,接种2% 1∶1的嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌混合发酵剂,5%的青春双歧杆菌发酵剂,经38～39℃前发酵4.5～6.0 h,终点判定pH值为4.6～4.8,°T为70～80,在2～5 ℃冰箱中进行后发酵12～16 h,可得到两种组织状态、风味、口感优良的特定功能保健饮品 .     

TOX3基因RNAi慢病毒载体的构建及对乳腺癌ZR-75-1细胞增殖的影响

旨在构建TOX3基因RNAi慢病毒载体并观察其对人乳腺癌ZR-75-1细胞增殖能力的影响。针对TOX3基因设计干扰靶序列,构建载体,测序正确后进行慢病毒包装及滴度测定。转染ZR-75-1细胞,荧光显微镜下观察表达GFP的细胞数目,实时荧光定量PCR及Western blot实验验证转染后ZR-75-1细胞中TOX3 mRNA和蛋白的表达。MTT及平板单克隆实验检测TOX3对ZR-75-1细胞增殖能力的影响。结果显示,各组载体序列正确,病毒滴度均2×108 TU/mL,表达GFP细胞数目均可达95%以上。各干扰组TOX3 mRNA及蛋白表达水平均降低,其中TOX3-shRNA-3组干扰效果最佳,转染后ZR-75-1细胞的增殖和单克隆形成能力下降。成功构建TOX3基因的RNAi慢病毒载体,沉默TOX3后ZR-75-1细胞的增殖能力下降。     

高等医学院校附属医院建设“学术型”医院的思考

随着我国医疗卫生事业的快速发展和医学科学的不断进步,高等医学院校附属医院正面临着新的发展机遇和挑战。通过对我国医院现状与发展趋势的研究分析,提出新时期高等医学院校附属医院走“学术型”医院的发展之路,并从内涵、特征、构建思路等几方面对建设“学术型”医院进行初步阐述,以期对我国高等医学院校附属医院的发展与建设提供新的思路。     

双歧豆奶菌种的驯化研究

选用青春双歧杆菌在 A、B、C三种培养基上进行耐氧和凝固驯化 ,经 2 8代筛选出一株耐氧性并在 C培养基上进行耐氧和凝固驯化 ,经 2 8代筛选出一株耐氧性并在 C培养基中由 5 6 h可发生凝固 ,最后缩短到 12 h发生凝固的青春双歧杆菌 ;在 PYG和豆乳培养基中进行耐酸驯化 ,经 15代筛出一株能在p H4.7°T90的发酵豆乳中存活的青春双歧杆菌 ;在 BCPYC液体和固体培养基中进行耐热驯化 ,经 14代筛选出一株能在 47℃± 1℃的环境中生长的青春双歧杆菌。本菌在改良的 NPNL双歧选择培养基中生长 ,形态、培养与生化特性与原菌种无差异。