海巴戟(Morinda citrifolia L.)组织培养研究

以海巴戟（Morinda citrifolia L．）种子为试材,在不剥除种皮的情况下,在MS无激素培养基上播种1年内未见发芽,在剥除种皮的情况下,在MS无激素培养基上发芽率最高,50d内可达75％。海巴戟子叶和下胚轴均能单独由细胞分裂素BA0．7～2．0mg／L诱导不定芽发生,不定芽可直接从外植体发生,也可从愈伤组织发生,添加生长素NAA0．05～0．1mg／L则完全抑制不定芽发生,同时强烈促进愈伤组织生长和不定根发生。带芽茎段在BA1．5mg／L配合低浓度生长素时均能通过腋芽萌发和不定芽发生而增殖。芽梢在NAA0．1mg／L、IBA0．1mg／L或IAA0．1mg／L均有根群发生,但NAA0．1mg／L诱导生根时切口愈伤组织较多,部分不定根由愈伤组织发生。而IAA0．1mg／L诱导生根时根群欠发达,以IBA0．1mg／L最佳。     

甘蔗UGPase5'侧翼序列克隆及缺失表达分析

以甘蔗(FN95;-1702)为材料,通过接头连接PCR方法克隆该基因不同长度5'侧翼序列。将不同长度的5'侧翼序列连同UGPase基因的外显子片段定向插入到GUS基因上游,在保证其后GUS编码框不发生偏移的情况下,插入的UGPase外显子融合GUS表达成为新的报告基因。根据此策略,构建了一系列表达结构为5'Flanking Sequence-UGPase Exon-GUS-Nos polyA的5'侧翼序列缺失表达载体,进行启动子活性分析。注射法转染烟草叶片组织检测GUS瞬时表达,分析结果表明,所克隆到的UGPase基因5'端侧翼序列不具有启动子活性。     

扁蓄总黄酮提取方法的比较

The factors which effected the extraction of total flavones from Polygonum aviculare L.var.aviculore were discuseed with respects to solvent,concentration and the extracting temperature.The rutin was used as a standard compound,the total flavones extracted by the different extracting procedure were quantitated by measurement of absorbance at 510 nm.The results show that 80℃ and 35% alcohol are optimal and the extracting rate of the total flavones in as high as 4.349%.     

扁蓄总黄酮含量的测定

以35％乙醇为提取溶剂,聚酰胺吸附提纯,芦丁为标准品,用分光光度法于510nm处测定了扁蓄各部位的总黄酮含量。结果表明：扁蓄全草总黄酮含量为4．349％,根为7．115％,茎为5．454％,叶为3．544％。     

灰木相思蛋白质组双向电泳条件的优化

针对灰木相思(Acacia implexa Benth.)蛋白质提取过程中含有大量色素和酚等干扰物质的现象,进行了实验条件的优化,结果显示:选择含较少次生物质量的组培苗为实验材料更易得到清晰的双向电泳图谱,在裂解液中添加硫脲更有利于提高蛋白溶解度,第一向等电聚焦固相pH梯度胶条(24 cm)的最适蛋白上样量为1000μg,表明采用优化后的双向电泳体系提高了灰木相思总蛋白双向电泳的分辨率和重复性,建立起一套适用于灰木相思总蛋白质组分析的双向电泳(2-DE)方法.     

农杆菌介导白藜芦醇合酶基因转化蔓茎堇菜的研究

目的:通过农杆菌介导法将白藜芦醇合酶基因转化蔓茎堇菜,并对转化条件进行优化.方法:以蔓茎堇菜叶柄为受体材料,采用叶盘法进行遗传转化,实验过程中对影响转化的一些主要因素进行筛选研究.结果:最佳的侵染条件为OD6000.3的菌液侵染10min,头孢霉素的适宜浓度为250mg/L.转化后的蔓茎堇菜外植体经3.0mg/L潮霉素筛选,最终得到9株抗性再生苗,转化频率为0.98%.结论:该研究为建立一个农杆菌介导白藜芦醇合酶基因转化蔓茎堇菜的遗传体系提供了基础.     

NaCl胁迫对萝卜幼苗叶片生理特征及根尖细胞核形态的影响

对0.00(对照)～0.50 mol·L-1NaCl处理48 h后萝卜(Raphanus sativus L.)幼苗叶片的叶绿素含量、净光合速率、丙二醛(MDA)含量和相对电导率进行了测定,并观察了根尖细胞核形态变化和胁迫后幼苗生长的恢复状况.测定结果表明:经0.05 mol·L-1NaCl处理后,叶片的叶绿素含量和净光合速率均高于对照(0.00 mol·L-1 NaGl);而用0.10～0.50mol·L-1NaCl处理后,叶绿素含量和净光合速率均随NaCl浓度的提高逐渐降低且与对照差异显著,其中,经0.35 ～ 0.50 mol·L-1 NaCl胁迫处理后叶片净光合速率降至0.00μmol·m-2·s-1.随NaCl浓度的提高,MDA含量和相对电导率呈先快速上升而后逐渐下降的趋势,且均与对照差异显著;其中,经0.30 mol·L-1 NaCl处理后MDA含量最高,经0.40 mol·L-1NaCl处理后相对电导率最高.观察结果显示:经0.05～0.25 mol·L-1NaCl处理后根尖细胞核由规则的圆形向各种不规则形状转变,染色质出现不同程度的浓缩,表现出不同程度的程序性细胞死亡特征;经0.30 ～ 0.50 mol·L-1NaCl处理后则出现中空细胞与部分正常细胞并存的现象.经0.05和0.10 mol·L-1 NaCl处理后,萝卜幼苗可恢复正常生长,且株高与对照无明显差异;而经0.25 ～ 0.50 mol·L-1 NaCl处理后,幼苗均较难恢复正常生长,且随NaCl浓度的提高,幼苗出现枯萎、糜烂现象.研究结果显示:低浓度NaCl处理不仅对萝卜幼苗的生长、生理代谢及细胞核形态结构没有明显伤害反而有一定的促进作用,而高浓度NaCl胁迫可导致萝卜幼苗不可逆伤害.     

一种用分光光度计检测氧自由基的新方法

报告检测过硫酸铵／N, N,N′,N′-四甲基乙二胺体系所产生的氧自由基的新方法.O-·2与羟胺溶液反应生成NO-2,NO-2经对氨基苯磺酸和α-萘胺显色在波长530 nm处有专一吸收峰,其颜色深浅与产生的O-·2呈量效关系.氧自由基清除剂抗坏血酸对O-·2的清除作用也呈明显的量效关系.     

甘蔗 UGPase 5’侧翼序列克隆及缺失表达分析简

以甘蔗(FN95;-1702)为材料,通过接头连接PCR方法克隆该基因不同长度5′侧翼序列。将不同长度的5′侧翼序列连同UGPase基因的外显子片段定向插入到GUS基因上游,在保证其后GUS编码框不发生偏移的情况下,插入的UGPase外显子融合GUS表达成为新的报告基因。根据此策略,构建了一系列表达结构为5′ Flanking Sequence-UGPase Exon-GUS-Nos polyA的5′侧翼序列缺失表达载体,进行启动子活性分析。注射法转染烟草叶片组织检测GUS瞬时表达,分析结果表明,所克隆到的UGPase基因5′端侧翼序列不具有启动子活性。     

优化灰木相思组培苗蛋白质组的提取与分离技术

针对木本植物灰木相思(Acacia implexa Benth.)蛋白质分离过程中含有大量色素和酚等干扰物质的现象,本实验优化了各步实验条件。结果表明,在蛋白提取液中加入10%PVP,同时提高离心力、延长离心时间能提高可溶性蛋白得率,第一向等电聚焦24cm长的固相pH梯度胶条的最适蛋白上样量为1000μg,第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶最适浓度为12.5%。优化后的实验配置体系提高了灰木相思组培苗总蛋白双向电泳的分辨率和重复性,建立一套适用于灰木相思组培苗蛋白质组提取与分离的方法。