猪O型口蹄疫病毒细菌样颗粒疫苗的制备与免疫原性鉴定

验证基于革兰氏阳性增强基质(Gram-positive enhancer matrix,GEM)展示口蹄疫病毒细菌样颗粒(Bacteria-like particles,BLP)疫苗的可行性。按照大肠杆菌偏好性密码子优化合成基于猪口蹄疫病毒Mya98株序列的3种抗原基因设计,并将其插入到含有锚钩蛋白基因的原核表达载体p QZ-PA,鉴定阳性后转入Escherichia coli BL21,进行诱导表达。利用SDS-PAGE与Western blotting对目的基因表达及产物的可溶性进行分析。利用GEM颗粒纯化目的蛋白,制备细菌样颗粒疫苗抗原;利用BCA试剂盒测定重组蛋白的浓度,将重组蛋白与白油佐剂乳化,制备疫苗,免疫5周龄小鼠,同时设商品化多肽苗对照与空白对照,免疫后不同时间采集试验小鼠血清,利用口蹄疫病毒多肽ELISA抗体检测试剂盒和O型口蹄疫抗体液相阻断酶联免疫(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒检测免疫小鼠血清的抗体水平;利用噻唑蓝比色法(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)测定淋巴细胞增殖情况;利用荧光定量PCR方法检测相关细胞因子表达,评价细胞免疫水平。SDS-PAGE结果表明,设计在大肠杆菌中的3种口蹄疫病毒抗原基因均以可溶形式获得高效表达;Western blotting结果显示,表达的重组蛋白能够与口蹄疫病毒阳性血清发生反应,利用GEM颗粒能够实现重组蛋白的一步离心纯化,制备BLP疫苗抗原;免疫试验结果表明,设计的重组抗原B(T1BT2)4B不但能够刺激免疫小鼠产生更高水平的多肽特异性ELISA抗体与口蹄疫特异性液相阻断抗体,而且产生了更高水平的脾淋巴细胞增殖及Th1型的细胞因子分泌。初步实验结果表明,本研究制备的BLP疫苗GEM-B(T1BT2)4B具有良好的免疫原性,为研究口蹄疫病毒基因工程亚单位疫苗开辟了一条新的思路。     

黑米黑木耳粉对代谢综合征患者糖脂代谢的影响

目的：探讨食用黑米黑木耳粉（一种新型复合杂粮）对代谢综合征患者血糖血脂的影响。方法：60名代谢综合征患者随机分为黑米黑木耳粉组和普通糙米组,实验时间1个月。研究期间登记受试者饮食情况。研究开始前和干预1个月后进行血液生化、维生素浓度和人体成分测定,其中血糖测定分别选择空腹、餐后0.5、1和2h等4个时间点,血脂测定选择空腹和餐后2h等2个时间点。结果：4例患者退出研究,获得有效数据56例,其中黑米黑木耳组27例、普通糙米组29例。研究前后2组身高、体重、BMI、血糖、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、维生素浓度均无统计学意义。实验结束后与普通糙米组比较,黑米黑木耳组代谢综合征患者空腹血糖、LDL-C、餐后2h甘油三酯明显降低,有显著性差异（P<0.05）;黑米黑木耳组维生素B9（叶酸）浓度高于普通糙米组,黑米黑木耳组维生素B1、维生素B9浓度亦明显高于实验前（P<0.05）。结论：食用黑米黑木耳粉,可以降低代谢综合征患者空腹血糖、低密度脂蛋白胆固醇及餐后甘油三酯,可作为代谢综合征的主食选用。 征     

钠负荷对高血压父母的子女肾钠钾水排出及平均动脉压的影响

近年报道高血压父母的子女对急性盐水负荷引起促钠排泄明显降低和心血管对精神应激性刺激明显增强,但未报道高血压父母的子女对高钠饮食引起促钠排泄与心血管反应性变化。本工作观察父母高血压的青年子女对高盐摄食引起促钠排泄变化及其对心血管功能影响。1　实验方法(1)受试者的选择　受试者为二年级男女医学生,年龄19～21岁。高血压父母的子女受试者68名,父母高血压的病程在5～8年之间。正常血压父母的子女79名。两组受试者的收缩压与舒张压均值无显著差异。(2)尿流量、排钠量和排钾量的测定收集受试者每24ｈ尿液,测量日排尿量(ｍｌ)。用…     

含不同个数基序乳酸乳球菌肽聚糖锚钩蛋白结合活性比较

【目的】比较两种含不同个数基序乳酸乳球菌肽聚糖锚钩蛋白(protein anchor,PA)的结合活性。【方法】首先应用PCR技术分别扩增得到含有2个或3个自溶素基序(Lysin Motif,Lys M)基因片段的PA2与PA3;然后应用p ET-32a(+)质粒构建原核表达载体,将其转化大肠杆菌BL-21(DE3),进行诱导表达,获得目的蛋白;最后将经复性后的PA2、PA3融合蛋白与GEM(Gram-positive Enhancer Matrix,GEM)颗粒结合,经Western blot、透射电镜与SDS-PAGE进行结合鉴定与结合活性比较分析。【结果】融合蛋白PA2、PA3复性后都能与GEM结合,PA3与GEM颗粒的结合活性明显好于PA2。【结论】含有3个Lys Ms的PA对GEM的结合活性明显优于含有2个Lys Ms的PA。本研究可为进一步完善乳球菌外壳-蛋白锚钩展示系统提供理论基础。     

用氨甲蝶呤偶联琼脂糖亲和吸附法从人肝脏cDNA噬菌体展示文库中筛选氨甲蝶呤相互作用蛋白

目的:利用氨甲蝶呤(MTX)偶联琼脂糖凝胶吸附法从人肝脏细胞cDNA噬菌体展示文库中筛选与MTX相互作用的蛋白.方法:以偶联于琼脂糖凝胶表面的MTX为配基,通过"结合-洗脱-扩增"过程筛选与MTX相互作用的噬菌体.利用PCR对筛选结果进行监测,对筛选得到的噬菌体PCR产物进行序列测定和基因同源性分析.结果:通过五轮亲和筛选富集到特异噬菌体克隆,再通过PCR获得cDNA插入片段.通过BLAST程序搜索GenBank,证明筛选到的片段与人PI-3K相关蛋白激酶SMG-1异构体1蛋白同源性达100%.结论:利用偶联MTX的琼脂糖凝胶作为筛选基质,从T7噬菌体展示cDNA文库中富集特异噬菌体是一种方便、高效的MTX相互作用靶蛋白筛选方法,可为探讨小分子药物的分子作用机制提供借鉴和参考.     

利用氨甲蝶呤－琼脂糖凝胶进行噬菌体展示人肝脏cDNA文库筛选的方法研究

目的：利用氨甲蝶呤（MTX）偶联琼脂糖凝胶吸附法从人肝脏细胞cDNA噬菌体展示文库中筛选与MTX相互作用的蛋白。方法：以偶联于琼脂糖凝胶表面的MTX为配基,通过"结合－洗脱－扩增"过程筛选与MTX相互作用的噬菌体。利用PCR对筛选结果进行监测,对筛选得到的噬菌体PCR产物进行序列测定和基因同源性分析。结果：通过五轮亲和筛选富集到特异噬菌体克隆,再通过PCR获得cDNA插入片段。通过BLAST程序搜索GenBank,证明筛选到的片段与人PI-3K相关蛋白激酶 SMG-1异构体1 蛋白同源性达100％。结论：利用偶联MTX的琼脂糖凝胶作为筛选基质,从T7噬菌体展示cDNA文库中富集特异噬菌体是一种方便、高效的MTX相互作用靶蛋白筛选方法。本方法可为探讨小分子药物的分子作用机制提供借鉴和参考.     

玉米跨代干旱胁迫记忆生理机制及DNA甲基化变化分析

为研究亲代干旱锻炼对后代玉米生理特性和DNA甲基化修饰的影响,以亲代(G₀代)经干旱锻炼的玉米自交系B73和H99自交后代(G₁代)为材料,利用20% PEG 6000模拟干旱胁迫条件,检测G₁和G₀代叶片相对含水量(RWC)与丙二醛(MDA)、可溶性糖、脯氨酸含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性变化,并利用甲基化敏感扩增多态性技术(MSAP)检测G₁和G₀代基因组DNA甲基化状况,分析2个世代玉米生理指标和基因组DNA甲基化修饰的变异规律。结果表明：(1)在相同干旱胁迫条件下,玉米B73和H99 自交系G₁代叶片的RWC、可溶性糖与脯氨酸含量以及SOD和POD活性均高于G₀代,其G₁代MDA含量则低于G₀代;G₁代叶片的RWC减少量和MDA增加量小于G₀代,G₁代可溶性糖和脯氨酸含量以及SOD和POD活性增加量均大于G₀代。(2)干旱胁迫诱发了B73和H99 自交系G₁和G₀代DNA甲基化水平和甲基化模式的改变;在相同干旱胁迫条件下,两自交系G₁代DNA甲基化修饰变化均大于G₀代。(3)B73和H99 自交系DNA甲基化修饰变异规律不同,随胁迫时间延长,B73 自交系2个世代CG、CHG甲基化水平均呈上升趋势,H99 自交系2个世代CG甲基化水平呈上升趋势,CHG甲基化水平呈下降趋势;B73 自交系2个世代均以CG hypo和CHG hypo变化为主,H99 自交系2个世代均以CHG hypo和CG hyper变化为主。研究发现,B73和H99玉米自交系G₁代植株的抗氧化和渗透调解能力以及DNA甲基化修饰变化均大于G₀代,其抗旱性也强于G₀代,从而证明玉米存在跨代干旱胁迫记忆。     

不同体质量和饥饿程度对红鳍东方鲀幼鱼游泳能力的影响

为了考察不同体质量和饥饿程度红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)幼鱼的游泳能力,利用行为生态学方法测定了不同体质量(0.22—3.31 g)和饥饿天数(1d、3d、6d和9d)下红鳍东方鲀幼鱼的绝对临界游速(U_crit,cm/s)、相对临界游速(U_crit’,体长/s,BL/s)、偏好游速(U_pref,cm/s)、6个流速区域(2—36 cm/s)下停留时间百分比(P_t,%)、偏好区域平均流速(V_mean,cm/s)和总游泳距离(D_1h,m)等游泳行为指标。结果显示,体质量和饥饿显著影响红鳍东方鲀幼鱼的U_crit、U_crit’、P_t、V_mean和D_1h。随体质量增加,实验鱼的U_crit、U_pref、V_mean和D_1h均逐渐升高,而U_crit...     

缘管浒苔对赤潮异弯藻的克生效应

利用共存培养系统研究了缘管浒苔(E nterom orpha linza)新鲜组织和干粉末对赤潮异弯藻(H eterosigm a akash iw o)生长的克生效应。共存实验结果表明,缘管浒苔新鲜组织和干粉末对赤潮异弯藻生长均有强烈的克生效应。同时,研究了缘管浒苔培养水过滤液对赤潮异弯藻的克生作用。赤潮异弯藻在缘管浒苔培养水过滤液的半连续添加方式下生长受到明显的克制作用,但在一次性培养方式下生长未受到明显的抑制作用,说明克生物质的连续分泌是有效克制赤潮异弯藻生长的关键;煮沸的大藻培养水过滤液对微藻的生长无抑制作用,表明克生物质在高温下不稳定和易分解。     

植物体细胞无性系变异研究进展

植物体细胞无性系变异是植物组织培养中的普遍现象,泛指在植物细胞、组织和器官培养过程中,培养细胞和再生植株中产生的遗传变异或表观遗传学变异。植物体细胞无性系变异的发生有其遗传学基础,可从形态学、细胞学、生物化学和分子生物学等多个方面对其进行综合检测和鉴定。植物体细胞无性系变异是植物育种的有利资源。但同时也是植物微繁和遗传转化工作中需要克服的一大难题,一直被众多研究者所关注。本文分别从细胞学和分子生物学两个层次综述了植物体细胞无性系变异的遗传学基础及其鉴定方法的研究进展．并就其在植物品质改良中的应用现状、存在的问题和应用前景进行了讨论。