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1.
Tropic1808基因的原核表达及其表达产物的生物活性   总被引:8,自引:0,他引:8  
Tropic180 8基因是新近获得的一个鼠源性的cDNA .Tropic180 8基因开放阅读框架片段通过PCR方法从质粒中扩增后 ,重组入表达载体pET 2 1a中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) .用IPTG诱导目的蛋白的表达 ,SDS PAGE并凝胶图象分析确定目的蛋白表达水平占细菌总蛋白的 14%以上 .表达蛋白在N端融合有 16个氨基酸 ,将表达蛋白电转移至PVDF膜 .氨基酸序列分析表明 ,其N端第 17~ 2 5位氨基酸序列与Tropic180 8基因编码序列一致 .利用融合部分含T7·Tag ,通过亲和层析纯化表达蛋白 ,经Westernblot检测为目的蛋白 ,加入到无血清培养的新生SD大鼠背根神经节 (DRG)中 ,观察到表达蛋白对DRG具有促进存活和促进突起生长的作用 .  相似文献   
2.
目的观察Tropic1808基因重组蛋白对坐骨神经损伤后再生的影响。方法SD大鼠16只,分为Tropic1808基因重组蛋白组和生理盐水组,切断左侧坐骨神经,硅胶管套接后两神经断端间距10mm,再生室内注入Tropic 1808基因重组蛋白液(500μg/ml)或生理盐水13μl。术后每4周做一次足迹试验,16周时作神经干动作电位、脊髓前角运动神经元数、腓肠肌纤维截面积、硅胶管中段再生神经等检测。结果Tropic1808基因重组蛋白组SFI的恢复、神经干动作电位、脊髓前角运动神经元数、腓肠肌纤维截面积、硅胶管中段再生神经有髓神经纤维数等结果均明显优于生理盐水组,有统计学意义。电镜观察表明Tropic1808组再生轴突较NS组粗,髓鞘较生理盐水组厚。结论Tropic1808基因重组蛋白有促进大鼠坐骨神经再生的作用。  相似文献   
3.
周围神经43kD蛋白免疫化学研究   总被引:3,自引:1,他引:2  
目的:制图周围神经43kD蛋白单克隆抗体,并检测该蛋白在正常及损伤坐骨神经中的表达,方法:实验用SDS-聚丙烯酰胺胺凝胶电泳系统,从周围神经中分离回收43kD蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术和点膜印迹法检测,获得分泌识别43kD蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以Westernblot方法检测单克隆抗体的特异性,并检测43kD蛋白在正常坐骨神经及损伤坐骨神经远侧端中的表达。结果:经检测获得了识别43kD蛋白的单克隆抗体,Westernblot显示在正常大鼠坐骨神经与损伤后2周的坐骨神经远侧端组织电泳图谱43kD处均出现特异的阳性反应条带,在损伤神经中43kD蛋白阳性反应产物着色较深。结论:43kD蛋白具有独特的免疫化学特性,在正常与损伤坐骨神经中的有表达,在损伤坐骨神经中表达更强。  相似文献   
4.
Tropic1808基因重组蛋白单克隆抗体的制备及鉴定   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的:制备Tropic1808基因重组蛋白的单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法:用Tropic1808基因重组蛋白作为抗原免疫BALB/C小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤(SP2/0)细胞融合,经ELISA筛选和有限稀释法获得分泌单克隆抗体的细胞株,Western Blot等方法对其生物学特性进行鉴定。结果:获得2株识别Tropic1808基因重组蛋白的单克隆抗体的细胞株Ⅱ4B、Ⅲ4C。WesternBlot法显示该抗体特异性地识别Tropic1808基因重组蛋白;ELISA法测定杂交瘤细胞培养上清及体内成瘤后产生的腹水的抗体效价分别为1:80、1:600;杂交瘤细胞染色体数平均为90-100;亚类鉴定单抗的重链为小鼠IgG1,轻链为κ型。结论:成功地制备了Tropic1808基因重组蛋白的单克隆抗体,为进一步研究Tropic1808基因重组蛋白的功能提供了良好的基础。  相似文献   
5.
本研究采用SDS凝胶电泳方法从人脊神经前根中分离出人脊髓前角运动神经元特有的蛋白—190KD。将该蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术,获得了抗190KD蛋白的单克隆抗体。免疫细胞化学检测表明,190KD单抗与脊髓灰质前角神经元、前根及肌支发生阳性反应。实验结果提示,190KD蛋白分布在脊髓运动神经元胞体及脊神经的前根和肌支纤维中。  相似文献   
6.
聚吡咯的生长及与神经组织相容性的研究   总被引:7,自引:0,他引:7  
通过化学氧化和电化学氧化方法得到聚吡咯,用所得到的聚吡咯与神经组织联合培养,通过倒置光学显微镜和扫描电子显微镜观察其生物相容特性.得知聚吡咯与神经组织有较好的生物相容性.  相似文献   
7.
骨骼肌失神经萎缩的细胞分子生物学研究进展   总被引:3,自引:0,他引:3  
周围神经损伤后,骨骼肌因神经的营养作用丧失及自身废用而发生萎缩,出现一系列形态结构、生理生化及代谢功能等方面的改变。而神经损伤后,骨骼肌萎缩的防治一直是周围神经外科的一大难题,当骨骼肌萎缩发展到不可逆阶段将导致神经修复手术的失败。因此,进一步探索不同时段失神经后萎缩肌肉的形态结构、生理、生化变化以及它们之间的相互关系,为寻找检测肌肉萎缩程度的方法和更好的防治具有重要临床意义。  相似文献   
8.
神经诱向生长因子18kD蛋白的纯化   总被引:6,自引:0,他引:6  
提取与纯化诱向生长因子是神经生物化学研究中的一个重要课题.采用自然系统凝胶电泳,分离周围神经损伤过程中产生的具有诱向生长作用的18kD蛋白,再以等电聚焦凝胶电泳与神经组织联合培养,揭示了pI为5.2的18kD蛋白具有诱神经生长的作用.经高效液相色谱仪分析获得较纯的18kD诱向因子.蛋白/多肽测序仪检测,18kD蛋白N端氨基酸序列为:PEPAWSAPAP.  相似文献   
9.
大鼠损伤坐骨神经远侧端CNTF表达的免疫组织化学研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:探讨大鼠坐骨神经损伤后CNTF的表达和变化。方法:采用抗CNTF抗免疫组织化学方法和计算机图像处理系统定量观察大鼠正常坐骨神经与坐骨神经横断损伤后1周、2周、4周神经远侧端CNTF的表达。结果:正常大鼠坐骨神经具有高水平的CNTF免疫阳性反应,坐骨神经损伤后1周、2周、4周远侧端神经中CNTF免疫阳性反应均低于正常坐骨神经,免疫阳性反应强度为正常>伤后1周>伤后2周>伤后4周,呈逐渐减弱趋势。结论:大鼠坐骨神经损伤后远侧端神经中CNTF的表达呈下调性变化。  相似文献   
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