猪肌肉组织Col3a1基因表达的发育性变化及其对肌内胶原特性的影响

以30—90妇体重莱芜猪和40—100kg体重鲁莱黑猪共84头去势公猪为试验对象（每组6头）,采用相对定量RT-PCR方法,以β-actin作为内标,研究肌肉中编码Ⅲ型胶原的Col3al基因表达的发育性变化及其对肌肉中胶原蛋白含量和性质（溶解度）的影响。结果表明：研究的两个品种猪肌肉中Col3al基因表达的发育性变化基本一致,即随体重的增加,肌肉中Col3al mRNA表达呈逐渐增加趋势,但莱芜猪和鲁莱黑猪分别在70妇和80妇体重组表达量略有下降。总体上莱芜猪肌肉组织Col3al mRNA表达丰度显著高于鲁莱黑猪（P〈0．05）。相关分析表明,莱芜猪肌肉组织Col3al mRNA表达的发育性变化与总胶原和不溶性胶原含量呈极显著正相关（P〈0．01）,与胶原溶解度呈极显著负相关（P〈0．01）。鲁莱黑猪肌肉组织Col3al mRNA表达的发育性变化与不溶性胶原和胶原溶解度分别呈显著正相关和负相关妒〈0．05）。研究结果提示：猪肌肉组织中Col3al基因表达具有明显的体重发育和品种特征,其mRNA表达对于肌内胶原的含量和性质有重要影响。     

睾丸注射法制备携带猪PID1基因的转基因兔

目的研究磷酸酪氨酸互作结构域1(PID1)基因与肌内脂肪含量的关系,探究睾丸注射法在转基因动物制备中的可行性。方法将携带猪PID1基因的重组质粒pIRES2-acGFP-PID1与转染试剂共孵育后,对新西兰兔进行了睾丸打点注射试验。对繁殖的F1代个体进行了活体荧光检测、PCR和western blotting检测,以及抽样屠宰进行肌内脂肪含量等检测;将F1代阳性个体互交,繁殖了F2代兔,对其进行了阳性率检测以及肌内脂肪含量检测。结果外源PID1基因和荧光蛋白基因在后代中均成功表达,其中,F1代阳性率为35.88%,F2代阳性率为34.33%;转基因阳性兔与阴性和空白对照兔相比,PID1蛋白表达水平有所增加,肌内脂肪含量有显著提高(P0.05)。结论 PID1基因与肌内脂肪沉积密切相关,同时,进一步证明了睾丸注射法可以用于制备转基因动物,且外源基因可以稳定遗传。     

猪PRLR和RBP4基因多态性与产仔性能的关系

采用PCR-RFLP方法, 对莱芜黑猪、鲁莱黑猪、里岔黑猪、鲁烟白猪、新沂蒙黑猪5个山东地方/培育猪种和大约克夏、长白、杜洛克3个引进猪种共8个猪种323头繁殖母猪进行PRLR和RBP4基因的多态性检测, 并采用最小二乘法分析其对产仔数影响的遗传效应。结果表明: 两个基因位点在8个猪种的测定群体中均存在多态性, 但山东地方/培育猪种与引进猪种间在基因型频率上存在较大差异。PRLR和RBP4基因对产仔数性状有显著影响(P<0.05), AA均为优良基因型。对于PRLR基因, 山东地方/培育猪种内AA基因型母猪的总产仔数和活产仔数比BB基因型母猪平均多产1.03头和0.89头, 引进猪种中AA基因型母猪比BB基因型母猪平均多产分别为1.26头和1.11头。对于RBP4基因, 山东地方/培育猪种内AA基因型母猪的总产仔数和活产仔数比BB基因型母猪平均多产0.59头和0.51头, 引进猪种中AA基因型母猪比BB基因型母猪平均多产分别为0.72头和0.64头     

猪肌肉组织Col3a1基因表达的发育性变化及其对肌内胶原特性的影响(英文)

以30~90kg体重莱芜猪和40~100kg体重鲁莱黒猪共84头去势公猪为试验对象(每组6头),采用相对定量RT-PCR方法,以β-actin作为内标,研究肌肉中编码Ⅲ型胶原的Col3a1基因表达的发育性变化及其对肌肉中胶原蛋白含量和性质(溶解度)的影响。结果表明:研究的两个品种猪肌肉中Col3a1基因表达的发育性变化基本一致,即随体重的增加,肌肉中Col3a1 mRNA表达呈逐渐增加趋势,但莱芜猪和鲁莱黑猪分别在70kg和80kg体重组表达量略有下降。总体上莱芜猪肌肉组织Col3a1 mRNA表达丰度显著高于鲁莱黑猪(P<0.05)。相关分析表明,莱芜猪肌肉组织Col3a1 mRNA表达的发育性变化与总胶原和不溶性胶原含量呈极显著正相关(P<0.01),与胶原溶解度呈极显著负相关(P<0.01)。鲁莱黑猪肌肉组织Col3a1 mRNA表达的发育性变化与不溶性胶原和胶原溶解度分别呈显著正相关和负相关(P<0.05)。研究结果提示:猪肌肉组织中Col3a1基因表达具有明显的体重发育和品种特征,其mRNA表达对于肌内胶原的含量和性质有重要影响。     

2A肽介导猪PID1与CuZnSOD双基因真核共表达载体的构建与细胞表达

构建PID1基因与CuZnSOD基因的真核共表达载体,在PK15细胞中鉴定基因的表达。PCR扩增的PID1与CuZnSOD两基因分别经双酶切后定向插入pIRES2-AcGFP1空载体,构建pIRES2-CuZnSOD-PID1真核双表达载体并进行测序与酶切鉴定。采用脂质体转染法将重组质粒转染至PK15细胞,细胞内荧光显微镜下观察其荧光的表达,RT-PCR、Westernblot技术分别检测PID1基因与CuZnSOD基因mRNA和蛋白表达情况。重组克隆载体插入目的片段序列与PID1基因与CuZnSOD基因序列完全一致。PIRES2-CuZnSOD-PID1真核双表达载体测序、酶切鉴定结果与预期结果一致。荧光显微镜下观察转染后的PK15细胞出现绿色荧光。RT-PCR检测结果显示,转染细胞中PID1基因与CuZnSOD基因表达量明显高于对照组（P〈0.05）。Westernblot检测结果表明pIRES2-CuZnSODPID1真核双表达载体稳定有效表达。成功构建pIRES2-CuZnSOD-PID1真核共表达载体,且双基因在真核细胞独立稳定表达,为转基因猪等育种新材料的制备奠定基础。     

鱼类乳酸脱氢酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳技术研究

本文对用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分离鱼类乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶的技术进行了研究。结果表明：该方法优于淀粉凝胶电泳及琼脂糖凝胶电泳分析鱼类ＬＤＨ同工酶,具有较高的分辩率。     

骨骼形态发生蛋白受体的研究进展

介绍了骨骼形态发生蛋白的结构和生物学功能;骨骼形态发生蛋白受体的种类、结构、信号传递机制、生物学功能;骨骼形态发生蛋白15基因和骨骼形态发生蛋白受体IB基因与繁殖性能的关系。     

含不同比例莱芜猪血缘杂交猪胴体品质及 肉质特性的研究

摘 要： 以莱芜猪、3/4莱芜猪、1/2莱芜猪、1/4莱芜猪和大约克夏猪（共60头）为研究对象,在同样条件下饲养至90kg屠宰,研究比较不同比例莱芜猪血缘对肥育猪胴体品质和肉质特性的影响。结果表明：不同血缘结构的试验猪间在胴体重、胴体长、后腿比例和背膘厚方面存在显著的差异（P<0.05）;眼肌面积和瘦肉率方面则存在极显著的差异（P<0.01）,并且是随莱芜猪血缘含量的减少,其胴体长、后腿比例、眼肌面积和瘦肉率逐渐增高,而其背膘厚逐渐降低。在肉质特性方面,不同血缘结构的试验猪间肌肉的大理石纹、肉色、干物质和粗蛋白含量存在显著的差异（P<0.05）;而肌肉失水率、滴水损失及肌内脂肪含量存在极显著的差异（P<0.01）。在同样体重下,莱芜猪及其杂交猪与大约克夏猪相比,其肌肉具有鲜红的肉色、良好的持水性能和较丰富的肌内脂肪。研究结果提示：为兼顾产肉性能与肉质特性而进行的优质肉猪生产,莱芜猪有其独特的利用价值,其适宜的血缘比例应控制在1/4左右。Abstract: Sixty pigs, including pure Laiwu Black (LL), pure Large Yorkshire (YY), 1/2 Laiwu (Y♂×L♀), 3/4 Laiwu (L♂×YL♀) and 1/4 Laiwu (Y♂×YL♀), were housed in groups with the same diet until 90kg for slaughter. The objectives were to investigate the effects of graded proportions of Laiwu Black genes on carcass and meat quality performance. Results indicated that different consanguinity had significant effect on carcass weight, carcass length (CL), ham percentage (HP) and backfat thickness (BT) (P<0.05), and had highly significant effect on eye muscle area (EMA) and lean percentage (LP) (P<0.01). Furthermore, CL, HP, EMA and LP tended to increased gradually, but BT tended to decreased gradually as Laiwu Black genes decreased. For meat quality properties, different consanguinity had significant effect on meat color, marbling score, dry matter and crude protein content of muscles (P<0.05), and had highly significant effect on water loss, drip loss and intramuscular fat content of muscles (P<0.01). Compared with the muscle of Large Yorkshire, that of Laiwu Black and its crossbred pigs were bright red in meat color, high in water holding capacity and abundant in intramuscular fat. Results implied that to give attention to both quantity and quality, Laiwu Black surely has usable precious value in superior pig production. Commercial crossbred pigs should have about 1/4 of Laiwu Black genes.     

猪miR-331-3p过表达载体的构建及其对细胞增殖的影响

本研究旨在阐明猪miR-331-3p对细胞增殖的影响,探讨其对细胞增殖的作用机制首先构建了miR-331-3p的过表达载体pcDNA 3.1 (+)-miR-331-3p,并将将PK15细胞分为4组,分别为实验组、实验组对照组、抑制剂组和抑制剂对照组。实验组和对照组分别转染pcDNA 3.1(+)-miR-331-3p和pcDNA 3.1(+)。抑制剂组和抑制剂对照组分别转染miR-331-3p Inhibitor和miR-331-3p阴性对照(miR-331-3p NC)。通过在各组添加CCK-8试剂绘制细胞增殖曲线,并使用PI染色检测细胞所处周期比例。同时,利用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测生长抑制蛋白家族成员5 (Inhibitor of growth family member 5,ING5)、细胞周期蛋白依赖性激酶2 (Cyclin dependent kinase 2,CDK2)、细胞周期蛋白依赖性激酶3 (Cyclin dependent kinase 3,CDK3)、细胞周期蛋白依赖性激酶4 (Cyclin dependent kinase 4,CDK4)、细胞周期蛋白B (Cyclin B)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(Cyclindependentkinaseinhibitor1A,CDKN1A)的表达变化。结果表明,实验组miR-331-3p表达量显著升高,细胞增殖曲线表明48 h和72 h时细胞数目均呈现出实验组实验对照组和抑制剂对照组抑制剂组的趋势(P0.05)。与实验对照组相比,实验组处于G0/G1期的细胞比例下调,S期和G2/M细胞的比例上调,抑制剂对照组趋势与之相反;同时,实验组中与促进增殖的基因CDK2、CDK3、CDK4和CyclinB的mRNA表达水平均显著升高,而抑制增殖的基因ING5和CDKN1A均表现出显著下降的趋势。本研究成功构建了miR-331-3p过表达载体,且发现miR-331-3p具有促进猪肾上皮细胞增殖的能力,研究结果为深入研究miR-331-3p在猪生长发育中的作用机制奠定了基础。     

泰山赤鳞鱼同工酶的研究

采用琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳（ＰＡＧＥ）技术研究了泰山赤鳞鱼早期发育阶段（受精后０—１２０ｈ）及成体眼、脑、心、肾、肝、肌６种组织中的ＬＤＨ同工酶分化表达谱式。结果表明：（１）赤鳞鱼在胚胎发育过程中Ｌｄｈ－Ａ基因和－Ｂ基因同时表达,形成５种不同形式的四聚体（Ｂ４、ＡＢ３、Ａ２Ｂ２、Ａ３Ｂ、Ａ４）。与大多数硬骨鱼相比,赤鳞鱼ＬＤＨ同工酶具有独特的早期个体发育谱式：在整个胚胎发育时期,Ａ亚基与Ｂ亚基的活性几乎相等。（２）赤鳞鱼的ＬＤＨ同工酶谱具有明显的组织特异性。Ｌｄｈ－Ｃ基因仅在肝脏组织表达,以向阴极迁移的分子形式（ＬＤＨ－Ｃ４）特异地表达。