一种简便有效的菌落原位杂交法

本方法采用国产定量滤纸代替硝酸纤维素膜进行菌落杂交筛选。省去了真空烤膜和预杂交操作。末端标记的寡核苷酸探针杂交所得结果具有较好的特异性和较强的放射活性。     

抑制剂在mTOR和IIS信号通路及老年相关疾病中的研究进展

衰老是机体各组织、器官功能随年龄增长而发生退行性变化的过程。衰老将降低机体在面对环境胁迫时维持机体动态平衡的能力,从而使机体患病和死亡的风险增加。近年来,抑制剂在抗衰老和治疗老年疾病方面的研究取得了很大进展,通过抑制衰老经典通路中mTOR、IIS信号通路可延长模式动物寿命,通过抑制剂的干预能够延缓或治疗某些老年疾病。本文重点综述了抗衰老抑制剂在衰老主要信号通路中的应用以及在老年相关疾病,如肿瘤、阿兹海默症、糖尿病中的治疗作用,并对下一步研究进行了展望。     

MYH9 基因多态性与肾脏疾病关系研究进展

非肌性肌球蛋白重链9基因,编码非肌性肌球蛋白重链ⅡA,既往研究其与May-Hegglin异常(May-Hegglin anomaly,MHA)、Fechtner综合征(Fechtner syndrome,FTNS)、Sebastian综合征(Sebastian syndrome,SBS)、Epstein综合征(Epstein syndrome,EPS)和Alport样综合征相关。2008年首次用混合连锁不平衡绘图(MALD)方法证实其与非糖尿病终末期肾病及局灶节段性肾小球硬化症相关,后陆续有该基因与高血压肾病、C1q肾病等的相关报道。本文综合国外该基因与肾脏病的相关研究,对其与肾脏病的关系研究进展做一概括,对今后的研究起一定的帮助作用。     

人源核受体hLRH-1 的表达纯化及多克隆抗体制备

目的：制备抗人源核受体hLRH-1 的多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础。方法：构建含有hLRH-1基因全长克隆的 原核表达载体pET507a-hLRH-1 并用IPTG 诱导其在Rosseta2 菌株中表达重组蛋白His-hLRH-1,经亲和层析纯化后按常规方法 免疫新西兰兔制备多克隆抗体,并用Western Blot 对其特异性进行鉴定。结果：原核表达载体pET507a-hLRH-1经测序证实构建 成功,将其转化大肠杆菌Rosseta2菌株后成功诱导表达重组蛋白His-hLRH-1,经纯化免疫新西兰兔后得到抗hLRH-1 多克隆抗 体,Western blot 证实抗体具有高度特异性。结论：成功表达His-hLRH-1 重组蛋白并制备出多克隆抗体,为进一步用于hLRH-1 的 免疫学检测及其功能研究奠定了基础。     

样线法在南方山地生态系统野生动物调查中的试点效果评价

样线法是全国第二次陆生野生动物资源调查中的首选方法,但已有文献表明该方法在南方山地森林中应用时存在诸多问题。为此,我们于2010年4月19–24日在广东车八岭国家级自然保护区对样线法的实际调查效果进行试点,在保护区中心区域划定5 km×10 km的范围,布设6条3 km长的理论样线。实际调查时,使用GPS轨迹记录功能精确标记调查样线和时间。调查时有2条样线未能达到理论长度,平均每条样线耗时5.3±1.4 h,调查速度小于600 m/h。该方法针对常规调查物种的发现概率偏低,调查到的物种总数占保护区常规调查物种总数的比例(0.22)小于调查到的总物种数占保护区总物种数的比例(0.37);在调查强度为0.75%时,可对区域内物种进行有效抽样,但在有效评估一个区域的具体物种数量上可能存在缺陷。为此,我们对比了全国第一次陆生野生动物调查及试点工作的结果,针对南方山地森林生态系统调查提出以下建议:(1)应用GPS轨迹记录功能进行实际样线的设置和记录;(2)调查速度从2–3 km/h适当降低至600 m/h左右;样线长度控制在3–5 km,确保1天内可完成2条样线调查;(3)在现有的财力和人力条件下,样区内各类群调查强度略高于1%是较为适宜的;(4)采用多种辅助手段来提升常规调查物种的发现概率;(5)在地形复杂的位置可考虑使用样方或样点法辅助调查,增加物种发现概率,但不宜限制其调查强度。     

多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗的研究进展

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）是国内外研究者、医患人员非常关心的育龄期妇女常见的内分泌代谢疾病,其主要表现为闭经、月经量减少、肥胖、不孕、体多毛等。多数伴有胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）的发生,胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）是指正常水平的胰岛素促进葡萄糖摄取及利用能力下降,机体各组织、器官代偿性分泌胰岛素以维持机体血糖稳定的一种代谢状态。近年来的研究不断证实PCOS患者2型糖尿病、血脂代谢紊乱及代谢综合征（metabolicsyndrome,MS）等并发症的发病率明显增高。运动能够改善2型糖尿病患者胰岛素抵抗的说法已经得到了共识,其分子机制也逐渐分明。PCOS患者胰岛素抵抗的研究目前仍处于进一步探讨阶段,但是经过近几年的努力已经有了新的进展,若在PCOS胰岛素抵抗患者的治疗过程中给予一定的运动干预,相信一定能够有新的突破。本文就PCOS患者胰岛素抵抗研究的机制、诊断及治疗方法的新进展简单做一综述。     

西藏珠穆朗玛峰国家级自然保护区哺乳动物区系及其垂直变化

珠穆朗玛峰国家级自然保护区保护着以世界最高峰为代表的极高山生态系统,在生态和生物的演化及保护中具有重要地位。受交通、自然环境等条件限制,外界对其哺乳动物区系的了解尚不完整。我们于2010 年9月至2012 年10 月在保护区的调查点内利用样带法、访问调查法、自动感应照相系统监测法和夹日法进行了5 次哺乳动物区系调察,共确认10 目23 科81 种。国家重点保护物种有34 种,占总数的42.0% ;地域特征明显,高地型17 种和喜马拉雅-横断山区型14 种,共占38. 3%。区内可以划分为6 个自然带,哺乳动物物种丰富度表现为随海拔先升高后降低,并以2 500 -3 300 m 的物种数最多,共48 种。区系组成南、北翼差异显著,南翼的76 种哺乳动物中,东洋界41 种,古北界25 种;而北翼的29 种中,东洋界仅2 种,古北界23 种。南翼3 300 m以下东洋界优势明显,而4 000 m 以上古北界则占绝对优势,据此我们认为保护区位于东洋界和古北界分界线上,且分界线在3 300 -4 000 m 之间为宜。     

结核分枝杆菌四价 DNA 疫苗免疫原性 和保护效率研究

对结核杆菌四价 DNA 疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价. 用编码结核分枝杆菌 Ag85B、 MPT64、 MPT70 和 PstS-3 等 4 种抗原蛋白的基因分别构建的单价 DNA 疫苗混合成四价苗免疫小鼠. 3 次免疫后 21 天,四种抗原特异性抗体滴度分别达到 1∶6 400、 1∶51 200、 1∶6 400、 1∶ 6 400. 四种蛋白质均能诱导脾脏细胞产生较高水平的抗原特异性 IFN-γ,浓度分别为 10 582.14 ng/L、 13 635.97 ng/L、 14 213.15 ng/L 和 9 657.35 ng/L. 三次免疫后经静脉强毒攻击,四价苗组小鼠肺脏和脾脏的载菌数分别减少到阴性组的 1/650 和 1/130. 对肺组织的病理形态特征观察表明,空载体免疫的小鼠肺部严重损伤,肺实质干酪样坏死,坏死结节占肺实质的 70%~80%,而四价苗免疫的小鼠,肺组织结构正常,肺泡轮廓清晰. 研究首次证实, Ag85B、 MPT64、 MPT70 和 PstS-3 4 种结核杆菌抗原蛋白编码基因组成的四价 DNA 疫苗,具有很高的免疫应答水平和保护效率.     

固态发酵苦荞制备多肽菌种的筛选

【目的】筛选固态发酵苦荞高产多肽及发酵产物液具有抗菌、抗氧化活性的菌株。【方法】采用米曲霉、酱油曲霉、雅致放射毛霉和少孢根霉分别对苦荞进行固态发酵,以蛋白酶活力、水解度、可溶性肽得率、抑菌率和体外自由基清除率作为筛菌指标。【结果】米曲霉固态发酵苦荞的可溶性肽得率最高达38.83%±1.18%,发酵产物液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率分别为96.62%±1.66%和97.54%±0.54%,同时羟自由基(·OH)清除率和二苯基苦味酰基苯肼自由基(DPPH·)清除率分别为55.65%±1.25%和10.84%±1.03%。对米曲霉发酵2 d发酵产物液的不同分子量分布及活性分析表明,分子量大小对抗菌及抗氧化活性有一定的影响。【结论】米曲霉可作为固态发酵苦荞制备多肽且发酵产物液具有抗菌及抗氧化活性的最佳菌株,并在多肽产量提升及抗菌、抗氧化活性的研究上具有巨大空间。     

Pdr1蛋白N端携带Flag标签的光滑假丝酵母的构建

近年来,光滑假丝酵母已成为第二位引起侵袭性真菌感染的病原体。光滑假丝酵母对唑类药物(临床一线抗真菌药物)的敏感性低且易发生耐药,一直是研究的热点。介导光滑假丝酵母对唑类药物耐药的关键基因是转录因子pdr1,其功能性突变会使Pdr1蛋白功能过度活跃,导致下游唑类药物外排泵基因高表达,从而对唑类药物耐药。本研究利用同源重组技术,构建在基因pdr1的5′端定点插入3×Flag标签的重组菌株2a2和2b2,为后续利用免疫染色质共沉淀技术寻找Pdr1直接调控基因奠定基础。结果表明,3×Flag标签添加到Pdr1蛋白N端可成功表达Flag-Pdr1蛋白;与野生型菌株相比,表达Flag-Pdr1的菌株对氟康唑的耐药性增强。此外,与野生型菌株相比,表达Flag-Pdr1的菌株中cdr1和pup1基因表达水平显著上升,提示在Pdr1蛋白N端加Flag标签能使其功能活跃,表明N端对Pdr1蛋白功能具有重要意义。