含蛋白转导域的SARA/SBD融合蛋白的原核表达、纯化及生物学活性鉴定

目的:SARA/SBD是纤维化形成过程中的负性调节因子。原核表达、纯化含反式激活蛋白(TAT)蛋白转导域(PTD)的TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,并鉴定其生物学活性。方法:将TAT PTD-SARA/SBD基因克隆入带His标签的原核表达载体pET-44a(+)中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白;用人腹膜间皮细胞系(HPMC),通过免疫细胞化学方法检测其穿膜能力,及与TGF-β1信号通路中Smad2因子的共定位情况。结果:用基因工程方法表达和纯化了TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,目的蛋白约占菌体总蛋白的20%左右,且以可溶形式表达,经Ni2+-NTA纯化后,所获蛋白纯度高于95%(HPLC归一法);功能学实验结果显示该蛋白能穿过胞膜,主要定位于胞核,且与Smad2因子具有核内共定位。结论:表达了TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,该蛋白具有生物学活性。     

鹿源BVDV基因E_0蛋白特性分析

以DNAStar5.01软件,对鹿源BVDV基因E0蛋白特性进行了分析。结果表明E0蛋白由227个残基构成,等电点为7.61。E0蛋白中有与地衣类植物核苷酸酶的保守区域相似序列,维持催化活性所必需的氨基酸残基区域在28-40和71-89处,催化活性的氨基酸为His30、His79,且该序列高度保守。E0蛋白氨基酸亲水性与抗原性指数成平行相关,BVDV各毒株间非常相似,亲水性与抗原性指数都较高的区域有8-16,23-29,59-67,70-81,96-109,114-122,127-134,137-143,165-172,186-198和213-221,适合研制亚单位基因工程疫苗。     

鹿源牛病毒性腹泻病毒E0基因的RT—PCR扩增

用RT—PCR方法,成功扩增了鹿源牛病毒性腹泻病毒保护性抗原E0基因。该RT—PCR最佳反应条件分别为退火温度为55℃、25mmol／uL MgCl2（4uL）、10pmol／uL上下游引物（2uL）、5u／uL Taq酶（1uL）。     

梅花鹿源BVDV基因E0克隆与序列分析

对梅花鹿源BVDV基因E0进行了克隆和序列分析。结果表明,梅花鹿源BVDV基因E0的大小为681bp,与报道9株BVDV（VEDEVAC、Bega、C24V、ILLC、NADL、OSLOSS、R1935、SD-1、Y546）和7株猪瘟病毒（ALD、Bres-cia、c、GPE、JL、LN9912、SM）及3株羊边界病毒（BD31、C413、BDVX818）相比,核苷酸序列的同源性依次为98.6%～84.8%、76.1%～74.7%、77.0%～76.7%。梅花鹿源BVDV为Ιb基因亚型。     

锁阳化学成分和药理作用研究进展及质量标志物（Q-Marker）的预测分析

锁阳是一种传统名贵的补益类中药，广泛分布于新疆、甘肃、内蒙古等地，具有补肾阳、益精血等功效。本文总结了从锁阳中分离的102种化学成分。基于锁阳化学成分和药理作用，结合质量标志物（Q-marker）的核心概念，从锁阳的化学成分与亲缘关系、传统功效、传统药性、临床疗效和化学可测成分方面，对锁阳质量标志物进行预测分析，筛选锁阳质量标志物，为锁阳质量控制和质量标准的建立提供一定的科学依据。