双歧杆菌的完整肽聚糖对巨噬细胞AP-1的影响

目的探索信号途径ERK→AP-1在双歧杆菌的完整肽聚糖(WPG)激活巨噬细胞中的作用。方法以WPG刺激SD大鼠腹腔巨噬细胞,采用凝胶电泳迁移分析技术检测巨噬细胞AP-1的活性。结果WPG刺激组巨噬细胞AP-1的活性明显高于对照组(P<0.01);巨噬细胞经ERK抑制剂PD98059预孵后,其AP-1的活性显著低于WPG刺激组(P<0.01)。结论双歧杆菌的WPG可通过ERK→AP-1这一信号途径来活化巨噬细胞。     

双歧杆菌作为基因治疗转移载体的研究进展

双歧杆菌是人和动物肠道内最重要的生理菌,它在机体内发挥生物屏障、防辐射、抗衰老、抗感染、缓解便秘、降低高胆固醇血症、控制内毒素血症、改善乳糖消化不良、营养免疫等功能,同时它还具有抗肿瘤的作用。近年来的最新研究还发现,低氧区的存在是实体瘤的—个特性,而厌氧菌具有趋低氧代谢的特点,双歧杆菌是一类革兰阳性、无运动、无芽胞的专性厌氧菌,它无毒无害,可与宿主和谐相处,所以将肿瘤治疗基因转入双歧杆菌,它可能成为肿瘤基因治疗的一个理想的靶向性转移载体。现就双歧杆菌作为肿瘤基因治疗转移载体的研究作一综述。     

双歧杆菌质粒聚合酶基因对质粒载体稳定性的影响

目的探讨双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因（Bifidobacterium plasmid polymerase,BPP）对人工构建的大肠埃希菌～双歧杆菌穿梭质粒载体（shuttle vector）在长双歧杆菌中稳定性的影响。方法首先电转化质粒pBADs—A和pBADs-BPP至长双歧杆菌,培养鉴定后,接种含质粒pBADs—A和pBADs-BPP的双歧杆菌于AMP^-和AMP^＋的MRS培养液中。厌氧培养后,将样品涂布于AMP^＋的MRS固体培养板上计数菌落数。结果相同条件下质粒pBADs·BPP组菌落数高于质粒pBADs—A组（P〈0．05）。结论BPP可以增加质粒载体的稳定性。     

携带IL-10基因的双歧杆菌对 感染后肠易激综合征的治疗作用

目的探讨转基因双歧杆菌对感染后肠易激综合征(PI-IBS)小鼠的治疗作用。方法 50只成年雄性SD小鼠,随机选取10只作为空白对照组(NC组),其余40只PI-IBS模型小鼠随机分为IBS组(IBS组)、双歧杆菌治疗组(BL组)、空质粒双歧杆菌治疗组(BL-0组)和BL-hIL-10治疗组(每组10只)。NC组和IBS组每天予0.2mL PBS灌胃1次;其余三组每天灌胃溶有经0.2%L-Arb诱导24h后的BL、BL-0、BL-hIL-10菌液(双歧杆菌浓度达5×108个/mL)的PBS液0.2mL,每天1次。所有小鼠干预7d后处死,然后行血液及结肠组织学检验。结果 (1)通过评估小鼠疾病活动指数、小鼠脾脏指数和结肠组织HE染色病理学变化,证明口服BL-hIL-10能显著减轻PI-IBS小鼠的炎症症状;(2)BL-hIL-10能升高IL-10比例并降低IL-12的比例,维持Th平衡。结论口服转基因双歧杆菌可以缓解PI-IBS小鼠的炎症反应,其机制可能是通过调节Th平衡来实现。     

长双歧杆菌分泌型表达载体的构建及Tum-5基因的表达

摘要：目的 构建能在双歧杆菌内稳定存在并高效分泌表达外源基因的长双歧杆菌质粒表达载体。方法 以质粒pBAD/glll为基础,以双歧杆菌内源性阿拉伯糖苷酶的分泌性信号肽取代质粒原有的分泌性信号肽,并将双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因克隆入载体中,构建表达载体pBBADs。将人Tum-5基因克隆入载体中,构建质粒pBBADs-Tum-5,电转化长双歧杆菌NCC2705,L-阿拉伯糖诱导表达后,Western Blot鉴定基因表达。结果 成功的构建了长双歧杆菌分泌型质粒表达载体,Tum-5基因在双歧杆菌内可以表达。结论 构建的表达载体为双歧杆菌用于肿瘤靶向基因治疗奠定了基础。     

双歧杆菌抗肿瘤信号机制的研究

双歧杆菌是人类和某些哺乳动物肠道中最重要的生理菌,也是构成肠道黏膜菌群的主要成分。它是一类革兰阳性、无运动性、无芽胞的专性厌氧的杆菌。无毒无害,可与宿主和谐相处。双歧杆菌在机体内发挥着生物屏障、防辐射、抗感染、缓解便秘、控制内毒索血症、降低高胆固醇血症、抗衰老、改善乳糖消化不良和营养免疫等多种作用．同时它还具有抗肿瘤的作用,对维持人体的健康具有重要的作用。其中双歧杆菌抗肿瘤的研究是近年来肠道微生态学的研究热点。已知双歧杆菌不仅能拮抗多种肿瘤的生长,还能预防多种肿瘤的发生和发展。目前研究发现双歧杆菌的抗肿瘤机制主要有：（1）影响肠道菌群的生化代谢,减少致癌物的产生;（2）调整和激活机体的免疫系统;（3）诱导一氧化氮的产生;（4）抗诱变;（5）诱导细胞凋亡。本文主要就双歧杆菌抗肿瘤的信号机制的研究作一综述。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞膜脂流动性的影响

目的探讨分叉双歧杆菌的完整肽聚糖（WPG）对巨噬细胞膜脂流动性的影响。方法首先分离培养昆明小鼠腹腔巨噬细胞,然后以WPG刺激巨噬细胞,再用细胞膜磷脂荧光探针标记细胞,最后采用激光共聚焦显微镜结合激光漂白后荧光恢复技术检测巨噬细胞的膜脂流动性。结果WPG刺激组反映小鼠腹腔巨噬细胞膜脂流动性的平均荧光恢复率明显高于对照组（P〈0.01）。结论分叉双歧杆菌的完整肽聚糖可提高巨噬细胞膜脂流动性。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞缝隙链接的影响

目的探讨双歧杆菌的完整肽聚糖（WPG）对巨噬细胞缝隙连接介导的细胞间通讯（GJIC）的影响。方法首先分离培养昆明小鼠腹腔巨噬细胞,然后以WPG刺激巨噬细胞,再用脂荧光探针标记细胞,最后采用激光共聚焦显微镜结合激光漂白后荧光恢复技术检测反映GJIC变化的荧光恢复程度。结果和对照组相比,以WPG刺激巨噬细胞后,其GJIC的平均荧光恢复率明显增加（P〈0.01）。结论双歧杆菌的WPG可提高巨噬细胞的缝隙连接介导的细胞间通讯。     

一株双歧杆菌质粒聚合酶基因的PCR扩增和鉴定

目的PCR扩增人双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因。方法用改良型MRS双歧杆菌选择培养基,从人新鲜粪便分离长双歧杆菌,PCR扩增长双歧杆菌质粒聚合酶(Bifidobacterium plasmid polymerase,BPP)基因,对BPP基因检测阳性的PCR产物通过序列分析,进行鉴定。结果人长双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因PCR扩增后,经1.0%琼脂糖凝胶电泳,测得BPP基因的相对分子质量约为1.9 kb。通过BLAST序列比对分析与GenBank中相应基因同源性为96%。结论成功克隆了1株双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因,为构建与双歧杆菌宿主质粒相适应的载体奠定了基础。     

双歧杆菌对溃疡性结肠炎小鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4~＋ CD25~＋ Foxp3~＋调节T细胞表达的影响

目的探讨双歧杆菌治疗溃疡性结肠炎与CD4＋ CD25＋ Foxp3＋调节T细胞的相关可能机制。方法采用DSS制作UC小鼠结肠炎模型,随机分成3组：正常对照（NC）组,模型（MD）组,双歧杆菌治疗（BbT）组。造模7 d后,给予双歧杆菌后续治疗7 d。评估小鼠疾病活动指数（DAI）,结肠行HE染色及病理学评分（HDS）;流式细胞仪检测外周血和肠系膜淋巴细胞中表达CD4＋ CD25＋ Foxp3＋的Treg细胞的百分比率。结果 BbT组的DAI明显低于模型组（P〈0.05）;MD组HDS明显高于正常组（P〈0.05）;BbT组的HDS明显低于模型组（P〈0.05）;模型组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4＋ CD25＋ Foxp3＋Treg细胞占CD4＋T细胞的百分率明显低于正常组（P〈0.05）;BbT组结肠外周血和肠系膜淋巴细胞CD4＋ CD25＋ Foxp3＋Treg细胞占CD4＋T细胞的百分率明显高于模型组（P〈0.05）。结论双歧杆菌可以提高CD4＋ CD25＋ Foxp3＋Treg数量,调节机体和肠道免疫功能,对UC发挥了一定的治疗作用。