Na^＋,K^＋-ATPase亚单位表达的研究进展

以往研究已发现Na^＋,K^＋-ATPase含有α、β和γ亚单位。为了对三种亚单位有一个较为全面的认识,现对亚单位的基本结构、研究简况、生理及病理功能、表达调节等基本情况作一综述。     

双向凝胶电泳在先天性肛门直肠畸形中的初步应用

目的：寻找先天性肛门直肠畸形患儿直肠末端组织中异常表达的蛋白质。方法：通过二维凝胶电泳分离先天性肛门直肠畸形患儿直肠末端组织及正常新生儿直肠末端组织,用Image Master2D Platium6．0软件比较电泳图谱中的异常蛋白质点。结果：筛选出19个表达差异的蛋白质点,其中有12个蛋白质点表达上调,7个蛋白质点表达下调,差异具有统计学意义。结论：先天性肛门直肠畸形可以导致血清中多种蛋白的异常表达。这些差异表达的蛋白可以为先天性肛门直肠畸形的进一步研究提供了依据。     

阿魏酸对糖尿病小鼠心肌病变的影响及其机制

目的：研究阿魏酸对高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素（STZ）诱导的2型糖尿病小鼠心肌病变的影响,探讨其可能的作用机制。方法：雄性ICR小鼠20只,高糖高脂饮食连续6周,STZ （30 mg/kg）腹腔注射连续5d后,隔9d测空腹血糖（FBG）,超过11.1 mmol/L视为糖尿病造模成功。将此20只小鼠随机分为模型组、阿魏酸组（200 mg/kg,i.g.）,每组10只;另取10只正常小鼠为对照组;连续给药8周。末次给药后,测定FBG、称体重、全心重和左心室重,计算心脏质量指数（HMI）和左室质量指数（LVMI）;测定超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量;Masson染色观察左心室纤维增生情况;免疫组化法测定心肌组织转化生长因子-β1（TGF-β1）、Ⅲ型胶原蛋白表达。结果：与模型组小鼠比较,阿魏酸组小鼠HMI、LVMI减小（（P<0.01,P<0.05）,心肌组织SOD活力升高、MDA含量下降（P<0.05）;心肌胶原纤维沉积减少,间质纤维化改善;免疫组化显示心肌组织TGF-β1和Ⅲ型胶原蛋白表达减少（P<0.01,P<0.05）。结论：阿魏酸对糖尿病小鼠心肌病变具有保护作用,可能与抗氧化及抑制TGF-β1蛋白表达,减少Ⅲ型胶原蛋白沉积有关。     

门静脉海绵样变大鼠门静脉氧化应激损伤的研究

目的:考察门静脉海绵样变性(CTPV,Cavernous transformation of portal vein)大鼠体内氧化应激的状态以及氧化应激对门静脉结构的影响。方法:采用门脉部分结扎法复制CTPV大鼠动物模型;通过测定门静脉内血浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力来分析机体抗氧化能力,测定丙二醛(MDA)含量分析机体氧化能力;门静脉HE染色观察门静脉病理变化。结果:Sham组大鼠门静脉造影显示门静脉通畅,无曲张与扩张;门静脉病理学检查显示门静脉管腔无增大、内皮细胞光滑、中膜平滑肌层无增厚、外膜完整。CTPV组大鼠门静脉造影显示门静脉周围侧支循环形成,门静脉病理检查显示多个管腔大小不一、外形不规则血管腔,管腔之间为较狭窄的纤维性间隔,其内可见脂肪细胞、散在的淋巴细胞及肥大细胞等,门静脉管腔增大、血管内膜受损、内皮细胞脱落、中膜平滑肌增厚和血栓形成。与Sham组大鼠比较,CTPV组大鼠SOD、GSH-Px活性降低(93.79+8.87μU/L Vs103.05+8.07μU/L,P<0.05,157.44+26.46U/ml Vs709.09+83.21U/ml,P<0...     

携带IL-10基因的双歧杆菌对 感染后肠易激综合征的治疗作用

目的探讨转基因双歧杆菌对感染后肠易激综合征(PI-IBS)小鼠的治疗作用。方法 50只成年雄性SD小鼠,随机选取10只作为空白对照组(NC组),其余40只PI-IBS模型小鼠随机分为IBS组(IBS组)、双歧杆菌治疗组(BL组)、空质粒双歧杆菌治疗组(BL-0组)和BL-hIL-10治疗组(每组10只)。NC组和IBS组每天予0.2mL PBS灌胃1次;其余三组每天灌胃溶有经0.2%L-Arb诱导24h后的BL、BL-0、BL-hIL-10菌液(双歧杆菌浓度达5×108个/mL)的PBS液0.2mL,每天1次。所有小鼠干预7d后处死,然后行血液及结肠组织学检验。结果 (1)通过评估小鼠疾病活动指数、小鼠脾脏指数和结肠组织HE染色病理学变化,证明口服BL-hIL-10能显著减轻PI-IBS小鼠的炎症症状;(2)BL-hIL-10能升高IL-10比例并降低IL-12的比例,维持Th平衡。结论口服转基因双歧杆菌可以缓解PI-IBS小鼠的炎症反应,其机制可能是通过调节Th平衡来实现。     

长双歧杆菌分泌型表达载体的构建及Tum-5基因的表达

摘要：目的 构建能在双歧杆菌内稳定存在并高效分泌表达外源基因的长双歧杆菌质粒表达载体。方法 以质粒pBAD/glll为基础,以双歧杆菌内源性阿拉伯糖苷酶的分泌性信号肽取代质粒原有的分泌性信号肽,并将双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因克隆入载体中,构建表达载体pBBADs。将人Tum-5基因克隆入载体中,构建质粒pBBADs-Tum-5,电转化长双歧杆菌NCC2705,L-阿拉伯糖诱导表达后,Western Blot鉴定基因表达。结果 成功的构建了长双歧杆菌分泌型质粒表达载体,Tum-5基因在双歧杆菌内可以表达。结论 构建的表达载体为双歧杆菌用于肿瘤靶向基因治疗奠定了基础。     

双歧杆菌对溃疡性结肠炎小鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4~＋ CD25~＋ Foxp3~＋调节T细胞表达的影响

目的探讨双歧杆菌治疗溃疡性结肠炎与CD4＋ CD25＋ Foxp3＋调节T细胞的相关可能机制。方法采用DSS制作UC小鼠结肠炎模型,随机分成3组：正常对照（NC）组,模型（MD）组,双歧杆菌治疗（BbT）组。造模7 d后,给予双歧杆菌后续治疗7 d。评估小鼠疾病活动指数（DAI）,结肠行HE染色及病理学评分（HDS）;流式细胞仪检测外周血和肠系膜淋巴细胞中表达CD4＋ CD25＋ Foxp3＋的Treg细胞的百分比率。结果 BbT组的DAI明显低于模型组（P〈0.05）;MD组HDS明显高于正常组（P〈0.05）;BbT组的HDS明显低于模型组（P〈0.05）;模型组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4＋ CD25＋ Foxp3＋Treg细胞占CD4＋T细胞的百分率明显低于正常组（P〈0.05）;BbT组结肠外周血和肠系膜淋巴细胞CD4＋ CD25＋ Foxp3＋Treg细胞占CD4＋T细胞的百分率明显高于模型组（P〈0.05）。结论双歧杆菌可以提高CD4＋ CD25＋ Foxp3＋Treg数量,调节机体和肠道免疫功能,对UC发挥了一定的治疗作用。     

携带IL-10基因的双歧杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠血浆及结肠组织NO和VEGF-A表达影响

目的观察携带IL-10基因的双歧杆菌对溃疡性结肠炎(UC)小鼠血浆及结肠组织一氧化氮(NO)与血管内皮生长因子A(VEGF-A)表达的影响,进一步探讨携带IL-10基因的双歧杆菌治疗UC的相关机制。方法筛选出能稳定表达具有生物活性hIL-10蛋白的BL-hIL-10菌株。用5%DSS诱导UC小鼠模型,50只小鼠分为正常对照组、UC模型组、BL治疗组、BL0治疗组和BL-hIL-10治疗组,每组10只。计算小鼠DAI、HE染色评估结肠组织病理学变化;ELISA法测小鼠血浆及结肠组织IL-13、VEGF-A和NO的含量。结果 (1)BL-hIL-10可以降低UC小鼠DAI,减轻UC小鼠结肠组织炎症程度。(2)BL-hIL-10能降低UC小鼠血浆和结肠组织NO、VEGF-A和IL-13水平。结论口服BL-hIL-10对UC小鼠的治疗作用可能与抑制NO产生及下调VEGF-A表达有关。     

双歧杆菌感受态细胞的制备和电转化条件的研究

介绍目前常用的双歧杆菌感受态细胞制备方法,并系统研究影响双歧杆菌电转化效率的关键因素。通过研究,菌体在4oo为0.3-0. 5时收集以制备感受态细胞,制备好的感受态细胞应尽早用于电转化;最佳电场强度为12.5 kV/cm;转化后的细胞复苏培养2 h为佳。感受态细胞的转化效率可达103 CFU/μg DNA。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对大鼠腹腔巨噬细胞TNF-α表达的影响

目的探索双歧双歧杆菌的完整肽聚糖(WPG)对大鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的调控作用。方法以WPG刺激大鼠腹腔巨噬细胞;或以NF-κB的抑制剂NAC和ERK抑制剂PD98059分别预先孵育巨噬细胞,再用WPG刺激巨噬细胞,最后用RT-PCR检测巨噬细胞TNF-αmRNA的表达水平。结果 WPG刺激巨噬细胞后,其TNF-αmRNA的表达水平显著高于对照组(P0.01)。但经NAC和PD98059分别预先孵育巨噬细胞后,其TNF-αmRNA的表达水平均明显低于WPG刺激组(P0.01)。结论双歧双歧杆菌的WPG能上调巨噬细胞TNF-αmRNA的表达,这一过程受NF-κB和ERK的调控。