“微生物、免疫与感染性疾病”整合课程师资培养的研究与实践

“微生物、免疫与感染性疾病整合课程”的师资培养是一个重要的问题。本教研室建立了《微生物、免疫与感染性疾病整合课程青年教师培养制度》,通过对青年教师的系统培训,提高青年教师对免疫学相关学科的理解,使其能够胜任“微生物、免疫与感染性疾病整合课程”的教学工作。     

Tim-1分子在约氏疟原虫感染模型中的表达分析

Tim-1分子表达在T细胞和调节性B细胞表面,具有促进Th2应答的作用。为探讨Tim-1分子在抗疟疾免疫应答中的作用,利用致死型约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)感染鼠疟模型研究了Tim-1分子表达与小鼠感染结局和免疫应答模式的关系。结果显示,BALB/c小鼠对P.yoelii易感,在感染后6～7 d全部死亡,感染后第3、5天脾内细胞因子IFN-γmRNA水平明显低于对P.yoelii抵抗的DBA2小鼠,而脾IL-10 mRNA水平显著高于DBA2小鼠。BALB/c小鼠脾内Tim-1+T、B细胞百分比在感染后第3、5天显著升高,而DBA2小鼠感染前后脾内Tim-1+T、B细胞百分比没有显著变化。结果提示,Tim-1分子参与抗P.yoelii免疫应答的调节,可能与易感鼠产生高水平Th2型细胞因子有关。     

TLR7激动剂对P.y 17XNL感染BALB/c小鼠免疫调节效应的影响

宿主抗疟保护性免疫应答的水平和强度与疟疾预后关系密切,当疟原虫侵袭宿主时,TLRs向机体传达病原体入侵信息,激活免疫系统。采用TLR7激动剂处理P.y 17XNL感染的BALB/c小鼠,通过FACS和ELISA检测DC亚群(mDC和pDC)、CD4~+ T细胞亚群(Th1、Th2、Tfh和Treg)和细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-21和IL-10)的水平,明确TLR7通过DC调控宿主应答的免疫机制。结果显示,TLR7激动剂能够促进DC亚群数量的增加,同时也提高Th1和Tfh细胞分化,并显著增加IFN-γ分泌水平。因此,TLR7激动剂通过诱导DC活化,促进Th1型免疫应答降低原虫血症水平,在疟疾感染过程中发挥保护性免疫作用。     

蛋氨酸脑啡肽对疟疾感染鼠一氧化氮产生的研究

探讨蛋氨酸-脑啡肽(M-ENK)对约氏疟原虫感染早期小鼠脾细胞分泌一氧化氮(NO)的免疫调节效应及相关机制。以不同浓度的M-ENK(单独或与LPS合用)与疟原虫感染后第3dBALB/c或DBA/2小鼠的脾细胞共同培养,通过Griess反应和ELISA法分别检测其上清中NO和IFN-γ的水平。脾细胞与浓度为10-10或10-11mol/L的M-ENK培养后,NO的分泌水平明显升高,并且与LPS联合刺激后其NO的产生进一步增强,但IFN-γ水平均未出现有意义的变化。提示浓度为10-10或10-11mol/L的M-ENK能够促进约氏疟原虫感染小鼠脾细胞NO的产生,该作用与IFN-γ活化巨噬细胞路径可能无关,同时M-ENK对LPS的刺激效应也具有强化作用。     

长效和短效NO发生剂体内干预疟原虫红内期重要侵袭分子转录水平的观察

为探讨NO对疟原虫红内期侵袭相关分子MSP-1、AMA-1和RhopH complex转录水平的影响。通过雌性BALB／c小鼠腹腔感染1×10^6致死型约氏疟原虫P．yoelii 17XL,体内给予NO长效（NOC18）和短效（NOC5）发生剂进行干预后,纯化疟原虫成熟裂殖体,提取总RNA,通过Real—time PCR相对定量方法检测MSP-1、AMA—1和RhopH complex的转录水平。结果显示和正常感染组相比,NOC5处理后疟原虫侵入的关键分子MSP—1、AMA-1和RhopH complex的转录水平明显下降;而NOC18处理则未见这一现象。本研究结果提示NO抑制疟原虫侵袭关键分子的转录水平,进而可能下调疟原虫相应蛋白的表达,从而影响疟原虫的侵入过程。     

约氏疟原虫Pys48核酸疫苗传播阻断效应的实验研究

探讨约氏疟原虫（Plasmodium yoelii17XL）Pys48核酸疫苗免疫BALB/c小鼠的特异性抗体产生特点及其效应。将Pys48核酸疫苗肌肉内注射免疫BALB/c小鼠,并以空质粒注射组作为对照,3次免疫后通过P.y17XL攻击小鼠;采用ELISA检测免疫后小鼠血清中特异性抗体水平;通过P.y17XL感染小鼠,取其感染后第3天含有配子体的血液进行体外培养,观察合子、动合子的形成数量。ELISA结果显示疫苗免疫组小鼠血清特异性抗体滴度明显高于对照组;而合子、动合子数量明显低于对照组。提示Pys48核酸疫苗具有良好的免疫原性,免疫小鼠后可以建立起有效的传播阻断效应。     

新型疟疾传播阻断疫苗候选抗原PbPSOP7基因截短片段的克隆及表达特点的研究

传播阻断疫苗(transmission-blocking vaccines,TBVs)可以有效地阻断疟原虫从蚊媒向人的传播,是控制疟疾流行的关键,但目前的TBVs候选抗原十分有限,迫切需要寻找有效的候选抗原。动合子分泌蛋白7(putative secreted ookinete protein 7,PSOP7)在疟原虫有性生殖阶段发挥着至关重要的作用,本研究对伯氏疟原虫抗原PSOP7(Pb PSOP7)进行简要的生物信息学分析,并应用原核表达系统高效表达纯化了截短的重组Pb PSOP7蛋白(r Pb PSOP7),免疫BALB/c小鼠后,获得小鼠高滴度多克隆抗体。经Western Blot方法证实该多克隆抗体可识别疟原虫抗原。间接免疫荧光实验显示,Pb PSOP7主要表达于疟原虫的合子与动合子表面。这些特点符合TBVs的基本设计理念,为确认和证实Pb PSOP7蛋白具有疟疾TBVs候选抗原的潜能奠定基础。     

TLR4激活剂对约氏疟原虫感染早期免疫应答的影响

通过外源性给予LPS,探讨TLR4在疟疾感染早期免疫应答的作用特点及其免疫调节作用。通过Plasmodium yoelii 17XL感染的BALB/c小鼠建立鼠疟模型并在感染前给予LPS,于感染第0、3和5天制备脾细胞悬液,通过流式细胞术检测脾细胞悬液中TLR4+DCs和Tregs百分含量;ELISA方法检测脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-10水平。结果显示,LPS处理能够显著延长宿主生存期,降低原虫血症水平,同时显著提升脾上清中的IFN-γ水平,降低抑炎性细胞因子IL-10水平。在感染早期,LPS处理可诱导Th1型免疫应答的有效建立,明显遏制P.y 17XL红内期疟原虫的感染进程。     

恶性疟原虫SURFIN4.1蛋白氨基端在介导蛋白转运过程中作用机制的研究

明确SURFIN_(4.1)蛋白氨基(N)端在转运过程中的作用。通过恶性疟原虫转染筛选表达SURFIN_(4.1)~(2Myc-N-T-Cyt)重组蛋白的MS822转染株;通过IFA和Western Blot方法对比分析N端Myc标签对SURFIN_(4.1)重组蛋白定位和可溶性影响;通过免疫共沉淀(Co-IP)和质谱分析(LC-MS/MS)方法,明确SURFIN_(4.1)蛋白N端转运过程中的相互作用蛋白。成功筛选并获得表达SURFIN_(4.1)~(2Myc-N-T-Cyt)重组蛋白的恶性疟原虫MS822转染株;SURFIN_(4.1)~(2Myc-N-T-Cyt)与SURFIN_(4.1)~(N-T-Cyt)的定位和可溶性无明显差异。Co-IP和LC-MS/MS结果显示,SURFIN_(4.1)蛋白N端与茂氏点定位蛋白MAHRP1,PTEX复合体成员EXP2,棒状体蛋白RAP3,红细胞膜表面多种原虫蛋白及HSP60相互作用。结果表明,SURFIN_(4.1)蛋白N端在转运过程中不水解,且N端Myc标签不影响蛋白可溶性和定位;SURFIN_(4.1)蛋白N端与多种恶性疟致病性相关蛋白相互作用,提示SURFIN_(4.1)蛋白作为红内期疫苗候选抗原研制靶位的可能性。     

间日疟原虫感染患者T细胞应答相关趋化因子水平的检测

T细胞介导的细胞免疫应答和体液免疫应答对控制疟原虫红内期感染至关重要。免疫细胞的募集和功能调节受到不同趋化因子的调控。进一步寻找招募T细胞的关键性趋化因子将为针对性调控抗疟免疫应答类型提供有效靶点。通过收集并检测中缅边境地区间日疟原虫感染患者血浆中T细胞应答相关的趋化因子水平,并比较CD4~+T细胞和CD8~+T细胞不同表达水平患者的相应趋化因子表达,发现CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL13、CCL13和CCL1在间日疟急性感染期均显著升高,CXCL10和CXCL13水平与患者的年龄呈正相关,特别是CXCL10对CD4~+T细胞的募集调控可能起到关键性作用。