乳酸菌黏附小鼠派伊尔结及影响因子的研究

目的研究乳酸菌结合小鼠派伊尔结（PP）的性质,确定乳酸菌黏附小鼠PP的影响因子。方法测定10株荧光标记的乳酸菌对PP组织切片黏附性,分析细菌表面疏水性和酵母、红细胞凝集性与黏附性的关系。结果凝集酵母、红细胞能力强的乳酸菌,PP黏附性强。除嗜酸乳杆菌（L.acidophilm）外,其他9株乳酸菌的表面疏水性与凝集酵母、红细胞的能力呈显著的负相关性（r=-0．60和r=-0．53,P〈0．05）。L.acidophilm黏附PP的能力最强。L．acidophilm黏附PP能力和红细胞凝集性均可被D（＋）-甘露糖、D（＋）-半乳糖抑制。结论乳酸菌黏附PP的能力受疏水性和表面特异性凝集素的影响。L.acidophilm表面D（＋）-甘露糖、D（＋）-半乳糖特异性凝集素可能参与黏附PP的过程。     

接种固定化粪菌和培养基种类对体外结肠菌群发酵的影响

目的研究三种模拟结肠发酵培养基和粪菌固定化对体外结肠发酵体系菌群构成的影响,为建立高度模拟结肠体外结肠发酵提供参考。方法采集健康女性成人粪便,粪便制备悬液或用结冷胶-黄原胶固定化粪菌接种于模拟结肠发酵反应器,分别用三种培养基按0.07 m L/h稀释率进行连续发酵10 d,用末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)与高通量测序技术分析菌群多样性,并分析发酵液短链脂肪酸含量。结果 T-RFLP分析显示,培养基类型主要影响粪菌固定体系菌群α多样性达到稳定的时间和多样性。β多样性分析显示,第10天时培养基Ⅲ悬液培养和培养基I固定化培养系统的菌群构成与粪便菌群最相近。而培养基Ⅲ在第10天达到较高而稳定的丁酸浓度。结论由于比粪菌固定培养更易操作,培养基Ⅲ悬液培养适于模拟人结肠发酵。     

抗氧化乳酸菌在体外结肠环境清除羟自由基的研究

目的利用鼠肝匀浆经Fe^2＋ -VitC诱导产生丙二醛（MDA）为模型研究29株乳酸菌的抗氧化活性。方法建立体外模拟结肠发酵体系,分析3株具有不同抗氧化能力的乳酸菌（Lactobacillus paracasei Fn032,Laaobacillus rhamnosus GG,Lactobacillus sp．Fn001）在正常结肠和铁过载结肠模型中清除羟自由基效果及对肠球菌增殖的的影响,并检测3株菌螯合亚铁离子能力及其无细胞提取物超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果体外结肠体系中羟自由基含量与肠球菌数量有显著相关性。在正常结肠环境中,3株乳酸菌清除羟自由基能力与其SOD活性一致,但与其抑制肠球菌增殖能力和螯合亚铁离子能力不一致。在高铁结肠环境中,3株乳酸菌清除羟自由基能力与它们抑制肠球菌增殖能力和螯合亚铁离子能力一致,但与SOD活性不一致。结论正常条件下乳酸菌可通过产生抗氧化酶来清除结肠自由基,铁过载条件则可增强具有铁螯和能力乳酸菌的抗氧化活性。     

利用来自多技术平台数据的候选基因挖掘食物抗氧化剂共同影响基因或通路

抗氧化剂通过调节机体基因表达发挥广泛的功能,基于多种技术平台的研究文献中蕴藏大量抗氧化剂可调控的基因.探索这些基因间的关系有助于阐明抗氧剂的共同作用机理,也有助于开发新的生物标记用于抗氧化剂筛选.选择维生素C、维生素E和视黄酸等3种典型抗氧化剂为研究对象,从highwire数据库检索文献提取与它们功能相关主要基因,利用DAVID在线GO分析工具和pathway express分析工具分析其相关的GO生物过程定义及基因通路.结果表明,这3种抗氧化剂共同可调控的基因有14个,每种抗氧化剂显著相关的GO生理过程定义及基因通路具有很多相似性,涉及细胞通讯、免疫、细胞凋亡、细胞周期和多种典型信号传导通路.粘着斑是这3种抗氧化剂共同影响的基因网络,说明这3种抗氧化剂可能通过这一信号通路系统调节细胞周期调控、细胞骨架组装、粘附、迁徙、运动能力、生长调节、生存、血管生成等多方面发挥了重要作用,并以此通路为靶标抑制肿瘤发生、发展及侵袭转移.     

猪骨胶原蛋白肽缓解高脂饮食诱导小鼠肝脏氧化应激的基因芯片分析

本研究探讨猪骨胶原蛋白肽降血脂作用和抑制高脂饮食诱导肝脏抗氧化应激的作用机理。40只小鼠分为5组,分别饲喂6 w正常日粮、高脂日粮、添加1.6%钙的高脂日粮、添加1%胶原蛋白肽的高脂日粮和添加1.6%钙+1%胶原蛋白肽的高脂日粮。研究发现:与正常组相比,高脂日粮小鼠血脂和体重明显升高。1.6%钙处理可抑制体重过度升高,1%胶原蛋白肽和高钙可协同抑制调节血脂,防止体重升高。高脂主要通过影响肝脏生理节律和过氧化物酶体增生物激活受体信号通路引起脂代谢异常,高钙和骨胶原蛋白肽可显著抑制肝脏氧化应激,抑制生理节律紊乱。     

白藜芦醇对高脂膳食肥胖及肥胖抵抗小鼠抗氧化与淋巴细胞亚群免疫功能调节的研究

本文研究了白藜芦醇(R)对高脂膳食肥胖与肥胖抵抗小鼠抗氧化及淋巴细胞亚群免疫功能调节的影响。选取雄性C57BL/6小鼠,随机分成2组:即正常日粮(Control)组、高脂日粮(HFD)组,13周后HFD组小鼠根据体重分为肥胖(DIO)组、肥胖抵抗(DR)组,分别饲喂HFD、HFD+0.06%R 13周,并以正常日粮小鼠作为对照,测定各组小鼠体重,血脂,脾脏抗氧化酶活性及MDA含量,流式细胞仪测定小鼠淋巴细胞亚群比例。结果表明:白藜芦醇可降低DIO与DR小鼠体重、血脂水平,提高抗氧化能力,提高CD3+CD4+/CD3+CD8+细胞比例及CD4+CD25+Fox P3+Tregs细胞含量(P0.05),从而缓解高脂膳食小鼠特别是肥胖小鼠慢性炎性反应。     

米曲霉蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

【目的】获得米曲霉蛋白酶主要成分及其酶学性质。【方法】利用硫酸铵盐析,DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析、Phenyl-Sepharose HP疏水层析和Superdex-G75/200凝胶层析对米曲霉所产蛋白酶系进行分离纯化,SDS-PAGE检测蛋白酶纯度和分子量,采用高效液相凝胶色谱分析两种蛋白酶酶解产物。【结果】从米曲霉所产蛋白酶系中分离纯化获得两种蛋白酶组分P1和P2,分子质量分别约为37 kD和45 kD。以酪蛋白为底物时,P1的Km=8.36 g/L,Vm=12.95μg/(mL·min),最适反应条件为pH 8.0、45°C;P2的Km=4.11 g/L,Vm=4.86μg/(mL·min),最适反应条件为pH 7.0、45°C。两种蛋白酶均对酪蛋白水解活性最高,而对牛血清蛋白的水解活性很低。P1和P2分别酶解大豆分离蛋白后水解产物中肽分子质量分布呈现出一定的差异。【结论】两种蛋白酶的酶学性质存在差异;两者对疏水氨基酸构成的肽键具有选择性,但其作用基团存在特异性。这些研究结果将为米曲霉所产蛋白酶在食品上的应用提供指导。     

乳酸杆菌肽聚糖对小鼠机体免疫功能的调节作用

以乳酸杆菌肽聚糖腹腔注射方式刺激小鼠,采用Affymetrix MOE430A基因芯片研究了乳酸杆菌肽聚糖对小鼠机体免疫细胞基因表达的影响,结果发现,乳酸杆菌肽聚糖可以刺激免疫调节细胞因子相关基因的表达,释放细胞免疫因子,其可能是通过激活TLR-NF-κB相关信号通路而实现的。     

乳酸菌抑制葡聚糖硫酸钠诱导的结肠黏膜氧化应激损伤的研究

目的研究乳酸菌抗氧化活性与缓解葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠炎的关系。方法评价5株乳酸菌体外抑制大鼠肝细胞脂质过氧化活性,用DSS诱导小鼠结肠炎模型研究抗氧化性不同的菌株体内抗氧化活性;小鼠分成7组,分别是Control组、DSS组、L.plantarum Fn008+DSS组、L.casei Fn012+DSS组、L.acidophilus Fn022+DSS组、L.sakei Fn034+DSS组和L.acidophilus Fn037+DSS组。结果体外实验表明,Fn022和Fn034的丙二醛(MDA)抑制率高于LGG,但差异无统计学意义,Fn008和Fn037的MDA抑制率显著低于LGG,Fn012的MDA抑制率最低。体内实验表明,DSS可导致小鼠氧化应激,升高结肠内容物的自由基水平,降低结肠抗氧化能力;Fn008和Fn037预处理能显著降低DSS诱导结肠内容物的自由基水平,Fn008能显著降低结肠组织的髓过氧化物酶(MPO)水平,提高结肠抗氧化能力,Fn022和Fn034的干预能力居中,Fn012的干预能力最弱。相关性分析表明乳酸菌体外MDA清除率与体内MPO有负相关趋势(r=-0.862,P=0.06)。结论乳酸菌抗氧化活性与其在肠道抑制炎性细胞激活的作用有关,本实验中Fn008和Fn037具有显著的体内抗氧化作用。     

食物氧化蛋白对小鼠肠道菌群及氧化还原状态的影响

目的研究摄食不同方式氧化酪蛋白对小鼠肠道菌群和氧化还原状态的影响。方法分别以H2O2/Cu2+、HClO处理酪蛋白,丙二醛(MDA)处理酪蛋白、大豆蛋白。雄性KM小鼠分为6组:酪蛋白组,H2O2-Cu2+氧化酪蛋白组,HClO氧化酪蛋白组,MDA氧化酪蛋白组,大豆蛋白组和MDA氧化大豆蛋白组,饲喂10周。结果酪蛋白和大豆蛋白经氧化处理后羰基含量显著上升(P0.05),体外消化率下降。饲喂氧化蛋白饲粮的小鼠结肠内容物乳杆菌数量均显著低于对照组(P0.05);HClO和MDA氧化酪蛋白组大肠埃希菌、肠球菌数量显著高于对照组(P0.05),MDA氧化大豆蛋白组大肠埃希菌数量显著高于对照组(P0.05)。氧化蛋白处理引起小鼠结肠组织MDA上升,其中MDA氧化蛋白处理达显著水平(P0.05);结肠过氧化氢酶(CAT)活力上升,其中H2O2/Cu2+和MDA氧化蛋白组达显著水平(P0.05);H2O2/Cu2+氧化酪蛋白处理引起结肠GSH-Px显著升高(P0.05);氧化蛋白引起结肠总抗氧化能力(T-AOC)下降,其中H2O2/Cu2+、HClO氧化酪蛋白和MDA氧化大豆蛋白处理达显著水平(P0.05)。蛋白质体外消化率与结肠肠球菌呈负相关(R=-0.81,P=0.051);蛋白羰基含量与结肠乳杆菌呈显著负相关(R=-0.94,P0.01);大肠埃希菌(R=0.93,P0.01)和肠球菌(R=0.85,P0.05)分别与蛋白羰基含量呈正相关。结论氧化后蛋白消化率降低、羰基含量增高,导致肠道乳杆菌减少,大肠埃希菌和肠球菌上升;结肠黏膜脂质过氧化,氧化损伤程度与蛋白氧化处理方式有关。