| 米曲霉蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究 |
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| 引用本文： | 马俊阳,诸葛斌,方慧英,宗红,孙进,龚星慧,诸葛健,楼笑笑,冯倩.米曲霉蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究[J].微生物学通报,2014,41(1):83-89. |
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| 作者姓名： | 马俊阳 诸葛斌 方慧英 宗红 孙进 龚星慧 诸葛健 楼笑笑 冯倩 |
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| 作者单位： | 1. 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室 工业微生物研究中心 江苏 无锡 214122;1. 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室 工业微生物研究中心 江苏 无锡 214122;1. 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室 工业微生物研究中心 江苏 无锡 214122;1. 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室 工业微生物研究中心 江苏 无锡 214122;2. 浙江正味食品有限公司 浙江省调味食品制造工程技术研究中心 浙江 义乌 322000;2. 浙江正味食品有限公司 浙江省调味食品制造工程技术研究中心 浙江 义乌 322000;1. 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室 工业微生物研究中心 江苏 无锡 214122;2. 浙江正味食品有限公司 浙江省调味食品制造工程技术研究中心 浙江 义乌 322000;2. 浙江正味食品有限公司 浙江省调味食品制造工程技术研究中心 浙江 义乌 322000 |
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| 基金项目： | 浙江省重大科技专项计划项目(No. 2012C12004-3) |
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| 摘 要： | 【目的】获得米曲霉蛋白酶主要成分及其酶学性质。【方法】利用硫酸铵盐析,DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析、Phenyl-Sepharose HP疏水层析和Superdex-G75/200凝胶层析对米曲霉所产蛋白酶系进行分离纯化,SDS-PAGE检测蛋白酶纯度和分子量,采用高效液相凝胶色谱分析两种蛋白酶酶解产物。【结果】从米曲霉所产蛋白酶系中分离纯化获得两种蛋白酶组分P1和P2,分子质量分别约为37 kD和45 kD。以酪蛋白为底物时,P1的Km=8.36 g/L,Vm=12.95μg/(mL·min),最适反应条件为pH 8.0、45°C;P2的Km=4.11 g/L,Vm=4.86μg/(mL·min),最适反应条件为pH 7.0、45°C。两种蛋白酶均对酪蛋白水解活性最高,而对牛血清蛋白的水解活性很低。P1和P2分别酶解大豆分离蛋白后水解产物中肽分子质量分布呈现出一定的差异。【结论】两种蛋白酶的酶学性质存在差异;两者对疏水氨基酸构成的肽键具有选择性,但其作用基团存在特异性。这些研究结果将为米曲霉所产蛋白酶在食品上的应用提供指导。
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| 关 键 词： | 米曲霉，蛋白酶，分离纯化，酶学性质 |
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