乳酸菌黏附小鼠派伊尔结及影响因子的研究

目的研究乳酸菌结合小鼠派伊尔结（PP）的性质，确定乳酸菌黏附小鼠PP的影响因子。方法测定10株荧光标记的乳酸菌对PP组织切片黏附性，分析细菌表面疏水性和酵母、红细胞凝集性与黏附性的关系。结果凝集酵母、红细胞能力强的乳酸菌，PP黏附性强。除嗜酸乳杆菌（L.acidophilm）外，其他9株乳酸菌的表面疏水性与凝集酵母、红细胞的能力呈显著的负相关性（r=-0．60和r=-0．53，P〈0．05）。L.acidophilm黏附PP的能力最强。L．acidophilm黏附PP能力和红细胞凝集性均可被D（＋）-甘露糖、D（＋）-半乳糖抑制。结论乳酸菌黏附PP的能力受疏水性和表面特异性凝集素的影响。L.acidophilm表面D（＋）-甘露糖、D（＋）-半乳糖特异性凝集素可能参与黏附PP的过程。     

天然药物对非酒精性脂肪肝的作用

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)是世界上最常见的慢性肝病,是由环境、遗传背景以及代谢应激之间相互作用产生的多因素疾病。所涉及到的机制复杂,目前已经证实的治疗NAFLD最有效的方法是,饮食干预和锻炼以减轻体重,尚未有专门用于治疗NAFLD的药物。大量的体内外实验证实,多种天然药物可以通过各种机制来干预NAFLD,且疗效显著。本文主要总结了近年来常用天然药物防治NAFLD的研究进展,为进一步的新药研发提供信息。     

艾比湖湿地芦苇根际土壤氨氧化古菌的多样性和群落结构

【目的】旨在揭示耐盐植物芦苇根际与非根际土壤AOA群落结构间的差异,为深入研究盐生植物根际土壤微生物与耐盐性之间的关系提供理论基础。【方法】应用高通量测序技术以氨单加氧酶基因(amoA)为分子标记,对新疆艾比湖湿地荒漠生态系统不同季节(春、夏、秋)芦苇根际与非根际土壤氨氧化古菌(AOA)的多样性和群落结构进行研究。【结果】结果表明,不同季节芦苇根际土壤AOA多样性和丰富度存在差异,相比非根际土壤,夏季和秋季芦苇根际土壤AOA多样性较低丰富度较高,春季多样性较高丰富度较低。芦苇根际土壤中AOA的多样性为春季夏季秋季。AOA群落组成分析表明,土壤样品中AOA群落主要集中在泉古菌门(Crenarchaeota)和奇古菌门(Thaumarchaeota),其中泉古菌门为主要优势菌门。RDA分析表明,含水量(SM)、有机质(SOM)、总氮(TN)和pH是影响芦苇根际土壤AOA群落多样性和丰富度的主要环境因子。【结论】不同季节芦苇根际土壤AOA多样性及丰富度存在差异,相比非根际土壤,芦苇根际土壤AOA更丰富。     

圣路易斯脑炎病毒NS2B-NS3蛋白酶的原核表达及其抑制剂的筛选

【目的】圣路易斯脑炎病毒(St. Louis encephalitis virus,SLEV)属于黄病毒科,是一种单股正链RNA病毒。黄病毒编码的非结构蛋白NS3在病毒复制以及多聚蛋白加工过程中起着重要作用,NS2B是其发挥作用的重要辅助因子。因此,NS2B-NS3蛋白酶复合物是抗病毒药物的重要靶标。本研究旨在构建SLEV NS2B-NS3蛋白酶的原核表达系统并建立其抑制剂的高通量筛选方法,从而发现其小分子抑制剂。【方法】通过PCR扩增SLEVNS2B-NS3蛋白的编码区,构建原核表达质粒;在大肠杆菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-thiogalactoside)诱导得到可溶性的NS2B-NS3蛋白,并用镍亲和层析方法进行纯化;基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer)技术检测NS2B-NS3蛋白酶活性,建立其抑制剂的高通量筛选平台。【结果】SLEV NS2B-NS3蛋白酶纯化程度高达95%以上,基于酶活测定的抑制剂筛选平台准确可行。对700多个上市药物进行筛选后,发现原花青素对SLEVNS2B-NS3蛋白酶具有明显的抑制活性。【结论】本研究为SLEVNS2B-NS3蛋白酶抑制剂提供了一种操作方便、高通量的筛选方法,并首次发现了原花青素具有抑制SLEV NS2B-NS3蛋白酶活性的功能,可以作为治疗SLEV感染的潜在靶向药物。     

乳鼠成骨细胞体外培养

目的建立乳鼠成骨细胞体外培养方法,探讨该方法的可行性和应用价值。方法用出生1~3 d乳鼠颅骨,采用多次胶原酶消化法进行细胞体外培养。倒置显微镜观察细胞形态,对其碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化能力进行鉴定,并测定细胞生长曲线。结果原代培养24 h后,大量细胞贴壁生长,细胞呈圆形,48 h后,贴壁细胞呈长梭形、三角形或不规则多边形,并且贴壁细胞伸出2~3个突起,胞质透亮、饱满,7 d后细胞铺满整个平皿底面。经鉴定,培养细胞具有体内成骨细胞的生物学特性。细胞接种后第1与第2个24 h为细胞的潜伏适应期,第3与第7个24 h生长曲线基本为线性曲线,是细胞的对数生长期。结论采用胶原酶消化法分离培养成骨细胞的方法切实可行。     

钠离子通道β4亚基糖基化的初步研究

异常表达的糖蛋白与PD等多种神经退行性疾病有关。糖蛋白组学研究发现,电压门控钠离子通道β4亚基在PD病人脑组织中表达明显增加。为了深入探索β4亚基及其糖链在帕金森发生发展中的作用,采用PD转基因鼠对其表达进行验证,对其潜在的糖基化位点进行定点突变,构建重组表达质粒。结果发现,在新生PD转基因鼠和野生成鼠脑组织中有~38kDa蛋白条带表达,而在新生野生鼠脑组织中不表达;用PNGase F酶处理去除糖链后,~38kDa蛋白条带变成迁移速递更快的较小分子量条带,说明β4亚基是高度糖基化的蛋白,并且其糖基化与生长发育有关。将突变重组质粒转入HEK-293细胞和小鼠神经瘤细胞Neuro2A中表达,结果发现突变型质粒分子量明显低于野生型。为研究β4亚基及其糖链的功能提供了一定的实验数据并打下了基础。     

巢湖表层水体中有机氯农药的分布及其组成

以固相萃取-气相色谱法/电子捕获检测器(SPE-GC/ECD)作为检测手段,对巢湖表层水体中有机氯农药(OCPs)的分布及组成特征进行分析.结果表明:研究区13个采样点中共检出包括六六六(HCHs)、滴滴涕(DDTs)、β-硫丹(β-Endosulfan)、艾氏剂(Aldrin)、六氯苯(hexachlorobenzene)和七氯(Heptachlor)在内的16种有机氯农药,其总含量范围为0.54～64.01ng.L-1;16种有机氯农药中以HCHs和DDTs为主,其平均质量浓度分别为5.56ng.L-1和16.57ng.L-1,约占其总量的84.75%;研究区的有机氯农药污染除了主要源于历史上农田中有机氯农药的残留外,近期可能还有新的农药污染源进入水环境;研究区所检出的各类有机氯农药均未超过国家地表水环境质量标准,巢湖表层水体中有机氯农药含量及潜在风险均属于中等偏低水平.     

美国生物技术大会（BIO2008）中国展团备受关注

在刚刚于美国圣地亚哥结束的2008年美国生物技术大会共吸引来自70个不同国家和地区及美国48个州20108名产业领袖的参与，以共同研讨并分享技术最新进展及生物技术产业发展面临的问题．大会共4天包括200多场会议。此次大会以其集中了历史上最多的参展单位为特色，共计有2100家公司及80个展团参加BIO大会的展览会。     

墨吉明对虾(Fenneropenaeus merguiensis)RACK基因的克隆与表达分析

RACK基因作为鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β亚基中的部分基因,主要编码一种神经肽信号分子,在膜结合受体和细胞内效应器之间起信号传递作用。为了研究RACK基因在墨吉明对虾各个组织和发育周期中的表达,本实验通过基因克隆技术获得墨吉明对虾RACK基因ORF序列,共957 bp,编码318个氨基酸,并通过荧光定量PCR技术检测RACK基因在墨吉明对虾不同组织的表达量变化。数据分析表明,RACK基因在墨吉明对虾各个部位都有表达,其中在眼柄表达量最高,在胸节神经和血液中表达量次之,在肌肉表达量最低(p0.05)。RACK基因在墨吉明对虾整个生长周期中都有表达,且存在显著差异,总体来看糠虾时期的RACK基因表达量明显高于无节幼体、溞状幼体和仔虾时期(p0.05)。本研究为更加深入研究RACK基因的功能与表达分析提供理论基础。     

江苏连云港与盐城海域口虾蛄种群的遗传多样性

为了解口虾蛄野生种群的遗传多样性水平,采集了4个不同地理种群的口虾蛄44个样品,利用线粒体细胞色素c氧化酶Ⅰ亚基序列为分子标记,初步分析了口虾蛄野生群体的遗传多样性及遗传结构。研究共获得627bp的COⅠ序列,检测到27个单倍型,30个变异位点。在4个种群中,燕尾港与射阳种群、赣榆与连岛镇种群、赣榆与燕尾港种群之间存在明显的遗传分化,但在贝叶斯系统树中未形成明显的地理分化格局;4个野生种群都有高的单倍型多样性水平和相对低的核苷酸多样性水平;歧点分布及中性检验均支持口虾蛄野生种群在历史上发生快速扩张事件。