用荧光指示剂Fura－2测定正常和电刺激后蛙肌胞浆自由Ca~（2＋）浓度

蛙半腱肌肌束负载Ｆｕｒａ－２／ＡＭ后,可用荧光信号Ｆ３４０、３８０ｎｍ波长比值（Ｒ３４０／３８０）反映胞浆内游离Ｃａ２＋浓度（〔Ｃａ２＋〕）。利用这一技术,我们发现长时间电刺激后的骨骼肌〔Ｃａ２＋〕,高于未刺激肌,Ｒ３４０／３８０分别为１．４９±０．５４（ｎ＝１０）和１．０２±０．２６（ｎ＝１０）。加入Ｃａ２＋载体伊屋诺霉素（ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ,１μｍｏｌ／Ｌ）后,正常肌与电刺激肌〔Ｃａ２＋〕,均上升,但刺激肌上升幅度低,持续时间短。说明电刺激至力竭后,细胞内有较多的Ｃａ２＋负载。增加细胞外Ｃａ２＋浓度至１５ｍｍｏｌ／Ｌ,〔Ｃａ２＋〕ｉ下降。而给予Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换阻断剂奎尼丁（１０４ｍｏｌ／Ｌ）后,正常肌〔Ｃａ２＋〕ｉ上升,刺激肌〔Ｃａ２＋〕ｉ下降。结果提示：Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换是正常骨胳肌外排Ｃａ２＋的途径之一;而长时间肌肉活动则可能使细胞膜Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换方式改变,从而导致力竭肌〔Ｃａ２＋〕ｉ上升。     

人骨骼肌α辅肌动蛋白（α－actinin）的提取及其抗血清的制备和鉴定

本文提取人骨骼肌α辅肌动蛋白（α－ａｃｔｉｎｉｎ）是综合了文献报导有关提取兔肌α－ａｃｔｉｎｉｎ的和提取鸡胗α－ａｃｔｉｎｉｎ的方法,稍加修改而确定的。用Ｈａｓｓｅｌｂａｃｈ－Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ缓冲液提取骨骼肌中的肌球蛋白后,将残余物经硼酸－缓冲液提取、匀浆及高速离心去掉肌动蛋白和肌原纤维的其它成份,上清加硫酸铵至３０％,３５％饱合度所得的沉淀用２２０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－乙酸溶解、透析、离心后经ＤＥ－５２柱层析可得电泳纯。α－ａｃｔｉｎｉｎ。将人骨骼肌α－ａｃｔｉｎｉｎ纯化制品免疫了三只大耳白纯种家兔,两个多月后,三只兔子都产生免抗人骨骼肌α－ａｃｔｉｎｉｎ的特异抗血清,用双向免疫扩散法和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）测定,产生的抗体效价较高,用双扩散法测定效价为１：３２,用ＥＬＩＳＡ测定,用比率法判断结果,效价最高者为１：１００,０００左右,经免疫电镜观察结果证实,上述抗血清可以满足进一步实验要求。     

骨骼肌M蛋白抗血清的制备及正常人骨骼肌M蛋白的免疫电镜定位

分别制备了兔抗人Ｍ蛋白（Ｂ成分）抗血清和兔抗人Ｃ成分［１］抗血清。用蛋白Ａ－胶体金作标记物,对经ＬｏｗｉｃｒｙｌＫ４Ｍ低温包埋的人骨骼肌超薄切片中Ｍ蛋白和分子量１４００００的Ｃ成分进行免疫电镜定位。发现Ｍ蛋白分布于整个Ｍ线,而Ｃ成分虽然也集中于Ｍ线以内,但主要分布于Ｍ线内的边缘区域。     

人骨骼肌M蛋白的提取与纯化

依据Ｔｒｉｎｉｃｋ－Ｅｐｐｅｎｂｅｒｇｅｒ对鸡骨骼肌Ｍ蛋白的提取方法,由人骨骼肌中得到的Ｍ蛋白粗提物除含分子量为１６５０００的Ｍ蛋白外,还含有分子量为１８５０００和１４００００（Ｃ成分）的两组分。由于在粗提物中未发现分子量为９００００的磷酸化酶,我们将最终纯化步骤中的亲和层析改为制备电泳,同样获得了纯化的Ｍ蛋白。     

人骨骼肌α辅肌动蛋白（α—actinin）的提取及其抗血清的制备和鉴定

本文提取人骨骼肌α辅肌动蛋白（α－ａｃｔｉｎｉｎ）是综合了文献报导有关提取兔肌α－ａｃｔｉｎｉｎ的和提取鸡胗α－ａｃｔｉｎｉｎ的方法,稍加修改而确定的。用Ｈａｓｓｅｌｂａｃｈ－Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ缓解液提取骨骼肌中的肌球蛋白后,将残余物经硼酸－缓冲液提取、匀浆及高速离心去掉肌动蛋白和肌原纤维的其它成份,上清加硫酸铵至３０％,３５％饱合度所得的沉淀用２２０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－乙酸溶解、透析、离心后     

长时间电刺激引起肌肉结构损伤过程中细胞内各种元素的分布

利用快速冷冻固定和电子微探针技术,对电刺激诱发爪蟾延迟性肌肉损伤过程中肌浆网与胞浆钙、镁、钠、钾进行定量分析。电刺激后３ｈ,胞浆钙增加３．０ｍｍｏｌ／ｋｇｄｗ,肌浆网钙下降７．５３ｍｍｏｌ／ｋｇｄｗ。至刺激后６ｈ,胞浆钙增加达５．３３ｍｍｏｌ／ｋｇｄｗ,肌浆网摄取钙加强。在延迟性结构变化发展中,细胞内钠、钾也持续上升,而镁则逐渐下降。结果表明,延迟性肌肉结构异常与胞浆钙增高具有一致性。胞浆钙上升可能由于细胞内钠增加,钠－钙交换受抑及肌膜受损,外钙内流增加。肌浆网钙摄取下降则是运动后初期胞浆钙增高的另一途径。损伤肌中胞浆钾浓度有增高和下降两种变化,其意义与机制有待进一步探讨。     

人骨骼肌M蛋白的提取与纯化

依据Ｔｒｉｎｉｃｋ－Ｅｐｐｅｎｂｅｒｇｅｒ对鸡骨骼肌Ｍ蛋白的提取方法,由人骨骼肌中得到的Ｍ蛋白粗提物除含分子量为１６５０００的Ｍ蛋白外,还含有分子量为１８５０００和１４００００（Ｃ成分）的两组分。由于在粗提物中未发现分子量为９００００的磷酸化酶,我们将最终纯化步骤中的亲和层析改为制备电泳,同样获得了纯化的Ｍ蛋白。     

肌肉损伤和肌肉生理

本回顾我国运动生理学的发展进程,肌肉生理的现状及其损伤临床治疗的一些问题。     

骨骼肌M蛋抗血清的制备及正常人骨骼肌M蛋白的免疫电镜定位

分别制备了兔抗人Ｍ蛋白（Ｂ成分）抗血清和兔抗人Ｃ成分＾［１］抗血清。用蛋白Ａ－胶体金作标记物，对经Ｌｏｗｉｃｒｙ１Ｋ４Ｍ低温包埋的人骨骼肌超薄切片中Ｍ蛋白和分子量１４００００的Ｃ成分进行免疫电镜定位。发现Ｍ蛋白分布于整个Ｍ线，而Ｃ成分虽然也集中于Ｍ线以内，但主要分布于Ｍ线内的边缘区域。