重楼属植物甾体皂甙的高效液相色谱分析

应用高效液相层析技术,对重楼属十八个种植物的甾体皂甙进行了定性、定量分析。植物用甲醇提取,抽出物经DIAION柱,以90％甲醇洗出总甙。在HPLC上,用ODS柱先将总甙以用醇:水(9:1)洗脱分为三馏段,每馏再在ODS柱或Rp-8柱上以甲醇:水(8:2;7:3.5)洗脱,使各个皂甙成分完全分离。被分离的每个色谱峰与已知重楼皂甙的保留时间进行比较并配合HPLC的加入法,TLC分析及用HPLC制备少量样品做MS测定来加以定性鉴定。定量采用内标及校正曲线法。     

重楼属两种植物种子及其附属结构的发育

重楼属两种植物(五指莲Paris axialis和滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis)种子发育的过程基本一致。双受精发生于授粉后10—15天。胚乳为沼生目型。种子发育延续的时间约为150—170天。胚胎发育终止于球形或稍有分化的阶段。种子具二层种皮。 二种重楼种子成熟时的外部形态显著不同。五指莲Paris axialis的种子呈浅棕黄色,长椭圆形,部分为绿白色海绵质假种皮所包裹。假种皮由珠柄发育而来,呈楔形。滇重楼Parispolyphylla var.yunnanensis的种子鲜红色,不规则圆形,外种皮肉质多浆。无假种皮。珠柄橙黄色,短而纤细。     

重楼属植物的化学数量分类学研究

重楼属植物是重要的药用植物。从1938年起,国内外科学家对它们的化学成分和药用价值已经进行了40多年的研究。我所从重楼属植物中分离鉴定了16个不同的甾体皂甙。本文利用高压液相色谱对重楼属植物甾体皂甙的定性和定量分析结果,根据L. B. Thien, W. H. Heimermann, R. T. Holman植物化学成分间的数量关系计算公式,对14种重楼的三组甾体皂甙含量进行计算,得出这14种重楼化学成分之间的数量关系,并画出数量关系图。     

重楼属植物的细胞地理学研究

重楼属Paris有19种,分布于欧亚大陆。根据对本属所有种的染色体研究,重楼属染色体基数为5,核型的基本结构有两种形式：热带核型K2n＝2x=10=6m十4t和温带核型K2n=2x=10＝6m+4st或 6m+2st十2t。 热带核型的种(13种)分布在亚洲大陆的热带和亚热带;温带核型的种(6种)则出现在欧亚大陆的温带地域。重楼属的多倍体种的核型属温带核型,为本属的边陲种。四倍体种四叶重楼Paris quadrifolia分布在本属分布区的西端(欧洲);日本重楼P.japonica是八倍体种,局限在属分布区的东端(日本)。全部热带核型的种都是二倍体种。其中海南重楼P.dunniana等较原始种类都集中在华南和中南半岛北部。作者认为,亚洲大陆北纬18°至北回归线的热带地域是重楼属的起源地,云贵高原至邛崃山地域拥有14种重楼和9种核型结构式(全属有13种核型结构式),是重楼属的多样化中心,即现代分布中心。     

重楼属植物的免疫血清学研究

以海南重楼(Paris dunniana),花叶重楼(P.marmorata),多叶重楼(P.polyphylla),凌云重楼(P.cronquistii),五指莲(P.axialis),滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)等六种重楼属植物的根茎为材料,提取分离其球蛋白组份作为抗原,免疫家兔得到相应的抗血清。通过免疫双扩散,聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫电泳、免疫吸收试验以及酶标免疫等方法,研究了重楼属上述六个种和变种的血清学行为以及他们之间的相互关系。在此基础上,用不加权算术平均对群法(UPGMA)经成聚运算,得到基于平均吸收相似系数(Sabs.mean.)和Jaccard's结合系数的两种表相图,这两种表相图的结果是一致的。花叶重楼与多叶重楼有较大的血清反应相似性,五指莲与滇重楼有最大的血清反应相似性。多型种P.polyphylla在形态上的较大变异与血清反应分析的结果是一致的,而且血清反应相似性分析支持了从形态分析得出的假设:Paris dunniana在重楼属的系统发生中是一比较原始的种。     

重楼皂苷VII对SW-480 细胞凋亡和周期的影响及机制研究

目的：探讨重楼皂苷VII (Paris saponin VII, PSVII) 对人结肠癌SW480 细胞凋亡和周期的影响及其机制。方法：采用Cell Counting Kit-8（CCk-8）试剂盒方法观察PSVII 对SW-480 细胞增殖的影响;流失细胞术研究PSVII对SW480细胞凋亡和周期的 作用;培养SW-480 细胞并给予1.0 umol/L、2.0 umol/L 和4.0 umol/L PSVII 24 h后,采用Western blot 法检测凋亡相关蛋白 Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和Bcl-2 及周期相关蛋白Cdk-4、Cdk-6、CyclinD1 和p21 的表达变化。结果：PSVII可明显抑 制SW-480 细胞增殖,并诱导其凋亡,其IC50值为5.25± 0.46 umol/L;PSVII 可促进SW-480 细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、 Bax及p21 的表达,降低Bcl-2、Cdk-4、Cdk-6和CyclinD1 的表达。结论：PSVII可以通过线粒体和死亡受体途径诱导SW-480 细胞 凋亡;将SW-480 细胞周期阻滞于G1 期是通过上调p21,抑制Cdk-4、Cdk-6 与Cyclin D1 周期调控蛋白的表达。     

四川重楼属植物2新记录变种

报道了四川重楼属植物2新分布变种,分别是宽瓣球药隔重楼(Paris fargesii var. latipetala H. Li et V. G. Soukup)和红果五指莲(Paris axialis H. Li var. rubra H. H. Zhou, K. Y. Wu et R. Tao)。其中红果五指莲为贵州特有类群,且为孤点分布。四川新分布的发现对于重楼属植物的系统分类和迁徙演化研究具有重要意义。     

重楼活性单体pp-10通过抑制PI3K/Akt通路诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡和自噬

目的:探讨重楼/七叶一枝花(Paris polyphylla)的醇提物单体pp-10诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡和自噬及其分子机制。方法:采用MTT法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的重楼单体pp-10对人胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用;Hoechst33342染色法检测pp-10作用于人胃癌BGC-823细胞后细胞核形态的改变;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blotting检测重楼单体pp-10对细胞凋亡和自噬相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、(ADP-核糖)聚合酶(PARP)、Bax、Bcl-2、LC3、P62以及PI3K/Akt信号通路相关蛋白(Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、P70s6k、p-P70s6k)表达的影响。结果:重楼单体pp-10能显著抑制BGC-823细胞的生长,作用呈时间-效应关系及剂量-效应关系;克隆形成抑制实验表明随着pp-10浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与对照组相比有显著差异;在荧光显微镜下观察可见其细胞核固缩、边聚、裂解等细胞凋亡形态学变化;流式细胞术检测显示,随着作用药物浓度的增高,其凋亡率逐渐升高;Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加,线粒体相关凋亡信号通路蛋白Caspase9、Caspase3及PARP均出现酶切活化条带,细胞促凋亡蛋白Bax的表达水平增加,抗凋亡蛋白Bcl-2减少,自噬相关蛋白Ⅱ型LC3增加,P62蛋白减少,p-Akt蛋白的表达水平下降,Akt下游蛋白p-m Tor、p-p70S6K表达减少。结论:重楼单体pp-10通过抑制BGC-823细胞增殖,诱导细胞凋亡和自噬,与下调P13K/Akt信号通路有关。     

重楼皂甙Ⅱ对狼疮性肾炎患者外周血CD4~＋CD25~＋T调节细胞表达的细胞因子的影响

目的：研究重楼皂甙Ⅱ对狼疮性肾炎患者外周血CD4＋CD25＋Treg分泌的细胞因子IL-10和TGF-β的影响。方法：10例健康人为正常对照组,20例LN病人随机分为四组：LN对照组（n=5）、重楼干预组1（n=5,接种细胞数为1×105/1.5ml/孔）、重楼干预组2（n=5,接种细胞数为2×105/1.5ml/孔）、重楼干预组3（n=5,接种细胞数为5×105/1.5ml/孔）。分离外周血单个核细胞,利用免疫磁珠法分离CD4＋CD25＋Treg。重楼干预组予重楼皂甙Ⅱ干预,正常对照组和LN对照组不予处理,各组培养72h。取各组上清,用ELISA分别检测IL-10和TGF-β的水平。结果：与正常组比较,其余各组TGF-β和IL-10的水平明显降低（P〈0.01）。与LN对照组比较,重楼皂甙Ⅱ干预后各组TGF-β和IL-10的水平升高（P〈0.05）。重楼干预组之间比较,重楼干预组2的TGF-β和IL-10水平较其他两组明显升高（P〈0.01）,而重楼干预组1和3的TGF-β和IL-10水平变化无显著性差异（P〉0.05）。结论：重楼皂甙Ⅱ可上调LN患者TGF-β和IL-10的水平,上调的幅度受接种细胞数量的影响。     

重楼排草的化学成分研究

从报春花科植物重楼排草（L.Paridiformis Frach）的全株中分离得到了7个化合物。应用各种理化方法及光谱分析鉴定其化学结构。分别鉴定为：希克拉敏A-3-O-｜β-D-吡喃木糖基．（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→4）-[β-D-吡喃葡萄糖基-（1→2）]｜}-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（1）、3β-O-[β-D-吡喃木糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→4）]。[β-D-吡喃葡萄糖基-（1→2）]-α-L-吡喃阿拉伯糖基-16α-羟基-13β,28-环氧-齐墩果烷（2）、异鼠李素-3-O-[β-D-吡喃鼠李糖基-（1→）β-D-吡喃阿拉伯糖苷]（3）、槲皮素-3-O-[β-D-吡喃鼠李基-（1→4）-β-D-吡喃阿拉伯糖苷]（4）、β-香树素（5）、β-香树素乙酸酯（6）、三十二烷醇（7）。其中1、2、3、4均为首次从本植物中分离得到。