史氏鲟两种促性腺激素β亚基cDNA克隆及序列进化分析

从史氏鲟(Acipenserschrenkii)脑垂体中提取总RNA,利用GeneRacerTM技术,分别克隆得到促性腺激素Ⅰ(GTHⅠ)和Ⅱ(GTHⅡ)的β亚基cDNA全长。史氏鲟GTHⅠ-β亚基cDNA全长为1088bp,开放阅读框为384bp,编码128个氨基酸(Genbank序列登录号为:AY575920);GTHⅡ-β亚基cDNA全长为616bp,开放阅读框为408bp,编码136个氨基酸(Genbank序列登录号为:AY575921)。与其他脊椎动物进行了两种基因的氨基酸序列同源性比较表明:史氏鲟GTHⅠ-β与西伯利亚鲟相似性最高,为99·1%;与硬骨鱼类中鲈形目相似性最低,为34·5%。GTHⅡ-β与西伯利亚鲟相似性为98·3%,与其他硬骨鱼类除鲈形目外都超过60%,与鸟类的相似性最低,为42·8%。两个基因成熟肽构建的MP树显示:GTHⅠ与FSH的β亚基和GTHⅡ与LH的β亚基构成两个明显的聚类。用Mega2软件计算了所比对物种间开放读码框的核苷酸遗传距离并构建了NJ树和MP树,两个基因β亚基的NJ系统树和MP系统树拓扑结构相似,鲟鱼与真骨鱼类分别聚类,共同形成硬骨鱼纲聚类,与传统分类学一致。成熟肽相似性、遗传距离和系统树分支长度显示GTHⅠ-β亚基在真骨鱼类进化速率显著快于其他脊椎动物,而LH-β亚基在羊膜动物中进化比其他脊椎动物快。暗示这两种糖蛋白基因的进化伴随物种进化而显示其功能[动物学报52(2):362-375,2006]。     

草鱼促性腺激素基因的原核表达及多克隆抗体的制备

选用原核表达载体pGEX-4T-1,分别插入草鱼GTH和FSHβ的cDNA序列,构建成N端含有GST融合蛋白标签的表达质粒,分别转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达出2个融合蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示重组融合蛋白GST-GTHα和GST-FSHβ的相对分子质量大约为35、38 kD.用抗GST标签的单克隆抗体分别对2个表达蛋白进行Western blot鉴定,结果显示重组蛋白表达正确.利用制备型SDS-PAGE纯化回收的蛋白并免疫新西兰大白兔,分别制备了抗GTH和抗FSHβ的具有较高效价的多克隆抗体.该结果为纯化天然GTH蛋白提供了有效的检测手段,也为进一步制备GTH单克隆抗体奠定了基础.     

池塘养殖三疣梭子蟹雄体生长和性腺发育规律

池塘养殖是三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的主要养殖方式,但关于池塘养殖三疣梭子蟹雄体的生长和性腺发育规律尚不清楚。本研究通过定点连续采样,首先系统研究池塘养殖过程中三疣梭子蟹雄体的生长和成熟雄体生殖系统的外观及组成的变化,其次研究池塘养殖三疣梭子蟹雄体性腺发育过程中性腺各部分组织学特征及其指数的变化,以及不同月份雄体性腺发育的情况和比例。结果表明:(1)三疣梭子蟹雄体的体重和壳宽增长率及特定增长率均在8月份最高,且体重与壳宽呈显著正相关关系。(2)三疣梭子蟹成熟雄体的生殖系统由体外(阴茎、交接器)和体内(精巢、输精管)两部分构成。(3)根据精巢和输精管的外观、组织学特征及其指数的变化,可将三疣梭子蟹雄体性腺发育分为3期。精子发生期,即精巢内主要细胞类型是精原细胞和初级精母细胞,精巢指数为0.07%～0.16%,此时输精管呈透明状,肉眼很难发现;精荚形成期,精巢内主要细胞类型为次级精母细胞和精子细胞,精巢指数为0.10%～0.51%,输精管内有大量精荚和分泌物,输精管指数为0.01%～0.41%;成熟期,精巢内主要细胞类型是精子细胞和成熟精子,精巢指数为0.10%～0.41%,输精管进一步膨大,输精管指数为0.20%～0.65%。(4)在雄体性腺发育期间,性腺指数和输精管指数呈显著上升趋势,而精巢指数呈现先上升后下降的趋势,且统计分析发现性腺指数与肝胰腺指数无明显的相关性。(5)池塘养殖雄体性腺发育不同步,7月份主要处于精子发生期,8月底,有76%的雄体性腺发育达到精荚形成期,至9月底,达到成熟期雄体的比例为47%,此后雄体性腺发育趋于成熟,10月中下旬至12月份池塘养殖雄体均主要处于成熟期。     

日本海舍氏贝乌贼内壳的生长特性北大核心CSCD

内壳可完整记录头足类的生活信息,是研究头足类年龄与生长的良好载体。根据2018年12月中国鱿钓船在日本海采集的261尾舍氏贝乌贼(Berryteuthis magter shevtsovi)样本,研究了其内壳长、叶轴长与个体生长的关系,尾锥宽、翼部最大宽度与性腺成熟度的关系以及叶轴、翼部和尾锥的生长特性。结果显示,舍氏贝乌贼内壳长和叶轴长均与胴长具有线性关系(R^(2)>0.76),与体重具有幂函数关系(R^(2)>0.77);尾锥宽和翼部最大宽度均在性腺成熟度达到Ⅲ期后增长明显。舍氏贝乌贼内壳叶轴和翼部生长速率基本相同,且远大于尾锥的生长速率。研究表明,舍氏贝乌贼内壳可用于分析个体生长,尤其在其胴体遭到损伤时更为重要,内壳宽度生长主要在个体性成熟之后。     

褛裳夜蛾的交配行为及雄蛾对性腺提取物的反应节律

详细观察了褛裳夜蛾成虫的交配行为,利用风洞、触角电位技术研究了雄蛾对性腺提取物的反应节律,通过林间诱蛾试验进行了验证,旨在为褛裳夜蛾性信息素的精确提取及性信息素组份分离、鉴定提供依据。研究结果表明:成虫的求偶、交配行为均发生在暗期,有一定的节律性:雌蛾在羽化3d以后开始求偶,1周左右表现最为强烈,3-4日龄雌蛾在暗期4-6h开始求偶,最大求偶率在暗期6-8h;5-9日龄在进入暗期就开始求偶,最大求偶率出现在暗期4-6h。风洞试验表明,3-7日龄的雄蛾对性腺提取物均有明显的性行为反应,5日龄雄蛾在暗期4-6h对性腺提取物的反应最为强烈。3-6日龄的成虫在暗期4-6h开始交配,而7-8日龄的成虫于暗期2-4h开始交配,6日龄的成虫交配率最高,交配高峰在暗期4-8h。雄蛾对性腺提取物的触角电位反应也有一定的节律性:雄蛾对4日龄雌蛾性腺提取物开始有电生理反应,对6-7日龄暗期5h性腺提取物反应最为强烈。林间诱蛾试验测定了性腺提取物的引诱活性,7日龄雌蛾性腺提取物林间诱蛾量最高,引诱高峰在暗期4-6h,该结果也验证了褛裳夜蛾雄蛾对性腺提取物的反应节律。     

极端温度对海刺猬(Glyptocidaris crenularis)存活、摄食、生长和性腺的影响

在实验室条件下研究了极端温度对海刺猬的存活率、摄食率、生长以及组织器官等方面的影响。实验设置两个处理组温度为30°C和-2℃,对照组为自然水温(19~23℃),每组设置3个重复,每个重复60枚海刺猬,实验周期为56 d。结果表明:高温组海刺猬实验温度升到30℃后2 d内全部死亡,其平均摄食量(5.19±1.31 g·ind-1)极显著小于对照组(15.15±1.58 g·ind-1)(P0.01);低温组和对照组之间海刺猬存活率差异不显著(P0.05);但低温组海刺猬平均摄食量(0.18±0.04 g·ind-1)极显著小于对照组(10.90±0.33 g·ind-1)(P0.01);56 d内低温组海刺猬个体湿重极显著小于对照组(P0.01);低温组海刺猬口器湿重、壳湿重、性腺湿重、壳干重、口器指数、壳指数极显著小于对照组(P0.01),性腺干重、口器干重显著小于对照组(P0.05);但性腺指数与对照组无显著差别(P0.05);低温组海刺猬最大承受压力极显著小于对照组(P0.01);在实验室条件下,海刺猬(2~3 g·ind-1)无法长时间在高温环境(30℃)下存活,而能在低温环境(-2℃)下存活但其摄食、生长和性腺性状影响极显著。     

GnRH受体与TRAIL在前列腺肿瘤中表达的研究

目的研究促性腺激素释放激素受体(GnRH-R)和凋亡相关蛋白(TRAIL)在前列腺肿瘤中的表达及临床意义.方法采用SABC免疫组化法及原位定量法,对前列腺肿瘤和前列腺增生患者中GnRH-R和TRAIL的表达进行检测及半定量分析.结果在前列腺癌组织高分化的11例,中分化的4例以及低分化的5例中,各种不同分化的癌组织均显示不同程度的GnRH-R和TRAIL阳性免疫反应,原位定量显示GnRH-R与TRAIL的表达均分别随着组织分化程度增高而增高(P<0.05),并且TRAIL较GnRH-R阳性免疫反应强.结论 GnRH-R和TRAIL表达量可能与前列腺恶性肿瘤的发生与发展有关.     

鲤鱼两个cGnRH-Ⅱ基因的发现及其在成熟个体的表达分析

促性腺激素释放激素(GnRH)是一个保守的神经十肽家族, 在调节脊椎动物的性腺发育和控制性成熟中起至关重要的作用. 用RACE和RT-PCR方法, 从鲤鱼脑组织克隆得到两个差异的cGnRH-Ⅱ cDNAs序列, 其长度分别为622, 578 bp. 两个cDNA编码的cGnRH-Ⅱ前体均为86个氨基酸, 包括一个信号肽、cGnRH-Ⅱ十肽和一个由蛋白水解位点(Gly-Lys-Arg)连接的GnRH相关肽. 内含子捕获和Southern杂交证实鲤鱼基因组中有两个cGnRH-Ⅱ编码基因, 且两个基因都可能以单拷贝形式存在. 鲤鱼cGnRH-Ⅱ的多基因编码现象为“基因复制”理论提供了新的证据. 采用半定量的RT-PCR分析了两个cGnRH-Ⅱ基因在鲤鱼成熟个体的脑区、垂体和性腺中的表达及相对表达水平. 表达分析结果表明, 脑区、垂体和性腺都能检测到cGnRH-Ⅱ基因的表达, 但cGnRH-Ⅱ基因在卵巢没有表达是例外, 而表达水平在不同的脑区、垂体和性腺存在差异. 根据两个cGnRH-Ⅱ基因的广泛表达特性, 推测鲤鱼cGnRH-Ⅱ的功能可能主要起神经递质或神经调节剂作用, 同时对促进和调控促性腺激素释放起一定作用, 而在垂体和性腺合成的cGnRH-Ⅱ可能起自分泌和旁分泌调节因子的作用.     

饲料中n-3 HUFA含量对花尾胡椒鲷亲鱼的生殖性能及血浆性类固醇激素水平季节变化的影响

以n-3 HUFA含量为0．16％、1．27％、2．36％和3．47％的4种人工配合饲料(D1～D4)及天然饲料(冰鲜杂鱼,D5)饲养花尾胡椒鲷(Plectorhynchus cinctus)雌亲鱼一周年,通过比较各饲料组亲鱼的产卵量、卵和仔鱼质量以及各月份的血浆性类固醇激素水平,研究n-3 HUFA对生殖性能及性类固醇激素水平季节性变化的影响。平均每kg雌鱼的产卵量、卵受精率、仔鱼存活率、开口仔鱼体长等,D2和D3组与D5组相近,但D1和D4组显著低于D5组;饲料中n-3 HUFA含量对血浆17β-雌二醇(E2)和睾酮(T)水平的季节性变化规律无明显影响,但亲鱼性腺发育与成熟时期的E2和T水平．D1和D4组较D5组显著降低。n-3 HUFA含量对亲鱼离体卵泡E2和T的分泌也有一定影响：D4组卵泡E2的基础分泌很少;绒毛膜促性腺激素(HCG,100IU／mL)可刺激D2-D5组卵泡分泌E2和T,但D1组卵泡对HCG无反应。结果提示,花尾胡椒鲷亲鱼饲料中n-3 HUFA的适宜含量为1．27％-2．36％,不足或过高对亲鱼的生殖性能均有不利影响;通过影响性类固醇激素的产生可能是饲料中n-3 HUFA含量影响鱼类生殖性能的机制之一。