抗肝癌hdsFv-hEDN重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用

目的:研究抗肝癌hdsFv-hEDN重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,评价其作用为导向治疗药物的临床应用价值.方法:将体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721细胞接种于裸鼠皮下,建立荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为hdsFv-hEDN治疗组和对照组,分别给予尾静脉注射hdsFv-hEDN和生理盐水,1次/日,共2周.比较各组裸鼠皮下移植瘤生长速度、肿瘤体积和重量,并计算肿瘤的抑制率.取各组裸鼠肿瘤组织,心,肺,肝,肾组织HE染色,光学显微镜下观察.结果:抗肝癌hdsFv-hEDN治疗组裸鼠皮下移植瘤生长抑制作用显著,肿瘤生长速度减慢,肿瘤体积从42.62±0.57 mm3增加到74.28±2.59 mm3、瘤重为155.82±14.43 mg,而对照组肿瘤体积从41.94±0.91 mm3增加到127.42±4.81 mm3、瘤重为283.28±15.21 mg,两组比较差异非常显著.肿瘤体积抑瘤率和瘤重抑瘤率分别达到41.59±0.02%和45.51±0.09%.组织学观察抗肝癌hdsFv-hEDN组肿瘤组织出现大片坏死,凋亡明显增加,心、肝、肺、肾等重要器官未见明显异常.结论:抗肝癌hdsFv-hEDN重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长具有良好的抑制作用.     

动物细胞系的染色体组型与遗传变异率分析

在建立国内首家犬,猫,猴,鼠传代细胞库,即7种动物肾细胞系（F－81,CRFK,MDCK,Vero,Vero-2,MA-104,BHK-21)的种子库和工作库的基础上,通过细胞染色体组型,G带核型,染色体数目变异率,结构畸变率分析,了解7种细胞系传代培养不同代次的染色体变异情况,以相应的细胞株皮下接种褐 形成肿瘤实验,软琼脂细胞克隆一苦恼经与植物凝集素作用下细胞凝集实验为对照,筛选出无致癌／致瘤性,符合细胞遗传学要求,无传染因子污染的细胞系（F－81,CRFK,Vero,Vero-2)或极低致癌性的MDCK细胞系用于制苗,发现肿瘤细胞系高变异率株可在裸鼠体内快速选育成功,细胞系染色体遗传特征决定致性质并具有种属特异性,得到一些100％成瘤和100％不成瘤的细胞株并了与染色体组型的关系,对于肿瘤的发病机理及实验治疗,都是非常好的模型,一些细胞系不仅成瘤而且还可转移（致恶性横纹肌样瘤的BHK－21和Vero 细胞株）,其他致瘤细胞株只成瘤不转移或不明显转移。     

氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞吞噬和分泌功能的影响

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对巨噬细胞源性泡沫细胞吞噬功能和炎症相关因子分泌功能的影响。方法:利用佛波酯(phorbol ester,PMA)诱导THP-1细胞分化形成巨噬细胞,之后采用ox-LDL处理48小时后,诱导其形成泡沫细胞。利用中性红吞噬实验,分析泡沫细胞形成前后吞噬功能的变化;通过ELISA法,检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)含量,观察ox-LDL对THP-1巨噬细胞功能的影响。结果:细胞形态学结果表明,我们成功利用ox-LDL诱导THP-1巨噬细胞形成泡沫细胞;进一步发现ox-LDL诱导THP-1巨噬细胞表面的清道夫受体CD36表达升高,并促进细胞吞噬功能增加,进一步促进细胞内胆固醇含量显著升高(P0.05);同时,ox-LDL能够刺激巨噬细胞大量分泌TNF-α(P0.05)。结论:ox-LDL通过增强清道夫受体CD36表达,提高巨噬细胞的吞噬功能,引起大量胆固醇聚集,产生细胞毒性损伤,并促进TNF-α炎性因子的大量分泌。     

病理学专业学位研究生临床与科研能力培养模式初探

病理学是研究疾病的发病、病变机理及在疾病发展过程中各组织器官形态特征与功能变化的一门学科,被称作是联系基础与临床的桥梁和纽带。据统计我国现阶段临床病理医生的需求量很大,而高水平临床病理诊断医师尤为欠缺。近年来,病理学专业学位研究生的培养应运而生,旨在为国家培养高质量的病理学人才。然而由于我国传统的病理学研究生的培养仍存在种种弊端,毕业的研究生难以获得临床与科研二者综合能力的提升,因而限制了其自身在病理学事业方面的发展。本文依据我科室专业学位研究生的培养经验,探讨病理学专业学位研究生的培养模式以及如何培养高层次病理学人才,促进其科学研究与外科病理诊断的有机结合,为推动我国病理学事业的蓬勃发展打好坚实基础。     

恶性横纹肌样瘤（MRT）的起源研究——高变异率HeLa细胞致裸鼠产生MRT的实验研究

HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株、H株的染色体众数依次为60±3（超二倍体）、62±3（超二倍体）、68±3（超二倍体和亚四倍体）和78±2（亚四倍体）,所占比率分别为72%～76%,69%,52%和40%。在纯化3代的肿瘤阴性对照二倍体猫肾（染色体众数38所占比率80%）和犬肾原代细胞皮下接种裸鼠的致癌／致瘤率分别为0%（0／22）和0%（0／10）,X株HeLa细胞冻融裂解物皮下接种裸鼠产生进行性缩小肿瘤的比率为20%（1／5）的前提下,HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株皮下接种裸鼠产生进行性生长恶性肿瘤的比率分别为100%（10／ 10）,100%（25／25）和100%（5／5）,H株细胞皮下接种裸鼠产生恶性肿瘤的比率为50%（5／10）。其中,只有HeLa细胞KB株10～11代（染色体结构畸变率高达20%,出现18%双着丝点和2%断片）以超高数量接种的1组4只裸鼠（0.17ml12.75×10     

AMPK与脂肪细胞分化的关系研究及其在人脂肪源性肿瘤组织中的表达特点

目的:探讨AMPK在脂肪细胞分化过程中的作用以及与脂滴相关表面蛋白Cidec的表达关系,为肥胖发生及其防治肥胖及肥胖相关性疾病提供重要的理论依据。方法:通过免疫组织化学、Real-time PCR和Western blot等方法分析AMPK和Cidec在脂肪细胞分化中的作用,明确二者的相关性。结果:在不同分化程度的脂肪源性肿瘤组织中,AMPK表达随着脂肪细胞分化程度的升高而表达降低,而Cidec的表达是逐渐增高的;在不同发育阶段的胎儿脂肪组织中,AMPK随着胎龄的增加表达逐渐降低(P0.01),而Cidec的表达则呈逐渐增高的趋势(P0.01);以上AMPKα的表达均与Cidec的表达水平呈负相关。结论:AMPK可能在脂肪细胞分化过程中扮演重要角色,研究其与Cidec的表达与作用关系可能为脂肪细胞发育及分化提供重要线索及依据。     

激光共聚焦显微镜研究大白鼠肝癌FSK7902细胞系的实体瘤中角蛋白和嗜铬颗粒素A的关系

应用免疫组织化学ＡＢＣ法和免疫荧光组织化学方法结合激光共聚焦显微镜观察了嗜铬颗粒素Ａ和角蛋白在大白鼠肝癌ＦＳＫ７９０２细胞系形成的实体瘤癌细胞中的表达,结果表明在ＦＳＫ７９０２实体瘤内,大多数癌细胞呈角蛋白和ＣｇＡ免疫反应阳性,反应产物位于核周胞质或核旁的某些区域。     

运用组织芯片技术检测ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达及分析

目的:检测ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达,探讨ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达模式.方法:运用甲状腺组织芯片,通过免疫组化染色,检测ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达,并进行量化评分,分析ndrg2表达与c-myc表达两者之间可能存在的负调控关系.结果:ndrg2在甲状腺癌组织中呈阴性表达,在甲状腺腺瘤组织中呈弱表达或不表达趋势,在正常甲状腺组织中高表达.而c-myc在甲状腺癌组织中呈高表达,在甲状腺腺瘤组织中不表达或仅呈部分弱表达,在正常甲状腺组织中呈阴性表达.统计结果分析显示,ndrg2与c-myc在人甲状腺组织中的表达呈负相关.结论:ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达呈负相关,由此推测NDRG2可能受到C-MYC的负调控.     

Fas抗体对人胃癌SCG-7901细胞系生长的影响及可能的作用机制

探讨Fas抗体对人胃癌细胞系SCG-7901生长的影响及其可能的作用机制. 采用免疫组织化学技术结合细胞计数法观察Fas抗体作用48h后,人胃癌细胞中p53、PCNA的表达率的变化,以PCNA阳性表达率作为细胞的增殖指数;用流式细胞技术观测Fas抗体作用48h后细胞周期的改变,并与未用Fas抗体的对照组进行对比.所得数据分别用χ2或μ检验进行统计学处理.结果显示 实验组人胃癌细胞PCNA增殖指数(65.5%)明显低于对照组(89.35%) , 二者相比较差异显著(P<0.01);而p53的阳性表达率实验组(10.0%)较对照组(0 .9%)明显增加,差异有显著性(P<0.05).流式细胞仪检测结果显示实验组G1期细胞(64 .5%) 较对照组(57.4%)明显增加(P<0.01, μ=5.384),而S期细胞(27.4%)较对照组(36.1 %)明显减少(P<0.01, μ=6.9566),两组间比较G2期细胞无明显差异(实验组8.1 %,对照组为6.6%;P>0.05).结果表明Fas抗体具有显著的抑制人胃癌SCG-7901细胞系生长的作用,此作用由Fas抗原/ Fas抗体系统介导,且抑癌基因p53参与了此作用过程.     

宫颈癌中EGFR启动子甲基化荧光偏振技术检测方法研究

目的:建立一种基于荧光偏振技术的宫颈癌组织标本中EGFR启动子甲基化检测的新方法。方法:设计通用引物,在封闭管中同时扩增EGFR启动子甲基化与非甲基化等位基因片段,再同时用序列特异的FAM或TAMRA荧光标记探针对扩增产物进行杂交检测,利用荧光偏振仪检测扩增杂交反应的荧光偏振值,确定EGFR启动子甲基化状态。应用荧光偏振法检测63例宫颈癌组织样本,并与直接测序法进行对比验证。结果:本方法检测EGFR启动子甲基化结果与直接测序法结果无统计学差异,且最低检测浓度为50拷贝/μl,最低检测含量可达10%,敏感度高。结论:本方法检测EGFR启动子甲基化灵敏度与准确度较高,为临床宫颈癌个体化治疗相关检测提供了新技术。