核基质结合区对转爬山虎芪合酶基因烟草中产生白藜芦醇的作用

采用核基质结合区(MARs)来提高转芪合酶基因(STS)烟草(Nicotianatabacum L.)中白藜芦醇产物的含量.MARs是细胞中能与核基质特异紧密结合的DNA片段,体外结合实验表明克隆自酵母的MARs序列能特异地与烟草核基质结合.芪合酶是白藜芦醇生物合成中的关键酶,用RT-PCR方法从川鄂爬山虎(Parthenocissus henryana(Hemsl.)Diels et Gilg)中克隆了与葡萄芪合酶基因有较高同源性的芪合酶编码区,将其置于CaMV35SΩ强启动子下,分别构建两侧带有MARs及不含MARs序列的表达载体,通过农杆菌介导转化烟草.Northern blot及HPLC等分析表明STS基因已整合至烟草染色体中并正常转录,且表达的外源芪合酶在烟草中可催化其底物合成白藜芦醇产物.与对照相比,MARs的存在使转芪合酶基因烟草中白藜芦醇的含量平均提高了约一倍.MARs在转芪合酶基因植物中的应用也为获得抗病性更强、白藜芦醇含量更高、更保健的转基因果蔬的研究奠定了基础.     

鸡β-防御素7在大肠杆菌中的表达及活性分析

【目的】根据鸡β-防御素7(Gal-7)的成熟肽基因序列合成基因,构建表达Gal-7的大肠杆菌工程菌,研究重组鸡防御素Gal-7成熟肽的体外生物活性。【方法】将合成的gal-7基因克隆到大肠杆菌表达载体pGEX-6p-1中,得到重组质粒pGEX-6p-gal7,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达得到含GST标签的融合蛋白GST-Gal7;之后用Prescission蛋白酶将GST标签切除,并对成熟肽进行质谱分析;再利用琼脂打孔扩散法检测Gal-7成熟肽的体外抑菌活性,用2倍稀释法测定对指示菌的最低抑菌浓度。【结果】成功构建Gal-7大肠杆菌异源表达工程菌,表达纯化的重组Gal-7成熟肽质谱鉴定分子量为5 516 Da,其对黄色微球菌(NCIB 8166)、金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、粪肠球菌(ATCC 29212)、大肠杆菌(CMCC 44102)均有抑菌活性,最低抑菌浓度分别为16.875、67.5、67.5、135 mg/L。【结论】获得表达鸡Gal-7成熟肽的大肠杆菌工程菌,并且切除GST标签的Gal-7成熟肽具有生物活性。     

大肠杆菌重组乳链菌肽抗性蛋白(NSR)的表达纯化及其功能分析

乳链菌肽(Nisin)是由某些乳酸菌产生的一种阳离子抗菌肽, 而Nisin抗性蛋白(Nisin resistance protein, NSR)的表达则使一些非 Nisin产生菌获得Nisin抗性。为深入探索NSR的作用机制, 本研究在大肠杆菌中表达了去除N末端38个氨基酸残基的NSR(NSRΔ38)与GST的融合蛋白GST-NSRΔ38。通过谷胱甘肽(GSH)亲和层析和GST标签的切除后, 得到纯化的NSRΔ38, 并测定了该蛋白可能的nisin降解活性。反应产物的抑菌活性测定结果表明被NSRΔ38作用     

双液相系统酶化学技术制取茶色素

应用双液相酶化学技术研究茶色素的形成与制取,并以单液（水）相系统进行茶多酚酶促氧化制取茶色素为对照,引入氧载体后,构成了双液相酶化学氧化系统,对其中溶解氧浓度,PPO活性,TFs,TRs含量的变化和HPLC图谱等分析研究,制品中TFs的HPLC图谱可知：TOP－1中TFs的峰高和峰面积均高于TOP－2制品中TFs,尤以TFG与TFDG较高,TOP－1制品中儿茶素类残留量较对照少,尤其是简单儿茶素的列留量（如DL－C（－）－EC）少得更多。     

乳链菌肽(nisin)抗性机制的研究进展

乳链菌肽(nisin)是某些乳酸乳球菌产生的一种羊毛硫细菌素。其对包括食品腐败菌和致病菌在内的许多革兰氏阳性菌具有强烈的抑制作用,是目前世界上唯一被允许用作食品添加剂的细菌素。nisin的广泛使用虽未引发大范围的抗性,但在自然界或实验室的选择压力下,某些非nisin产生菌也获得了抵御nisin攻击的抗性机制。nisin抗性机制通常涉及两种方式,即非特异性的生理适应机制和特异性蛋白酶介导的主动防御机制。本文综述了近年来nisin抗性机制的研究进展。     

基于冰核蛋白的乳酸菌表面展示系统的构建

[目的]验证来源于丁香假单胞菌的冰核蛋白在乳酸乳球菌表面展示外源蛋白的可能性.[方法]以绿色荧光蛋白(Green Fluorescence Protein,GFP)基因gfp为报告基因,以冰核蛋白基因的N末端和NC端作为展示单元,构建乳酸菌表面展示载体pHZ101和pHZ102,并转化大肠杆菌(Escherichia coli JM109和乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)MG1363.[结果]荧光显微镜观察显示重组大肠杆菌和乳酸乳球菌均能检测到绿色荧光.Western blot结果表明GFP蛋白在重组大肠杆菌和乳酸乳球菌中均得到表达,并且INPN-GFP蛋白多数滞留于乳酸乳球菌细胞质内,而INPNC-GFP蛋白则大部分定位于乳酸乳球菌的细胞膜上.[结论]以上结果表明丁香假单胞菌的冰核蛋白能引导外源蛋白定位于乳酸乳球菌的细胞膜上,为乳酸菌表面展示系统的构建提供了新的方向.     

解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌脂肽芬芥素的分离鉴定及抑菌作用

对一株解淀粉芽孢杆菌TF28产生的抗菌脂肽进行分离鉴定及抑菌活性研究,采用酸沉淀、乙酸乙酯和甲醇萃取技术制备了抗菌脂肽粗提物,经过2次HPLC分离纯化,在保留时间32～42min内获得8个抗菌脂肽纯品,经MALDI-TOF-MS鉴定为芬芥素(fengycins),对尖孢镰刀菌和禾谷镰刀菌显示出较强的抑菌活性,该研究为提高菌株TF28抗菌脂肽产量的定向遗传改造奠定基础。     

应用树脂吸附分离制取茶多酚

从茶中分离制取天然抗氧化剂茶多酚,现行工业化生产多采用有机溶剂萃取和金属盐沉淀法,这两种方法,工艺繁琐,有机溶剂、金属盐或酸、碱损耗大,严重污染环境,提取率低、得率低、成本高、销售困难。笔者采用大孔吸附树脂层析法从茶中分离,纯化茶多酚,制得低含咖啡碱的茶多酚粗制品,得率为１８％～２１％,纯度≥７０％,ＥＧＣＧ＞２０％,咖啡碱＜２％。吸附树脂具有表面积大,吸附量大,吸附与洗脱高峰集中,不用或少用除乙醇外的有机溶剂,洗脱与再生容易,成本低,得率高等优点,大有开发前景。     

益生菌、益生元和后生元对食物过敏的影响和作用机制

食物过敏(food allergy,FA)的发病率在近二十年来持续上升,已经严重影响患者的生活质量.生命早期接触外源性抗原少而导致的免疫耐受限制是FA的主要原因.微生物-宿主的相互作用与FA密切相关,健康的微生物菌群促进宿主在生命早期建立成熟的免疫系统,减少FA的易感性,因此,改善肠道菌群和调节机体免疫在治疗FA中至关...