人黑色素瘤相关抗原Restin的克隆和表达

目的:通过对原核表达载体、表达条件和宿主菌的优化,利用原核表达系统有效表达可溶性的人Restin融合蛋白.方法:应用PCR方法扩增获得Restin编码区,克隆入原核表达载体pET44a(+),分别转化E.coli BL21(DE3)和E.coli Rosetta-gamiTM2(DE3),不同的IPTG浓度诱导表达Restin重组融合蛋白,SDS-PAGE和Western Blot分析表达产物.结果:成功构建了重组载体pET44a(+)-Restin,并在E.coli Rosetta-gamiTM2(DE3)中获得了可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的8.9%.结论:可溶性Restin融合蛋白的获得为后续的功能研究、蛋白制备及其抗体研制奠定了基础.     

第三批人凝血因子VⅢ浓制剂国家标准品的协作标定

为更替第二批人凝血因子VⅢ浓制剂国家标准品,以WHO97/616批重组人凝血因子VⅢ浓制剂国际标准品为对照,采用一期法协作标定第三批人凝血因子Ⅷ浓制剂二个候选国家标准品X和Y,并将标准品分别置4℃,22℃,37℃保存4.5个月,用加速破坏试验进行稳定性考查,结果表明,X（20010606批）候选标准品效价为3.8IU/支;Y（20010607批）候选标准品效价为7.3IU/支,X批候选标准品比Y候选标准品稳定性好,其它项目均达到国家标准品要求,故已完成建立第三批人凝血因子VⅢ浓制剂国家标准品。     

新一代精准基因编辑工具CRISPR/Cas9的技术优势与应用局限

CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9)是继锌指核酸酶(ZFNs)和类转录激活因子效应物核酸酶(TALENs)基因编辑技术之后的第三代基因编辑技术。CRISPR/Cas9在细菌和古生菌中广泛存在,是细菌在长期进化过程中形成的一种"适应性免疫防御",能够针对噬菌体感染、质粒接合和转化所造成的外源导入基因特异性识别、降解入侵的外源DNA,CRISPR/Cas9通过一段20 bp的短RNA来识别打靶位点的精准编辑技术。CRISPR/Cas9具有设计操作简便、编辑高效和通用性广等优点,是新一代具有革命意义的精准基因编辑技术。从CRISPR/Cas9的发现、作用机理、基因编辑以及应用局限等方面进行归纳总结,旨为理解其工作原理和精准基因编辑技术应用提供参考。     

凝血酶原复合物中影响激活凝血因子测定因素的探讨

含肝素的凝血酶原复合物（ＰＣＣ）用适量的硫酸鱼精蛋白中和后,作１：１０和１：１００稀稀测定激活凝血因子。肝素影响激活凝血因子测定,不同活性单位的ＰＣＣ对某些厂家生产的ＰＣＣ激活凝血因子测定无影响,但对有厂家生产的ＰＣＣ激活凝血因子测定有影响。对国内５家血制品生产单位生产的１５批ＰＣＣ进行激活疑血因子测定,凝血酶活性通过者激活凝血因子也能通过。     

凝血酶原复合物中肝素含量的测定

凝血酶原复合物按标示量加蒸馏水溶解成１０ＰＥ／ｍｌ。通过加入适量的硫酸鱼精蛋白中和凝血酶原复合物样品中肝素。取中和后的样品加入缺血小板血浆、脑磷脂和氯化钙,记录凝固时间,挑选凝固时间最短的样品管计算肝素含量。该方法误差２０％。以５家血制品生产单位生产的２４批ＰＣＣ肝素含量的测定,按ＰＣＣ效价标示量小于等于１３０％计算,不合格６批占２５％。     

一种带有组氨酸标签的新型表达载体的构建及应用

目的:利用基因重组技术,对已有载体pSE380进行改造,获得具有组氨酸标签的新型表达载体.方法:以pSE380载体为出发材料,通过一步反向PCR技术在多克隆位点处添加一个六聚组氨酸纯化标签,并用该载体对xdh外源基因进行克隆表达及纯化验证.结果:测序结果显示该标签已成功插入,xdh基因克隆表达及纯化表明,镍柱亲和层析完全可以将重组的表达蛋白纯化,并达到电泳纯级别.融合标签并没有影响的该重组酶的功能.结论:通过一步反向PCR技术成功地获得了改造psE380载体,该技术为载体的相关改造提供了一种方便可行的方法.     

乳果糖联合培菲康预防肝硬化自发性细菌性腹膜炎的疗效观察

目的 探讨乳果糖联合培菲康预防肝硬化自发性细菌性腹膜炎(SBP)的疗效.方法 选择肝硬化失代偿期患者186例,随机分为乳果糖与培菲康联合治疗组和常规抗生素治疗组各93例,住院期间同时予以护肝利尿及对症支持治疗,用药3个月进行观察,并采集腹水样本,采用ELISA方法进行TNF-α和IL-6的检测.结果 肝硬化患者应用乳果糖与培菲康联合治疗组SBP发生率为12.9％,而常规抗生素治疗组SBP发生率为21.5％,二者间比较差异有统计学意义(P＜0.05).SBP发生患者腹水TNF-α的水平为(1650±126) pg/mL,而未发生SBP为(1312±289) pg/mL,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).SBP发生患者腹水IL-6的水平为(2566±138) pg/mL,而未发生SBP患者中为(924±251) pg/mL,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 肝硬化患者应用乳果糖联合培菲康可显著降低SBP的发生率.腹水TNF-α和IL-6的水平可监测肝硬化患者SBP的发生.     

线蚓科分类学研究进展

线蚓科隶属于环节动物门环带纲,迄今共记录32属650余种,是该纲的第二大科。它们广泛分布于土壤、海洋、淡水、河口和冰川等。其中,约2/3的线蚓科物种(近500种)为陆生种类,100余种仅分布在海洋中。尽管经历了200多年的探索,线蚓科仍然是认知最少的类群之一。尝试回顾人类对线蚓科环带动物分类学和系统发育学方面的认知历程和积累的知识体系,描述线蚓科关键的形态学分类特征以及线蚓科分类研究遇到的主要问题和障碍,展望了线蚓科分类学未来的研究方向。线蚓科的分类研究尚处于α分类阶段,体现在以物种探索为主和大量的已描述的物种需要验证等。而基于生物学物种概念(生殖隔离)的线蚓科物种探索,虽然有一些合理的逻辑解释,但缺乏严格的科学验证。线蚓科内多数属为复系,表明已建立的线蚓科分类系统仍然不能很好的反映线蚓科的自然进化历史。线蚓科分类面临的主要问题和障碍是未描述种类亟待发掘、已描述的物种需要验证、属/种的厘定以及现代属级概念的建立、DNA分类在线蚓科的应用和线蚓科内的系统发育关系研究亟待开展,以及物种探索的不平衡、经费和研究人才匮乏以及网络分类的缺失等。将分子学数据和系统发育物种概念纳入线蚓科的分类学研究,应该是线蚓科分类的一个方向。通过解读保守基因的信息,可以揭示线蚓科的祖先与它们生活的古环境长期斗争的历史,以及将优良的性状遗传给后代的过程和驱动力。而系统发育物种概念认为物种是拥有共同祖先的,物种仅能通过生殖隔离与系统发育重建一起加以验证。基于系统发育物种概念而构建的线蚓科分类系统,必将能真实的反映线蚓科内各分类单元的亲缘关系和进化轨迹。而将最新的线蚓科分类学知识传播于分类学知识的终端使用者,是线蚓分类学家的职责。这些知识将有助于提高人们对线蚓类在生态系统中功能的了解,如土壤有机质分解、养分矿化和健康评价以及评估气候变化等。     

山木通的化学成分研究

目的：对毛茛科铁线莲属植物山木通的化学成分进行提取、分离和鉴定。方法：用不同浓度乙醇提取,利用硅胶、SephadexLH-20、ODS柱色谱法对山木通的化学成分进行分离,根据理化性质和MS、NMR光谱数据进行结构鉴定。结果：经鉴定得到7个化合物,分别为β-谷甾醇（Ⅰ）;正二十二烷（Ⅱ）;3-羰基齐墩果烷（Ⅲ）;正十六烷酸（Ⅳ）;正二十六烷酸（Ⅴ）;丁香酸（Ⅵ）;5-羟基4-氧代戊酸（Ⅶ）。结论：所得化合物均为首次从该种植物中得到。