蔓茎堇菜总黄酮提取工艺初探

分别采用热水浸提法、甲醇浸提法和乙醇浸提法来提取蔓茎堇菜样品的总黄酮,并以芦丁为标准品,用紫外分光光度法在265nm处测定各提取液的总黄酮含量。结果表明,甲醇浸提法和乙醇浸提法显著优于热水浸提法,而用70％乙醇为提取溶剂时效果最佳。研究结果可为利用蔓茎堇菜工业化生产黄酮类药用成分提供科学依据。     

渗透胁迫对花生幼叶细胞性氧伤害的定量分析

在渗透胁迫条件下不同花生（Arachis hypogaea Linn．）品种的水势、质膜相对透性（RPMP）、超氧离子、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性两两之间都呈显著相关。而花生各品种的过氧化氢酶活性、过氧化物酶活性、谷胱甘肽含量和抗坏血酸含量与水势、RPMP、超氧离子、MDA含量和SOD活性等指标之间相关程度波动较大。水势对RPMP、MDA含量、超氧离子和SOD活性的弹性系数处于负效应阶段。SOD活性对RPMP、MDA含量和超氧离了的弹性系数的效应处于递减阶段。超氧离了对RPMP和MDA含量的生系数的效应处于递减阶段。各指标的弹性系数和相应的边际量因花生品种的抗旱能力不同而异。     

栗精碱对棉铃虫中肠组织可溶型海藻糖酶的抑制效应

【目的】研究一种植物源化合物栗精碱对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)5龄幼虫中肠组织可溶型海藻糖酶的活体和离体抑制效果,初步探索其抑制作用。【方法】经过离子交换层析和疏水层析从棉铃虫5龄幼虫中肠组织分离纯化得到可溶型海藻糖酶,通过凝胶过滤层析确定其分子量。分别用不同浓度的抑制剂进行离体和活体抑制研究,得出栗精碱对可溶型海藻糖酶的抑制率和抑制中浓度(IC50),并采用Lineweaver-Burk和Dixon作图法分析抑制类型。【结果】棉铃虫中肠可溶型海藻糖酶比活力为2.022 U/mg,回收率为67.57%,纯化倍数为23.84,分子量约为67 k Da。离体抑制研究表明,3.75,7.5,15和30μmol/L的栗精碱对可溶型海藻糖酶的抑制率分别为42.00%,50.30%,58.32%和67.33%;抑制中浓度(IC50)为7.32μmol/L。通过LineweaverBurk和Dixon作图法,确定栗精碱是棉铃虫中肠组织可溶型海藻糖酶的一种有效的竞争性抑制剂,Ki值为4.9μmol/L。活体抑制研究表明,分别注射浓度为30,15和7.5μmol/L栗精碱10和20 h后,棉铃虫中肠可溶型海藻糖酶活性被显著抑制(P0.05)。相应地,注射后随着时间的延长,血淋巴海藻糖含量连续增加。而注射栗精碱20 h后,血淋巴葡萄糖浓度显著下降,使棉铃虫的能量供给出现障碍。【结论】结果表明,栗精碱是棉铃虫中肠可溶型海藻糖酶的一种有效的抑制剂,可为下一步开发有效的棉铃虫杀虫剂提供理论支持。     

棉铃虫可溶型海藻糖酶的化学修饰

【目的】本研究旨在通过分析化学修饰剂对棉铃虫Helicoverpa armigera可溶型海藻糖酶活性的影响,以明确海藻糖酶活性中心的结构特点和氨基酸构成。【方法】采用化学修饰方法,测定不同修饰剂处理后棉铃虫5龄幼虫海藻糖酶催化活性的变化,进而通过化学修饰反应失活常数来推测酶活性中心的特定氨基酸残基数量。【结果】采用8 mmol/L水溶性碳二亚胺(carbodiimide,EDC)溶液和25 mmol/L苯甲酰甲醛(phenylglyoxal,PG)溶液分别对棉铃虫5龄幼虫海藻糖酶羧酸基团和精氨酸残基进行修饰后,其活性分别减少81.58%和54.14%,这表明对羧酸基团和精氨酸残基的修饰可有效抑制海藻糖酶活性。底物海藻糖可保护海藻糖酶不受修饰剂的影响。修饰动力学结果显示,海藻糖酶活性中心可能包含1个羧酸基团和2个精氨酸残基。【结论】结果表明,含有羧基的谷氨酸和天冬氨酸是海藻糖酶活性中心的催化残基,精氨酸是维持海藻糖酶活性的必要残基。本研究结果可为开发新型农药提供理论支持。     

木立芦荟丛生芽诱导与植株再生

取木立芦荟带节的嫩茎作外植体,培养于附加不同种类和激素浓度的MS培养基上,在附加6－BA2．0mg/L KT1.0mg/L NAA0.4mg/L时,丛生芽诱导效果最佳,数量最多;在附加6－BA1．0mg/L NAA0.2mg/L时,丛生芽长势最好,芽长且健壮,在附加NAA0．4mg／L时,生根效果最佳,当苗高3．0cm以上,根长达2．0cm以上时,打开瓶盖锻炼3d后,移栽于蛭石,河砂,腐叶土＝2：2：1的混合基质土壤中,成活率达93．2％。     

杉木高效再生与基因转化的初步研究

用取自60d龄无菌苗上的杉木茎段为外植体,在MS 6-BA0.75mg/L IBA0.25mg/L培养基中诱导芽分化,丛生芽的诱导率达到95.8％,每个外植体平均有5.2个芽。切取诱导芽单苗,转至MS NAA1.0mg/L培养基上诱导根再生,外植体出根率为91.4％。在此基础上,将杉木茎段与农杆菌AGL1共培养2d,通过在含200mg/L卡那霉素的再生培养基中培养,初步筛选出卡那霉素抗生苗,转化频率为1.1％。     

几种植物源化合物对棉铃虫海藻糖酶活性及相关碳水化合物含量的影响

碳水化合物对昆虫的能量代谢和物质合成具有重要的作用。本研究选用2种一般性生物碱（氢溴酸东莨菪碱和烟碱）以及2种β-葡萄糖苷类化合物（七叶灵和皂角苷）, 研究其在不同浓度下对棉铃虫Helicoverpa armigera (Hübner)幼虫体内海藻糖酶活性及相关碳水化合物代谢的影响。结果表明: 用饲喂法处理3龄幼虫96 h后, 皂角苷对棉铃虫幼虫的活体抑制效果明显, 且随添加物浓度增高, 棉铃虫死亡率上升, 10, 20, 40 g/L浓度下棉铃虫的均重分别是0.194, 0.089和0.034 g, 分别为对照的86.99%, 39.91%和15.24%。对海藻糖酶活性及其相关代谢酶的测定结果表明, 2种苷类化合物显著抑制中肠海藻糖酶活性, 饲喂40 g/L皂角苷的试虫中肠海藻糖酶比活力仅是对照组的54.21%; 饲喂30 g/L七叶灵的试虫中肠海藻糖酶比活力为对照组的83.73%。而2种生物碱类化合物显著抑制血淋巴和脂肪体中海藻糖酶活性, 20 g/L氢溴酸东莨菪碱对棉铃虫血淋巴和脂肪体组织的海藻糖酶活性抑制率分别为7.24%和71.43%; 而20 g/L烟碱对试虫血淋巴和脂肪体组织的海藻糖酶活性抑制率为26.29%和33.44%。用氢溴酸东莨菪碱、 烟碱和七叶灵处理试虫后, 血淋巴海藻糖含量都有所增高。4种化合物能够导致试虫糖原磷酸化酶活性变化, 其中, 皂角苷在中肠和脂肪体表现为显著抑制作用, 而随外源化合物浓度变化, 糖原含量和糖原磷酸化酶活性表现为此消彼长关系。饲喂4种植物源化合物的试虫血淋巴中葡萄糖浓度变化和其海藻糖变化一致。本研究证明β-葡萄糖苷类化合物是海藻糖酶抑制剂, 在作为先导化合物进行农药创制开发方面具有重要意义。     

农杆菌介导白藜芦醇合酶基因转化蔓茎堇菜的研究

目的:通过农杆菌介导法将白藜芦醇合酶基因转化蔓茎堇菜,并对转化条件进行优化.方法:以蔓茎堇菜叶柄为受体材料,采用叶盘法进行遗传转化,实验过程中对影响转化的一些主要因素进行筛选研究.结果:最佳的侵染条件为OD6000.3的菌液侵染10min,头孢霉素的适宜浓度为250mg/L.转化后的蔓茎堇菜外植体经3.0mg/L潮霉素筛选,最终得到9株抗性再生苗,转化频率为0.98%.结论:该研究为建立一个农杆菌介导白藜芦醇合酶基因转化蔓茎堇菜的遗传体系提供了基础.     

NaCl胁迫对萝卜幼苗叶片生理特征及根尖细胞核形态的影响

对0.00(对照)～0.50 mol·L-1NaCl处理48 h后萝卜(Raphanus sativus L.)幼苗叶片的叶绿素含量、净光合速率、丙二醛(MDA)含量和相对电导率进行了测定,并观察了根尖细胞核形态变化和胁迫后幼苗生长的恢复状况.测定结果表明:经0.05 mol·L-1NaCl处理后,叶片的叶绿素含量和净光合速率均高于对照(0.00 mol·L-1 NaGl);而用0.10～0.50mol·L-1NaCl处理后,叶绿素含量和净光合速率均随NaCl浓度的提高逐渐降低且与对照差异显著,其中,经0.35 ～ 0.50 mol·L-1 NaCl胁迫处理后叶片净光合速率降至0.00μmol·m-2·s-1.随NaCl浓度的提高,MDA含量和相对电导率呈先快速上升而后逐渐下降的趋势,且均与对照差异显著;其中,经0.30 mol·L-1 NaCl处理后MDA含量最高,经0.40 mol·L-1NaCl处理后相对电导率最高.观察结果显示:经0.05～0.25 mol·L-1NaCl处理后根尖细胞核由规则的圆形向各种不规则形状转变,染色质出现不同程度的浓缩,表现出不同程度的程序性细胞死亡特征;经0.30 ～ 0.50 mol·L-1NaCl处理后则出现中空细胞与部分正常细胞并存的现象.经0.05和0.10 mol·L-1 NaCl处理后,萝卜幼苗可恢复正常生长,且株高与对照无明显差异;而经0.25 ～ 0.50 mol·L-1 NaCl处理后,幼苗均较难恢复正常生长,且随NaCl浓度的提高,幼苗出现枯萎、糜烂现象.研究结果显示:低浓度NaCl处理不仅对萝卜幼苗的生长、生理代谢及细胞核形态结构没有明显伤害反而有一定的促进作用,而高浓度NaCl胁迫可导致萝卜幼苗不可逆伤害.     

九种常用杀虫剂对二化螟线粒体ATPase活力的抑制作用

研究了二化螟Chilo suppressalis线粒体Na⁺-K⁺-ATPase和Ca^2＋-Mg^2＋-ATPase的生物化学性质以及9种常用杀虫剂对这两种酶活性的影响。结果表明, 二化螟线粒体Na⁺-K⁺-ATPase和Ca^2＋-Mg^2＋-ATPase的最适反应条件为pH值7.4,温度37℃。 Na⁺-K⁺-ATPase的米氏常数（Km）为0.42 mmol/L,最大反应速度（Vmax）为302.47 nmol/(min·mg) 。Ca^2＋-Mg^2＋-ATPase的Km为0.40 mmol/L,Vmax为128.04 nmol/(min·mg)。药剂浓度为1×10^-4 mol/L时,5种菊酯类杀虫剂对离体ATPase活性抑制的顺序为：溴氰菊酯>联苯菊酯>百树菊酯>三氟氯氰菊酯和氟硅菊酯;对二化螟Na⁺-K⁺-ATPase的抑制率分别为40.12％、39.69％、27.27％、19.49％和18.71％;对Ca^2＋-Mg^2＋-ATPase的抑制率分别为29.27％、23.78％、19.88％、11.64%和14.34％。硫丹对二化螟Na⁺-K⁺-ATPase和Ca^2＋-Mg^2＋-ATPase的抑制率均为17.46％。甲胺磷和呋喃丹对Ca^2＋-Mg^2＋-ATPase的抑制率分别为27.16％和17.42％,对Na⁺-K⁺-ATPase则几乎没有抑制作用。实验结果还表明, 在1.6×10^-7～1×10^-4 mol/L的浓度范围内,上述9种杀虫剂对二化螟ATPase活性的抑制率存在明显的剂量-效应关系。