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酵母双杂交技术研究与人孕酮受体B相互作用的蛋白质 总被引:3,自引:0,他引:3
应用酵母双杂交技术研究与人孕酮受体B(hPRB)发生相互作用的蛋白质,有助于进一步阐明其在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用的调控机制。应用酵母双杂交系统3,以hPRB不同结构域为诱饵,筛选人乳腺cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质,并运用X—α—Gal等实验提供的信息,筛除假阳性克隆。最终以AF1-DBD结构域作为诱饵最终筛出了1个阳性克隆,经测序及生物信息学分析,这个克隆所编码的蛋白为PIAS3(活化的STAT3的蛋白抑制剂)。结果表明,孕激素受体可以和PIAS3发生相互作用,它们的相互作用有可能参与乳腺癌的生长调控。 相似文献
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取8周后的雌性昆明小鼠进行超排,取卵母细胞用作核受体,收集卵母细胞周围的卵丘细胞作核供体,进行体细胞核移植。核移植重构胚经SrCl2激活处理6h后,与改良的M16培养液和小鼠输卵管上皮细胞共培养;将发育到早期囊胚阶段的重构胚转移至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,添加含心肌细胞培养液的ES细胞培养液;把孵出的ICM进行消化接种培养,对孵出的ES细胞集落进行鉴定培养。结果显示,以小鼠卵丘细胞为核供体,体细胞核移植重构胚激活率为65.23%,囊胚发育率为11.69%;9个核移植重构囊胚中分离出ES细胞集落,分离率为2.77%;分离出的核移植ES细胞集落具有岛屿状团状隆起结构、碱性磷酸酶染色呈阳性,体外分化可形成类胚体,并能分化成上皮样或梭形细胞。ES细胞集落经常规冻存和复苏后,显示出同冻存前相似的集落形态,并具有较强的增殖能力。实验证实小鼠输卵管上皮细胞、改良的M16培养液及含心肌细胞培养液的ES细胞培养液可以更为成功地运用于小鼠的体细胞核移植及ES细胞的分离培养研究。 相似文献
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SOEing法在构建人瘦蛋白乳腺表达载体中的应用 总被引:2,自引:1,他引:1
目的 :将奶牛CSN2 5′端启动子区与人瘦蛋白cDNA序列进行拼接 ,进而构建人瘦蛋白乳腺特异性表达载体。方法 :设计特殊的“巨型引物” ,运用PCR方法分别从质粒pBBC和pHL上扩增了牛CSN2 5′端启动子 ( 2 8kb)和有完整读码框的人瘦蛋白基因。利用改进的重叠区扩增基因拼接法 (SOEing法 ) ,将两个独立的片断进行了拼接。结果 :得到了两者线形融合基因 ,为构建人瘦蛋白乳腺特异性表达载体打下了基础。 相似文献
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HBD-3基因的乳腺特异性表达载体的构建及真核表达 总被引:2,自引:0,他引:2
为了制备高效表达人β-防御素-3基因的转基因奶牛提供可靠的核移植供体细胞,本试验采用RT-PCR从人胎盘组织获得人β-防御素3cDNA,通过双酶切法将目的基因片段hBD插入到质粒pBCP之间,最后再通过双酶切法将目的片段BCD插入到真核表达载体pEGFP-C1中,最终构建乳腺特异性表达载体pEBCD。脂质体介导法转染奶牛胎儿成纤维细胞G418,抗性筛选3~4周后,经PCR、RT-PCR扩增检测和报告基因EGFP表达检测,得到稳定整合外源基因的转基因供体细胞;同时检测稳定转染的奶牛乳腺上皮细胞系的上清液,检测到重组人β-防御素-3蛋白可以在奶牛乳腺上皮细胞组织特异性表达。 相似文献
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共培养对小鼠囊胚质量及其表观遗传修饰的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究探讨了共培养对小鼠囊胚质量及其表观遗传修饰的影响。将小鼠的受精卵体外随机分别置于含颗粒细胞(试验组I)、输卵管上皮细胞(试验组Ⅱ)、输卵管组织块(试验组Ⅲ)的KSOM培养液中作为试验组进行共培养,同时设立对照组A(体外培养,仅含KSOM)和对照组B(体内培养)。比较各组受精卵的卵裂率和囊胚发育率;并应用碘化丙啶和Hoechest333258对囊胚进行染色,利用ICM/TE值评价各组胚胎体外发育的质量;同时将囊胚进行免疫荧光染色,观察其基因组甲基化和组蛋白乙酰化的水平。结果表明,与对照组A相比,试验组的卵裂率和囊胚发育率均有显著提高(P<0.05);同时其囊胚细胞数目及内细胞团细胞数与滋养层细胞数比值(ICM/TE)值均显著高于对照组A(P<0.05);各试验组囊胚基因组甲基化水平与对照组A差异不显著(P>0.05),但各体外培养组均与对照组B差异显著(P<0.05);试验组组蛋白乙酰化水平与对照组A、B差异均不显著(P>0.05)。共培养能够有效促进小鼠胚胎的体外发育,提高囊胚的发育质量,但是仍不能克服由体外培养造成的基因组甲基化异常。 相似文献
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早期小鼠胚胎发育的基因表达 总被引:5,自引:0,他引:5
受精是新个体发育的时 -空点 ,从一个形态单纯的单细胞受精卵发育成能独立生活的个体动物 ,形态上出现一系列的变化 ,而更重要的是基因表达。基因组是机体内惟一确定的 ,为所有各类细胞共同拥有 ,但基因组内各个基因表达的选择性和程度随时间、位置和环境条件的不同而发生改变 (严云勤等 ,2 0 0 2 ;胡静等 ,2 0 0 1;范衡宇等 ,2 0 0 1)。个体的发育和分化、内环境的稳定性、对外界刺激的应答、细胞循环的调节、衰老和程序化细胞死亡等正常的发育过程以及疾病的病理学过程 ,包括癌症的病理学过程 ,无论是由一个基因的突变引起的或是由于多基… 相似文献
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Cloned goats (Capra hircus) from adult ear cells 总被引:11,自引:0,他引:11
The average number of available oocytes recovered per ovary collected during the breeding season in dairy goats was 5.5 (1815/330). 66.17% (1201/1815) of oocytes extruded the first polar body after maturation in vitro for 20 h. 75.44% (906/1201) of matured oocytes with membrane evagination around the MII chromosomes were enucleated. Ear skin fibroblast cells were derived from an adult female dining Grey goat (C. hircus). The cells were cryopreserved in liquid nitrogen after passage 2. Thawed cells were further cultured for 3-6 passages and were subjected to serum starvation by 0.5% FBS for 2-10 d, then used as donor cells for nuclear transfer. 98.12% (889/906) of the enucleated oocytes were reconstructed by intracytoplasmic injection of karyoplast. The reconstructed embryos were activated by 5μ mol/L ionomycin for 4.5 min and further activated by culturing with 6-dimethylaminopurine (6-DMAP) for 3 h. After 36 h of culture in mCR1aaBF, 76.69% (645/841) of the cloned embryos cleaved. There were no signifi 相似文献
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使用Cy3标记的阴性对照小干扰RNA(siRNA)转染小鼠附植前胚胎,建立向小鼠附植前胚胎导入siRNA的电穿孔方法。通过控制透明带弱化程度、电压、脉冲时间和脉冲次数等条件,采用不同参数组合并结合使用不同介质作为电转缓冲液将Cy3标记的阴性对照siRNA转染小鼠附植前胚胎。在荧光倒置显微镜下,观察胚胎的存活率、siRNA转染率以及阳性转染存活胚胎的囊胚发育率。结果显示小鼠附植前胚胎在使用台氏液消化胚胎透明带10 s后,以opti-MEM作为电转缓冲液,电穿孔参数设置为30 V,1 ms,3次的条件下取得最佳转染效果。总之,电穿孔方法可实现siRNA简便、高效地转染小鼠附植前胚胎。 相似文献